柱层析法纯化人用地鼠肾细胞狂犬病毒灭活疫苗的研究 被引量：4

1

作者 郑庆纹 李书津 +8 位作者 徐永革 吴强 卓金荣 赵宇 毕伟民 姚刚 姚彩霞 毛秀珍 贾文祥 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期55-58,共4页

目的改进和提高现行人用地鼠肾细胞狂犬病灭活疫苗的纯度和保护效价。方法　将原代地鼠肾细胞 (PHKC)培养并收获的aG株狂犬病毒原液超滤浓缩 40～ 5 0倍 ,再经Sepharose 6FastFlow分子筛柱层析 ,收集完整的病毒颗粒 ,除菌、灭活、添加Al... 目的改进和提高现行人用地鼠肾细胞狂犬病灭活疫苗的纯度和保护效价。方法　将原代地鼠肾细胞 (PHKC)培养并收获的aG株狂犬病毒原液超滤浓缩 40～ 5 0倍 ,再经Sepharose 6FastFlow分子筛柱层析 ,收集完整的病毒颗粒 ,除菌、灭活、添加Al (OH) 3 佐剂制成纯化地鼠肾细胞狂犬病毒疫苗。结果　浓缩狂犬病毒经过柱层析纯化 ,抗原比活性较纯化前平均提高 2 9 5 4倍 ,纯化效果平均达到 96 1% ,疫苗效力平均达到 2 98IU/ml,其余检测结果均符合现行有关规程。结论　凝胶分子筛柱层析技术 。 展开更多

关键词 狂犬病毒 柱层析 纯化 疫苗

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流行性乙型脑炎SA_(14)-14-2弱毒株在狗胎肾细胞传代适应的研究 被引量：4

2

作者 王寿贵 俞永新 +3 位作者 郑庆纹 张大全 贾丽丽 李玉华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1992年第2期49-51,共3页

流行性乙型脑炎SA_(14)-14-2弱毒株经原代狗胎肾细胞连续传递4代以后,其病毒滴度稳定在7.5～8.0 log TCID_(50)/0.2ml。传代后的各代病毒(命名为 SA_(14)-14-2PDK-CD)对三周龄小鼠脑内无毒力、皮下无致病力、弱毒力稳定性和免疫原性等... 流行性乙型脑炎SA_(14)-14-2弱毒株经原代狗胎肾细胞连续传递4代以后,其病毒滴度稳定在7.5～8.0 log TCID_(50)/0.2ml。传代后的各代病毒(命名为 SA_(14)-14-2PDK-CD)对三周龄小鼠脑内无毒力、皮下无致病力、弱毒力稳定性和免疫原性等特性与原 SA_(14)-14-2 株相同。以该株病毒和原代狗肾细胞制备的活疫苗,经全面检定完全符合现行《乙型脑炎活疫苗规程》标准。 展开更多

关键词 乙脑14-2弱病毒 原代狗胎肾细胞 病毒传代适应 乙脑活疫苗

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乙型脑炎减毒活疫苗工艺中金黄地鼠肾细胞培养液里谷氨酰胺添加的研究 被引量：1

3

作者 汪小磊 王红宁 +1 位作者 郑庆纹 易维维 《中国卫生产业》 2017年第6期43-45,共3页

目的比较谷氨酰胺在不同浓度和不同添加阶段的条件下,作为细胞生长液的成分,对乙型脑炎减毒活疫苗生产中金黄地鼠肾细胞的培养效果以及后续生产工艺的影响。方法 (1)以两种添加阶段:将谷氨酰胺作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培... 目的比较谷氨酰胺在不同浓度和不同添加阶段的条件下,作为细胞生长液的成分,对乙型脑炎减毒活疫苗生产中金黄地鼠肾细胞的培养效果以及后续生产工艺的影响。方法 (1)以两种添加阶段:将谷氨酰胺作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养和培养细胞时临时配制后加入细胞培养;(2)以不同的浓度:按0.05、0.1、0.2 g/L的浓度加入细胞培养。结合两种条件后,每种组合条件生产3批地鼠肾细胞,对所有批次细胞的生长情况及后续接种病毒后,对应的病毒生长情况进行比较研究。结果谷氨酰胺在培养细胞时临时配制后加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于其作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养,采用秩和检验,差异有统计学意义(P=0.002<0.05);谷氨酰胺按0.1 g/L和0.2 g/L的浓度加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于按0.05g/L浓度,在2种添加阶段其,差异有统计学意义(P=0.02<0.05),但0.1g/L和0.2 g/L的浓度之间,无论谷氨酰胺的添加阶段在培养基中添加P=0.513,在培养时临时添加P=0.827),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论在乙型脑炎减毒活疫苗生产所需的地鼠肾细胞培养中,谷氨酰胺适合在培养细胞时临时配制后加入细胞培养容器,浓度不宜低于0.1g/L。 展开更多

关键词 乙型脑炎减毒活疫苗 谷氨酰胺 地鼠肾细胞培养 添加阶段 浓度

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冻干RA27/3株风疹减毒活疫苗的研制 被引量：1

4

作者 郑庆纹 蔡勇 +4 位作者 周蓉 范凤鸣 方敏 温雪茹 刘俐 《预防医学情报杂志》 CAS 2001年第1期1-2,9,共3页

目的　研制安全有效的风疹疫苗　方法　将RA2 7/3风疹减毒株按适当比例接种MRC -5人二倍体单层细胞 ,培养、收获病毒液 ,加保护剂冻干制苗。结果　连续中试 4批疫苗 ,各项检测指标均达到现行《中国生物制品规程》标准。结论　试制RA2 7/... 目的　研制安全有效的风疹疫苗　方法　将RA2 7/3风疹减毒株按适当比例接种MRC -5人二倍体单层细胞 ,培养、收获病毒液 ,加保护剂冻干制苗。结果　连续中试 4批疫苗 ,各项检测指标均达到现行《中国生物制品规程》标准。结论　试制RA2 7/3株风疹活疫苗 ,质量及热稳定性良好。 展开更多

关键词 RA27/3风疹毒株 冻干 活疫苗 风疹疫苗 减毒活疫苗

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乙型脑炎14-2株冻干活疫苗的生产研究 被引量：13

5

作者 王寿贵 杨洪举 +3 位作者 邓远运 王方保 郑庆纹 俞永新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第1期38-43,共6页

乙型脑炎病毒14-2株经地鼠肾细胞连续传23代,各代次的病毒滴度和回传乳鼠后的毒力都较稳定,与5-3株无差异。各代次的神经毒力和中枢神经外毒力也与5-3株相同。脑内感染12～14克小白鼠均不致死,皮下感染也不致病。用地鼠肾细胞经36℃培养... 乙型脑炎病毒14-2株经地鼠肾细胞连续传23代,各代次的病毒滴度和回传乳鼠后的毒力都较稳定,与5-3株无差异。各代次的神经毒力和中枢神经外毒力也与5-3株相同。脑内感染12～14克小白鼠均不致死,皮下感染也不致病。用地鼠肾细胞经36℃培养4天,病毒增殖达到高峰,滴度为8.0～8.5logTCID50/0.2ml。病毒培养液的pH值为7.4～7.6时,病毒增殖高峰可持续3天。以1％明胶、5％蔗糖为保护剂,在冻干后无真空、不充氮的条件下。14—2株活疫苗在37℃可保存10天,室温(16～31℃)可保存4个月,5～8℃可保存一年,病毒滴度均无明显下降.冻干后充氮或不充氮病毒的滴度及稳定性看不出差异。冻干14—2株活疫苗融化后,用Eagle’s液稀释,置22～23℃8小时,滴度不变,若以生理盐水稀释,则可保持2～4小时;以蒸馏水稀释只能稳定2小时。 展开更多

关键词 乙型脑炎 活疫苗 稳定性

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流行性乙型脑炎活疫苗生产工艺定型研究

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作者 王寿贵 郑庆纹 《生物制品资料选编》 1991年第15期40-49,共10页

关键词 流行性 乙型脑炎 疫苗 工艺

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乙型脑炎病毒（JEV）减毒株狗肾细胞活疫苗的...

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作者 王寿贵 郑庆纹 《生物制品资料选编》 1990年第14期36-41,共6页

关键词 JEV减毒株 胎狗肾细胞 疫苗

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乙型脑炎病毒（JEV）减毒株狗肾细胞活疫苗的研制：I.JEV减毒？..

8

作者 王寿贵 郑庆纹 《生物制品资料选编》 1990年第14期33-35,共3页

关键词 JEV减毒株 胎狗肾细胞 疫苗

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流行性乙型脑炎SA14—14—2狗肾细胞适应株减毒活疫...：...

9

作者 王寿责 郑庆纹 《生物制品资料选编》 1989年第13期57-60,共4页

关键词 乙型脑炎菌株 减毒活疫苗

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乙型脑炎减毒活疫苗单一病毒收获液在2～8℃条件下储存的稳定性研究 被引量：2

10

作者 郑庆纹 李俊明 +10 位作者 唐光美 任扬 李玲 易维维 白家峰 王玖强 彭维 刘晓华 周卫 刘菊 金鹏 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第3期105-108,共4页

目的 考察在现行工艺规定的2～8 ℃储存条件下，乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑活疫苗）单一病毒收获液病毒滴度的稳定性。方法 取常规生产中收获的高、中、低滴度的单一病毒收获液各6批，按正常生产程序和工艺条件储存于2～8 ℃，自第5天... 目的 考察在现行工艺规定的2～8 ℃储存条件下，乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑活疫苗）单一病毒收获液病毒滴度的稳定性。方法 取常规生产中收获的高、中、低滴度的单一病毒收获液各6批，按正常生产程序和工艺条件储存于2～8 ℃，自第5天起每隔1 d无菌取样，进行病毒滴定，采用极差控制图、线性回归、单因素方差分析等方法对收获液的病毒滴度结果进行统计分析。结果 常规生产中高、中、低滴度段的单一病毒收获液在2～8 ℃储存21 d，各单一病毒收获液的病毒滴度均呈下降趋势，并且不同滴度段病毒收获液间的日均下降滴度差异无统计学意义（F=1.67，P=0.222），总体日均下降滴度为0.036 lg蚀斑形成单位/ml。结论 掌握了单一病毒收获液在工艺规定储存条件下的滴度下降趋势及日均下降水平，为乙脑活疫苗半成品的点配制及其病毒滴度的一致性控制提供了数据支持。 展开更多

关键词 日本脑炎疫苗 药物稳定性 单一病毒收获液

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乙型脑炎减毒活疫苗生物学关键质量指标警戒限和行动限的建立与应用

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作者 刘菊 朱小农 +3 位作者 罗静 汪小磊 田志航 郑庆纹 《国际生物制品学杂志》 CAS 2015年第4期157-160,共4页

目的：建立适用于乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）生物学关键质量指标（critical quality attribution ，CQA）的警戒限和行动限范围，开展趋势分析以及时发现异常趋势，指导疫苗生产。方法根据CQA的数据分布及特点，采用休哈特控制图... 目的：建立适用于乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）生物学关键质量指标（critical quality attribution ，CQA）的警戒限和行动限范围，开展趋势分析以及时发现异常趋势，指导疫苗生产。方法根据CQA的数据分布及特点，采用休哈特控制图法及阈值法建立限度范围，比较两种方法的结果，并采用适宜的限度范围对近3年的数据进行统计分析。结果乙脑疫苗的病毒滴度等生物学CQA数据为非正态分布，采用休哈特控制图建立的行动限范围有超出法规限的情况；而采用阈值法建立的行动限范围则均在法规限以内。采用阈值法建立的限度分析近3年乙脑疫苗各生产阶段生物学指标的状态，各指标超出行动限的点数均小于总点数的1％，表明乙脑疫苗各生产阶段处于稳定状态。结论阈值法为建立限度范围的适用方法；趋势分析中应结合数据本身特性与分布，选用适合的方法来建立限度标准，才能更为科学地将趋势分析工具用于指导实际生产。 展开更多

关键词 日本脑炎疫苗 阈值法 趋势分析 生物学关键质量指标

原文传递

乙型脑炎减毒活疫苗生产工艺液体质量验证

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作者 刘盛涛 赵赟力 +9 位作者 郑庆纹 周卫 刘菊 潘海龙 房巍 杨锣 杨烨 杨文杰 姚亚夫 罗勇 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第5期212-216,共5页

目的 对乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗生产过程中使用的工艺液体进行系统验证,确保其配制过程和储存过程的一致性.方法 根据工艺液体在生产中是否接触或进入产品,确定验证主要针对8种关键工艺液体.针对制备和储存过程中影响液体质量的变... 目的 对乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗生产过程中使用的工艺液体进行系统验证,确保其配制过程和储存过程的一致性.方法 根据工艺液体在生产中是否接触或进入产品,确定验证主要针对8种关键工艺液体.针对制备和储存过程中影响液体质量的变量建立工艺参数,并根据液体在生产中的用途建立能反映工艺液体质量的标准.通过系统性实验收集数据来证明液体制备和储存过程工艺参数的可行性.结果 在对8种关键工艺液体每种各3次的混合均一性验证中,每次9个样品的相对标准差均＜5％,并且8种液体每种各3批在经过最长可能储存时间后,样品检定结果均符合可接受标准.结论 验证证明了采用乙脑活疫苗关键工艺液体的制备程序能配制出均一并符合工艺要求的液体,且每种工艺液体均能在规定的储存条件下在最长储存时间内维持质量稳定,从而为质量、安全性和有效性都符合中国药典及WHO标准的乙脑活疫苗生产提供了保障. 展开更多

关键词 日本脑炎疫苗 工艺液体 质量验证

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地鼠多瘤病毒PCR检测方法的建立

13

作者 叶琳 张鹏艳 +3 位作者 曾献武 郑庆纹 张雪梅 姚亚夫 《国际生物制品学杂志》 CAS 2012年第3期113-117,共5页

目的建立地鼠多瘤病毒（hamster polyomavirus，HaPyV）PCR检测方法，并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测。方法设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物，以含HaPyV VP1片段的质粒PMDl9T—HaPyV688为模板进... 目的建立地鼠多瘤病毒（hamster polyomavirus，HaPyV）PCR检测方法，并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测。方法设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物，以含HaPyV VP1片段的质粒PMDl9T—HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物。以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增，并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异性。将定量的质粒PMD19T-HaPyV68810倍系列稀释后进行PCR敏感性检测。以小鼠多瘤病毒（murinepolyomavirus，MuPyV）检验PCR法对质粒DNA和病毒DNA检测的一致性。应用建立的方法对生产用地鼠肾细胞悬液进行HaPyVDNA检测。结果仅含有质粒PMDl9T—HaPyV688和MuPyVDNA的样品能够扩增出600bp的片段，经斑点杂交及测序证明其分别为HaPyV和MuPyV的VPl特异基因片段。PCR所能检出的PMD19T—HaPyV688和MuPyV的最少DNA拷贝数分别为5300和590。7个亚批生产用地鼠肾细胞悬液的HaPyV检测结果均为阴性。结论建立的PCR方法具有较高的敏感性和特异性，可用于生产用地鼠肾细胞HaPyV感染的检测。 展开更多

关键词 多瘤病毒属 聚合酶链反应 敏感性与特异性

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乙型脑炎减毒活疫苗诱导小鼠的细胞免疫应答 被引量：3

14

作者 叶琳 张鹏艳 +1 位作者 郑庆纹 姚亚夫 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第11期1099-1101,共3页

目的探讨乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗在小鼠中诱导细胞免疫应答的能力,评价疫苗的免疫原性。方法以乙脑减毒活疫苗免疫BALB/c小鼠,制备小鼠脾淋巴细胞,在体外以重组蛋白NS3-1和NS3-2进行刺激,采用酶联斑点法(ELISPOT)检测分泌细胞因... 目的探讨乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗在小鼠中诱导细胞免疫应答的能力,评价疫苗的免疫原性。方法以乙脑减毒活疫苗免疫BALB/c小鼠,制备小鼠脾淋巴细胞,在体外以重组蛋白NS3-1和NS3-2进行刺激,采用酶联斑点法(ELISPOT)检测分泌细胞因子的效应T细胞的频数。结果乙脑减毒活疫苗免疫小鼠的脾淋巴细胞在体外经重组蛋白NS3-1和NS3-2刺激后,可诱导高频数的分泌IFNγ的CD4+和CD8+T淋巴细胞及低频数的分泌IL-4的淋巴细胞;而乙脑灭活疫苗仅诱导低频数的分泌IFNγ和IL-4的T淋巴细胞。结论乙脑减毒活疫苗可在小鼠中有效地诱导NS3-1和NS3-2抗原特异性T淋巴细胞应答,且应答水平显著高于乙脑灭活疫苗。 展开更多

关键词 乙型脑炎 减毒活疫苗 NS3-1蛋白 NS3-2蛋白 细胞免疫应答

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乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS3基因的克隆及原核表达 被引量：1

15

作者 叶琳 张鹏艳 +1 位作者 郑庆纹 姚亚夫 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期758-761,共4页

目的克隆并表达乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS3编码区的基因片段,为重组蛋白进一步的功能研究奠定基础。方法提取乙脑病毒SA14-14-2株总RNA,用RT-PCR法扩增NS3-1、NS3-2基因片段,克隆入原核表达载体pET15bTAT中,构建重组原核表达质粒,转化... 目的克隆并表达乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS3编码区的基因片段,为重组蛋白进一步的功能研究奠定基础。方法提取乙脑病毒SA14-14-2株总RNA,用RT-PCR法扩增NS3-1、NS3-2基因片段,克隆入原核表达载体pET15bTAT中,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Rosetta2,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组原核表达质粒pET15bTAT-NS3-1和pET15bTAT-NS3-2经酶切证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约为27000和20000,主要以包涵体的形式表达。重组蛋白纯化后纯度可达80%以上,并可被小鼠抗乙型脑炎病毒SA14-14-2株血清识别。结论已成功克隆了乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS3-1和NS3-2基因,并在大肠杆菌Rosetta2中获得表达。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 SA14-14—2株 NS3基因 克隆 原核表达

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