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鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原人源单克隆抗体筛选与鉴定
1
作者
张黎
郑滨洋
+5 位作者
张琪
吴海莲
潘红星
朱凤才
吴海生
周剑芳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期15-20,共6页
目的筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能。方法使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库。用L...
目的筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能。方法使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库。用LcrV对文库进行富集筛选,将获得的抗体基因表达成人IgG1后,测定抗体与LcrV抗原结合的特异性、亲和力、免疫调节功能以及保护能力。结果成功构建了鼠疫耶尔森菌人源ScFv抗体文库,库容量为7.54×10^(8)。抗体文库经LcrV筛选后获得了3株抗LcrV抗体,命名为RV-B4、RV-D1和RV-E8。3株抗体重链为VH1-46和VH3-30,轻链分别为VL1-51、VK3-20和VK1-39。3株抗体经ELISA及Western blot验证均与LcrV特异性结合,其与V抗原结合的解离常数(KD)分别为2.1 nmol/L、1.24 nmol/L和42 nmol/L。RV-D1体外降低人THP-1分泌TNF-α,动物攻毒试验中未发现抗LcrV抗体的保护效果。结论从鼠疫疫苗免疫人群获得了靶向低钙应答V抗原的人源抗体,以结合抗体为主,不能有效阻断病菌感染。所获得的单抗为鼠疫免疫基础研究、鼠疫诊断应用提供了候选材料。
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关键词
鼠疫耶尔森菌
低钙应答V抗原
噬菌体展示
重组抗体
保护效果
下载PDF
职称材料
2019新型冠状病毒核衣壳蛋白的表达及在诊断方面的应用
被引量：
1
2
作者
张黎
郑滨洋
+6 位作者
缪连军
余秋凡
高行素
金路
李森
雍金贵
潘红星
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
CSCD
2020年第4期374-377,共4页
目的对2019新型冠状病毒(2019-novel Coronavirus,2019-nCoV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)进行原核表达、纯化与鉴定,并应用于2019-nCoV血清学诊断。方法合成2019-nCoV NP基因,克隆至pET28a载体中,构建表达质粒,并进行诱导纯化...
目的对2019新型冠状病毒(2019-novel Coronavirus,2019-nCoV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)进行原核表达、纯化与鉴定,并应用于2019-nCoV血清学诊断。方法合成2019-nCoV NP基因,克隆至pET28a载体中,构建表达质粒,并进行诱导纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE、间接ELISA、Western blot(WB)、免疫层析法进行鉴定。优化间接ELISA反应条件,进行血清抗体检测。结果重组NP经镍柱纯化后SDS-PAGE电泳显示相对分子质量约50×10^3,与预期一致;间接ELISA、WB表明其能与2019-nCoV感染患者血清特异性结合;用免疫层析法发现对NP检测限为0.2 ng/ml;间接ELISA检测32份2019-nCoV感染者血清及对照血清,发现二者结果可见明显分群。结论原核表达的NP具有良好的免疫原性,可用于制备血清学诊断试剂。
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关键词
2019新型冠状病毒
核衣壳蛋白
原核表达
诊断试剂
原文传递
题名
鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原人源单克隆抗体筛选与鉴定
1
作者
张黎
郑滨洋
张琪
吴海莲
潘红星
朱凤才
吴海生
周剑芳
机构
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
江苏省疾病预防控制中心
青海省地方病预防控制所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期15-20,共6页
基金
江苏省重点研发计划(社会发展)项目(No.BE2020720)。
文摘
目的筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能。方法使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库。用LcrV对文库进行富集筛选,将获得的抗体基因表达成人IgG1后,测定抗体与LcrV抗原结合的特异性、亲和力、免疫调节功能以及保护能力。结果成功构建了鼠疫耶尔森菌人源ScFv抗体文库,库容量为7.54×10^(8)。抗体文库经LcrV筛选后获得了3株抗LcrV抗体,命名为RV-B4、RV-D1和RV-E8。3株抗体重链为VH1-46和VH3-30,轻链分别为VL1-51、VK3-20和VK1-39。3株抗体经ELISA及Western blot验证均与LcrV特异性结合,其与V抗原结合的解离常数(KD)分别为2.1 nmol/L、1.24 nmol/L和42 nmol/L。RV-D1体外降低人THP-1分泌TNF-α,动物攻毒试验中未发现抗LcrV抗体的保护效果。结论从鼠疫疫苗免疫人群获得了靶向低钙应答V抗原的人源抗体,以结合抗体为主,不能有效阻断病菌感染。所获得的单抗为鼠疫免疫基础研究、鼠疫诊断应用提供了候选材料。
关键词
鼠疫耶尔森菌
低钙应答V抗原
噬菌体展示
重组抗体
保护效果
Keywords
Yersinia pestis
low-calcium response V antigen
phage display
recombinant antibody
protective effect
分类号
R378.61 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
2019新型冠状病毒核衣壳蛋白的表达及在诊断方面的应用
被引量：
1
2
作者
张黎
郑滨洋
缪连军
余秋凡
高行素
金路
李森
雍金贵
潘红星
机构
江苏省疾病预防控制中心疫苗临床评价所
通用生物系统(安徽)有限公司
江苏美克医学技术有限公司
出处
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
CSCD
2020年第4期374-377,共4页
基金
江苏省疾病预防控制中心科教强业项目(JKRC2016020)。
文摘
目的对2019新型冠状病毒(2019-novel Coronavirus,2019-nCoV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)进行原核表达、纯化与鉴定,并应用于2019-nCoV血清学诊断。方法合成2019-nCoV NP基因,克隆至pET28a载体中,构建表达质粒,并进行诱导纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE、间接ELISA、Western blot(WB)、免疫层析法进行鉴定。优化间接ELISA反应条件,进行血清抗体检测。结果重组NP经镍柱纯化后SDS-PAGE电泳显示相对分子质量约50×10^3,与预期一致;间接ELISA、WB表明其能与2019-nCoV感染患者血清特异性结合;用免疫层析法发现对NP检测限为0.2 ng/ml;间接ELISA检测32份2019-nCoV感染者血清及对照血清,发现二者结果可见明显分群。结论原核表达的NP具有良好的免疫原性,可用于制备血清学诊断试剂。
关键词
2019新型冠状病毒
核衣壳蛋白
原核表达
诊断试剂
Keywords
2019-nCoV
Nucleocapsid protein
Prokaryotic expression
Diagnostic reagent
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原人源单克隆抗体筛选与鉴定
张黎
郑滨洋
张琪
吴海莲
潘红星
朱凤才
吴海生
周剑芳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
下载PDF
职称材料
2
2019新型冠状病毒核衣壳蛋白的表达及在诊断方面的应用
张黎
郑滨洋
缪连军
余秋凡
高行素
金路
李森
雍金贵
潘红星
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
CSCD
2020
1
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