山羊circFDXR的鉴定及其在卵巢颗粒细胞中高效表达的研究

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作者 刘杰 李之瀚 +9 位作者 郭聪慧 冯光杭 薛文哲 刘德武 柳广斌 孙宝丽 郭勇庆 邓铭 邹娴 李耀坤 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2330-2341,共12页

【目的】鉴定山羊环状RNA(circular RNA,circRNA)铁氧还蛋白还原酶(circFDXR)的表达,建立其在山羊原代卵巢颗粒细胞中的高效表达方式。【方法】利用PCR扩增、DNA测序、RNase R酶消化、实时荧光定量PCR鉴定circFDXR的环状性质。通过核质... 【目的】鉴定山羊环状RNA(circular RNA,circRNA)铁氧还蛋白还原酶(circFDXR)的表达,建立其在山羊原代卵巢颗粒细胞中的高效表达方式。【方法】利用PCR扩增、DNA测序、RNase R酶消化、实时荧光定量PCR鉴定circFDXR的环状性质。通过核质分离、荧光原位杂交(FISH)检测circFDXR亚细胞定位。利用同源重组将circFDXR的线性序列无缝克隆至慢病毒载体pLC5-ciR,转染至293T细胞包装病毒后进行病毒滴度测定,并确定最佳感染复数(MOI),并以最佳MOI感染山羊原代卵巢颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR检测过表达效率,并测序验证circFDXR是否正确环化。【结果】山羊circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,耐受RNase R酶的消化。成功构建circFDXR慢病毒过表达载体,浓缩病毒滴度为5.49×10~9 TU/mL,感染山羊卵巢颗粒细胞的最佳MOI为100。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,过表达组circFDXR表达量极显著升高(P<0.01),测序结果显示过表达的circFDXR可以正确环化。【结论】circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,相比线性RNA具有更高的稳定性。利用慢病毒包装的circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中可以正确环化,本试验结果为进一步研究circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中的功能奠定了理论基础。 展开更多

关键词 山羊 circFDXR 慢病毒包装 卵巢颗粒细胞

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miR-144-5p靶向WNT5a对山羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响 被引量：3

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作者 刘杰 许香萍 +7 位作者 邓铭 邹娴 江声伟 刘德武 柳广斌 孙宝丽 郭勇庆 李耀坤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2421-2435,共15页

旨在探究miR-144-5p靶向WNT5a对山羊颗粒细胞增殖和凋亡的影响。本研究选用2岁健康雷州母山羊的卵巢颗粒细胞来过表达和抑制表达miR-144-5p及WNT5a,通过荧光定量PCR(real-time qPCR, RT-qPCR)、Western blot、双荧光素酶报告基因、CCK-... 旨在探究miR-144-5p靶向WNT5a对山羊颗粒细胞增殖和凋亡的影响。本研究选用2岁健康雷州母山羊的卵巢颗粒细胞来过表达和抑制表达miR-144-5p及WNT5a,通过荧光定量PCR(real-time qPCR, RT-qPCR)、Western blot、双荧光素酶报告基因、CCK-8等技术来探究miR-144-5p与WNT5a对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。结果表明,miR-144-5p在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著高于小卵泡颗粒细胞(P<0.01),WNT5a在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著低于小卵泡颗粒细胞(P<0.01);CCK-8检测发现,miR-144-5p抑制了GCs增殖,过表达miR-144-5p后,抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达极显著下调(P<0.01),促凋亡基因BAX的mRNA和蛋白表达极显著上调(P<0.01);Wnt/β-Catenin通路CTNNB1 mRNA和β-Catenin蛋白水平极显著降低(P<0.01);另外,miR-144-5p能靶向WNT5a抑制其表达。同时,CCK-8检测结果表明,WNT5a可促进GCs增殖,过表达WNT5a后,抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白水平极显著上调(P<0.01),促凋亡基因BAX的mRNA显著下调(P<0.05)、蛋白水平极显著下调(P<0.01),Wnt/β-Catenin通路CTNNB1 mRNA和β-Catenin蛋白水平极显著提高(P<0.01)。综上所述,在GCs中,miR-144-5p靶向负调控WNT5a的表达,调控Wnt/β-Catenin通路,进而上调BAX/BCL-2的比值来抑制颗粒细胞增殖并促进其凋亡,这可能对山羊的排卵数和产羔数产生一定的影响。 展开更多

关键词 颗粒细胞 miR-144-5p WNT 5a 山羊 繁殖

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猪催乳素的真核表达与生物活性验证 被引量：1

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作者 谢社风 韩贝贝 +5 位作者 高凤磊 马莹 李莉 张守全 邹娴 卫恒习 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期179-189,共11页

【目的】催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理调节作用,但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性,本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MC... 【目的】催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理调节作用,但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性,本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro中,经慢病毒包装获得携带猪PRL基因的PRL-慢病毒;用浓缩的PRL-慢病毒感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选后,获得能够分泌PRL重组蛋白的阳性细胞系CHO-K1-PRL;利用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化并进行LC-MS/MS质谱鉴定,利用HC11细胞体外培养体系验证PRL重组蛋白的生物活性。【结果】成功构建了携带猪PRL基因的pCDH-CMV-6His-PRL-6HisEF1-GFP+Puro慢病毒表达载体;包装及浓缩后的PRL-慢病毒滴度为9.9×10^(8) TU/mL,其感染的CHO-K1细胞经嘌呤霉素筛选后得到阳性细胞系CHO-K1-PRL;从CHO-K1-PRL细胞培养液中成功纯化出重组蛋白,质量浓度为50μg/mL,LC-MS/MS质谱分析的覆盖率达94%,鉴定为猪PRL重组蛋白;重组PRL具有促进HC11细胞增殖及酪蛋白表达的生物活性。【结论】构建的细胞系CHO-K1-PRL可稳定表达具有生物活性的猪重组PRL,为猪PRL功能的研究和生产应用奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 催乳素 CHO-K1细胞 真核表达 慢病毒载体 重组蛋白

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利用白消安制备公鸡生殖前体细胞移植受体的研究

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作者 何燕华 陈鹏 +3 位作者 符明永 邹娴 刘文华 罗成龙 《广东畜牧兽医科技》 2024年第2期8-15,40,共9页

该试验旨在开发适合制备鸡生殖前体细胞移植受体公鸡的方法。试验选用5-7月龄、体重相近、繁殖性能正常的81只岭南黄公鸡进行试验。试验分两次开展,试验一根据公鸡体重计算白消安用量,试验二不以公鸡体重来计算白消安用量,而是每组固定... 该试验旨在开发适合制备鸡生殖前体细胞移植受体公鸡的方法。试验选用5-7月龄、体重相近、繁殖性能正常的81只岭南黄公鸡进行试验。试验分两次开展,试验一根据公鸡体重计算白消安用量,试验二不以公鸡体重来计算白消安用量,而是每组固定白消安用量。通过分析注射白消安后第15天、30天、45天或60天公鸡的血常规指标、体重、睾丸重、死亡率、曲精细管直径、周长和面积及生育能力,评价白消安直接注射到年轻公鸡睾丸中制备鸡生殖前体细胞移植受体方法的效果。试验一结果表明,注射白消安后第15天仅有1只注射量为1.2 mg/kg的公鸡睾丸部分曲精细管内出现生精细胞减少现象,对血常规指标、死亡率、睾丸大小和重量以及受精率均无影响,而其他鸡只与对照组相比无明显变化。试验二结果表明,公鸡睾丸注射30-50mg/单侧白消安后第15和30天,睾丸大小、重量明显变小,第30天后组织切片分析显示睾丸内精曲细管膜底部和腺腔排空,第45天注射量为30-40mg/单侧的公鸡睾丸内大部分精原干细胞可以恢复,白消安注射组在第15-45天公鸡配种后受精率明显下降,但整个过程中公鸡体重和血常规指标无显著影响。综上表明,公鸡睾丸注射白消安可以清除内源性精原干细胞,且睾丸正常生理生殖功能不受影响,注射剂量为30-40mg/单侧后第30天,公鸡睾丸内精曲小管膜底部和腺腔排空,此时是注射生殖前体细胞最佳时间。 展开更多

关键词 公鸡 睾丸 白消安 生殖细胞

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黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA在PK15细胞中的分泌表达 被引量：2

5

作者 邹娴 张茂 +5 位作者 许惠 林纯 贺晓燕 刘德武 蔡更元 吴珍芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期192-197,共6页

通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得... 通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSmanA。重组质粒经过PCR、酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且读码框完全正确。在脂质体介导下将pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达,通过RT-PCR方法证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测酶活性得到β-甘露聚糖酶基因酶活性为14.5 IU/mL。 展开更多

关键词 黑曲霉 Β-甘露聚糖酶 重叠延伸PCR PK15细胞

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穴位注射治疗不寐的疗效观察 被引量：5

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作者 邹娴 李爱云 《实用中西医结合临床》 2010年第2期52-52,71,共2页

不寐是临床常见病,也称失眠,流行病学调查结果发现,我国一般人群中有10%～20%患有失眠,而国外报道高达30%～35%,严重地影响患者的精神、生活、工作及家庭。临床上常用的镇静、抗焦虑药存在一定的依赖性及副作用，而使用穴位注射治疗不... 不寐是临床常见病,也称失眠,流行病学调查结果发现,我国一般人群中有10%～20%患有失眠,而国外报道高达30%～35%,严重地影响患者的精神、生活、工作及家庭。临床上常用的镇静、抗焦虑药存在一定的依赖性及副作用，而使用穴位注射治疗不寐可取得良好效果。现报道如下： 展开更多

关键词 不寐 穴位注射 疗效 维生素B12

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基于ESP需求分析的商务英语教学模式研究 被引量：7

7

作者 邹娴 《湖北广播电视大学学报》 2010年第10期42-43,共2页

商务英语教学作为ESP教学的一个分支,正得到越来越多的学者们的重视和研究。如何使商务英语ESP教学模式更加科学合理,满足社会需求,是提高商务英语教学质量的关键。本文以需求分析理论为依托,从教学模式的五个方面入手,对高职院校商务英... 商务英语教学作为ESP教学的一个分支,正得到越来越多的学者们的重视和研究。如何使商务英语ESP教学模式更加科学合理,满足社会需求,是提高商务英语教学质量的关键。本文以需求分析理论为依托,从教学模式的五个方面入手,对高职院校商务英语ESP教学模式进行了研究。 展开更多

关键词 ESP教学 需求分析 教学模式

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基于“工学结合”的高职商务英语课程体系构建初探 被引量：2

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作者 邹娴 《湖北广播电视大学学报》 2011年第12期34-35,共2页

随着我国经济建设的迅猛发展和贸易全球化,社会需要大量既具备英语应用能力,又有商务专业知识的复合型人才。基于"工学结合"的商务英语课程体系就是以就业为导向,以职业能力培养为核心,在动态调整和全面优化原有体系的基础上... 随着我国经济建设的迅猛发展和贸易全球化,社会需要大量既具备英语应用能力,又有商务专业知识的复合型人才。基于"工学结合"的商务英语课程体系就是以就业为导向,以职业能力培养为核心,在动态调整和全面优化原有体系的基础上,构建以"市场需求为导向、职业能力为本位、职业资格证书为依托、理论与实践一体化"的课程体系,从而培养出高技能、高素质的商务英语复合型人才,满足社会需求,体现办学特色。 展开更多

关键词 工学结合 商务英语 课程体系

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RNAi技术在转基因猪中的应用研究进展

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作者 邹娴 徐志谦 +2 位作者 吴珍芳 李剑豪 蔡更元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期153-156,共4页

RNAi技术介导的转基因小鼠的出现,预示着在哺乳动物整体水平上研究靶基因的敲除成为可能。目前,针对家畜这一类较大的动物,出现了RNAi技术介导的转基因猪,为应用RNAi技术培育抗猪病毒新品种奠定基础。文章以RNAi转基因猪为代表,阐述了R... RNAi技术介导的转基因小鼠的出现,预示着在哺乳动物整体水平上研究靶基因的敲除成为可能。目前,针对家畜这一类较大的动物,出现了RNAi技术介导的转基因猪,为应用RNAi技术培育抗猪病毒新品种奠定基础。文章以RNAi转基因猪为代表,阐述了RNAi技术在哺乳动物细胞中特殊的现象及最有应用前景之一的抗病毒逃逸方法,并详细介绍了RNAi技术在抗病转基因猪中的研究进展。 展开更多

关键词 RNAI 转基因猪 抗病

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冬病夏治穴位注射治疗哮喘67例 被引量：4

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作者 邹娴 《江西中医药》 2010年第6期48-48,共1页

关键词 支气管哮喘 卡介苗穴位注射 穴位注射

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基于项目教学的高职教师教学胜任力提升策略研究 被引量：1

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作者 邹娴 《湖北广播电视大学学报》 2013年第1期27-28,共2页

高等职业教育课程模式改革的主要发展方向是课程项目化。项目化课程教学以"职业能力培养"为导向,要求教师必须具备课程项目开发、教学设计实施、协作创新、实践指导迁移、评价反思等教育教学能力。科学的教育引导、针对性的... 高等职业教育课程模式改革的主要发展方向是课程项目化。项目化课程教学以"职业能力培养"为导向,要求教师必须具备课程项目开发、教学设计实施、协作创新、实践指导迁移、评价反思等教育教学能力。科学的教育引导、针对性的培训、密切的校企合作、完善的评价和激励机制是促进教师教学胜任力提高的有效途径。 展开更多

关键词 项目教学 教学胜任力 策略研究

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斯坦贝克在《愤怒的葡萄》中的生态理念 被引量：1

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作者 邹娴 《现代语文（上旬．文学研究）》 2015年第12期50-51,共2页

约翰·斯坦贝克是美国20世纪伟大的文学家,获得了1962年的诺贝尔文学奖。他所创作的小说《愤怒的葡萄》被认为是他所有小说当中最优秀的作品,并因此获得了普利策文学奖,这部小说被誉为改变美国的二十本书之一。文章对《愤怒的葡萄... 约翰·斯坦贝克是美国20世纪伟大的文学家,获得了1962年的诺贝尔文学奖。他所创作的小说《愤怒的葡萄》被认为是他所有小说当中最优秀的作品,并因此获得了普利策文学奖,这部小说被誉为改变美国的二十本书之一。文章对《愤怒的葡萄》进行研究分析,探讨它蕴含的生态理念。 展开更多

关键词 《愤怒的葡萄》 约翰·斯坦贝克 生态理念 和谐关系

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英汉委婉语的比较 被引量：1

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作者 邹娴 《中国科教创新导刊》 2007年第25期116-116,共1页

委婉语作为一种交际工具,在人们的日常交往过程中被得到了广泛的应用。从其表现手段、构成原则、使用范围和表达方式等四个方面,对英汉两种语言中常见的委婉语加以比较。对比分析了英汉委婉语的之间的相同与差异之处。从而分析得出英汉... 委婉语作为一种交际工具,在人们的日常交往过程中被得到了广泛的应用。从其表现手段、构成原则、使用范围和表达方式等四个方面,对英汉两种语言中常见的委婉语加以比较。对比分析了英汉委婉语的之间的相同与差异之处。从而分析得出英汉两种语言上的异同之处,使人们更加深入了解这两种语言和文化。 展开更多

关键词 委婉语 比较 英语 汉语

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女性更年期综合征中医护理之我见 被引量：1

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作者 邹娴 《江西中医药》 1995年第S3期77-78,共2页

女性更年期综合征中医护理之我见邹娴（江西医学院第二附属医院３３０００６）关键词女性，更年期综合征，中医护理女性更年期综合征是妇科常见病之一，中西医治疗都有一定效果，但以医护结合治疗效果较好。笔者仅以中医护理略述粗浅之... 女性更年期综合征中医护理之我见邹娴（江西医学院第二附属医院３３０００６）关键词女性，更年期综合征，中医护理女性更年期综合征是妇科常见病之一，中西医治疗都有一定效果，但以医护结合治疗效果较好。笔者仅以中医护理略述粗浅之见：１心理疏导护理由于妇女更年期综... 展开更多

关键词 女性 更年期综合征 中医护理

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影响山羊胎儿肌肉发育mRNA和lncRNA的鉴定与分析 被引量：4

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作者 叶峻宁 邓铭 +6 位作者 薛慧雯 柳广斌 邹娴 孙宝丽 郭勇庆 刘德武 李耀坤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期989-1002,共14页

旨在分析雷州山羊胎儿70、90及120天背最长肌转录组测序中的差异表达mRNAs和lncRNAs及其靶基因,对差异表达基因进行功能富集分析,挖掘影响雷州山羊胎儿骨骼肌发育的关键候选基因。本研究选用年龄约2.5~3.5岁,饲养状况相同,健康无病,体... 旨在分析雷州山羊胎儿70、90及120天背最长肌转录组测序中的差异表达mRNAs和lncRNAs及其靶基因,对差异表达基因进行功能富集分析,挖掘影响雷州山羊胎儿骨骼肌发育的关键候选基因。本研究选用年龄约2.5~3.5岁,饲养状况相同,健康无病,体重接近的雷州母山羊,分为妊娠期70、90和120天3组,每组各3只共9只,提取其胎儿背最长肌的RNA构建文库后使用Illumina HiSeqTM2500进行转录组测序,以Q<0.05为阈值筛选出差异mRNAs和lncRNAs并进行生物学功能富集分析及构建靶向关系网络。最后通过荧光定量PCR鉴定差异基因表达水平,验证测序结果的可靠性。结果发现,在M70 vs.M90组中,总共发现185个差异表达mRNAs,其中170个上调,15个下调,62个差异表达lncRNAs,40个上调,22个下调;在M120 vs.M90组中,共发现1048个差异表达mRNAs,666个上调,382个下调,352个差异表达lncRNAs,175个上调,177个下调。其中TNNT3、TNNI1、TNNT1、TNNI2、ITGA4、ITGA11、ITGB4等基因参与肌肉发育相关的调控通路如肌钙蛋白复合物、肌丝、粘附斑、ECM-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路等。根据lncRNA与mRNA的位置关系进行cis靶基因预测,总共筛选到37464个靶基因,有10个差异表达mRNAs被差异表达lncRNA靶向,其中NDUFB2、BRAF、METTL7B和ITGA7参与粘着斑以及肌动蛋白细胞骨架的调控,METTL7B和ITGA7还参与PI3K-Akt信号通路,lncRNA TCONS_00214300靶向METTL7B和ITGA7。同时,8个差异表达mRNAs和lncRNAs的RT-PCR结果显示,8个基因的表达水平与转录组测序的表达趋势相似,说明测序结果可靠。结果显示,发现了影响雷州山羊胎儿肌肉发育的mRNA与lncRNA,发现了一些差异表达lncRNA和mRNA可能存在调控关系,对了解雷州山羊胎儿肌肉发育的分子调控机制提供了新的参考,也为雷州山羊分子选育提供了理论借鉴。 展开更多

关键词 雷州山羊 MRNA lncRNA 背最长肌

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白芍总苷合柳氮磺吡啶治疗类风湿性关节炎27例

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作者 邹娴 《江西中医药》 2010年第7期42-42,共1页

类风湿性关节炎是一种以对称性多关节炎为主要临床表现的自身免疫性疾病,病程长,呈进行性加剧,严重危害患者的生存质量,笔者通过长期临床观察发现,单一用药往往疗效欠佳,且副作用较多,难以长期坚持,因此病情常有反复,而成为难治病例,病... 类风湿性关节炎是一种以对称性多关节炎为主要临床表现的自身免疫性疾病,病程长,呈进行性加剧,严重危害患者的生存质量,笔者通过长期临床观察发现,单一用药往往疗效欠佳,且副作用较多,难以长期坚持,因此病情常有反复,而成为难治病例,病人依从性差,而联合用药的方法,可以减少毒副作用的发生,疗效尚好.笔者总结观察到的白芍总苷合柳氮磺吡啶治疗类风湿性关节炎27例情况,现报道如下： 展开更多

关键词 白芍总苷 柳氮磺吡啶 类风湿性关节炎 中西医结合疗法

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风油精穴位按摩用于缓解头痛106例疗效观察 被引量：2

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作者 资晓飞 杨夏玲 +2 位作者 曹正柳 谢庆斌 邹娴 《实用临床医学（江西）》 CAS 2010年第12期7-7,9,共2页

关键词 头痛 风油精 穴位按摩 疗效

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稳定转染纤维素酶相关基因的猪胎儿成纤维细胞系的建立 被引量：1

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作者 黄妙容 张献伟 +5 位作者 刘德武 邹娴 帅亮 袁玉娟 朱财林 吴珍芳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期535-542,共8页

旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体,筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系,为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞。采用SOE-PCR和PCR方法,分别扩增获得筛选标记基因NEO-T2A-EGFP序列和纤维素... 旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体,筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系,为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞。采用SOE-PCR和PCR方法,分别扩增获得筛选标记基因NEO-T2A-EGFP序列和纤维素酶相关基因的融合序列SP-EGX-F2A-BGL1,构建腮腺特异性表达载体pPSP-SP-EGX-F2A-BGL1-CMV-NEO-T2A-EGFP,经PCR、酶切、测序鉴定正确后,通过脂质体转染猪胎儿成纤维细胞,利用G418抗性和绿色荧光蛋白进行稳定筛选,并利用PCR和Western blot进行检测。结果表明,成功构建了带双筛选标记的腮腺特异表达纤维素酶基因的表达载体,并获得稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系。该结果为生产腮腺特异表达纤维素酶的转基因克隆猪研究奠定基础。 展开更多

关键词 双筛选标记 纤维素酶 2A 猪胎儿成纤维细胞

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宇佐美曲霉木聚糖酶在哺乳动物细胞中的分泌表达 被引量：1

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作者 张茂 邹娴 +3 位作者 林纯 刘德武 吴珍芳 蔡更元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期23-27,共5页

本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。... 本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。在脂质体介导下将重组质粒转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测定木聚糖酶酶活,结果显示,重组质粒pcDNA-spna转染细胞后表达的酶活力最高为8.53U/mL,较pcDNA-spnb表达的酶活(6.87U/mL)高24%,实现了微生物基因在哺乳动物细胞的分泌表达,为xyn基因在转基因方面的利用提供了依据。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 木聚糖酶 哺乳动物细胞 分泌表达

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