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饲料来源对养殖拟穴青蟹营养组成的影响分析
1
作者 黄爱霞 孙丽慧 +4 位作者 郝贵杰 沈亚芳 崔雁娜 蒋荣响 林锋 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第2期77-83,共7页
为了评价不同饲料来源对拟穴青蟹营养品质的影响,取体重(8.52±0.34) g的蟹,分成两组,分别饲喂配合饲料和冰鲜鱼,试验周期42 d试验结束后分别取配合饲料(配合饲料组)和冰鲜鱼(冰鲜鱼组)养殖的拟穴青蟹,分离其肌肉和性腺,测定了肌肉... 为了评价不同饲料来源对拟穴青蟹营养品质的影响,取体重(8.52±0.34) g的蟹,分成两组,分别饲喂配合饲料和冰鲜鱼,试验周期42 d试验结束后分别取配合饲料(配合饲料组)和冰鲜鱼(冰鲜鱼组)养殖的拟穴青蟹,分离其肌肉和性腺,测定了肌肉和性腺的水分、蛋白质、脂肪、灰分、氨基酸等的含量及脂肪酸的组成。结果表明:配合饲料组拟穴青蟹肌肉水分含量显著低于冰鲜鱼组(P<0.05),粗蛋白和粗灰分含量显著高于冰鲜鱼组(P<0.05);冰鲜鱼组拟穴青蟹性腺水分含量显著低于配合饲料组(P<0.05),粗脂肪和粗蛋白、粗灰分含量显著高于配合饲料组(P<0.05)。配合饲料组拟穴青蟹肌肉中总氨基酸(TAA)、必需氨基酸(EAA)和呈味氨基酸(FAA)总量均显著高于冰鲜组(P<0.05)。配合饲料组肌肉异亮氨酸和缬氨酸的氨基酸评分(AAS)高于冰鲜鱼组,赖氨酸低于冰鲜鱼组;异亮氨酸化学评分(CS)高于冰鲜鱼组,苯丙氨酸+酪氨酸、赖氨酸评分低于冰鲜鱼组;必需氨基酸指数(EAAI)高于冰鲜鱼组。配合饲料组性腺异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸+酪氨酸AAS评分低于冰鲜鱼组,赖氨酸、缬氨酸和蛋氨酸+胱氨酸高于冰鲜鱼组;异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸+酪氨酸CS评分低于冰鲜鱼组,赖氨酸、缬氨酸和蛋氨酸+胱氨酸高于冰鲜鱼组;EAAI指数高于冰鲜鱼组。配合饲料组拟穴青蟹肌肉DHA、EPA、n6-PUFA及n3-PUFA比例均显著高于冰鲜鱼组(P<0.05),性腺中DHA显著高于冰鲜鱼组、EPA显著低于冰鲜鱼组(P<0.05)。综上所述,配合饲料饲喂的拟穴青蟹肌肉和性腺的EAAI指数高,其蛋白质品质较高,说明饲料组成对拟穴青蟹的品质影响显著,可通过调整饲料配方提高拟穴青蟹的品质。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 饲料来源 肌肉 性腺 营养组成
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气调保鲜技术在水产品中应用研究进展
2
作者 陈智慧 沈亚芳 +2 位作者 黄爱霞 崔雁娜 郝贵杰 《科学养鱼》 2024年第9期81-83,共3页
根据国家统计局发布的数据显示,2022年我国水产品产量达6 865.91万吨(《2023中国渔业统计》),位居世界前列。水产品营养价值高,含有多不饱和脂肪酸、必需氨基酸、微量元素等营养物质,在居民膳食结构中占据重要地位。随着人们消费水平提... 根据国家统计局发布的数据显示,2022年我国水产品产量达6 865.91万吨(《2023中国渔业统计》),位居世界前列。水产品营养价值高,含有多不饱和脂肪酸、必需氨基酸、微量元素等营养物质,在居民膳食结构中占据重要地位。随着人们消费水平提高及对营养需求的增加,新鲜水产品的消费市场占比逐渐加大,然而水产品含水量高、p H呈中性以及内原酶活性强,导致其极易腐败。因此,亟须加强水产品保鲜技术研究,以进一步降低损耗、延长货架期。 展开更多
关键词 多不饱和脂肪酸 必需氨基酸 水产品产量 营养物质 营养需求 国家统计局 降低损耗 消费水平
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不同生长阶段马口鱼肠道菌群差异性研究
3
作者 崔雁娜 郝贵杰 +5 位作者 丁兰 郑梦兰 王雨辰 涂金玉 孙家栋 林锋 《农业与技术》 2024年第2期120-125,共6页
为研究马口鱼不同生长阶段肠道菌群的结构差异,找出影响肠道菌群结构差异的因素。采用Illumina Hiseq2500高通量测序技术分析了2月龄、5月龄、9月龄的马口鱼肠道菌群结构,并对2月龄、5月龄、9月龄马口鱼的生长性能和养殖水质进行了检测... 为研究马口鱼不同生长阶段肠道菌群的结构差异,找出影响肠道菌群结构差异的因素。采用Illumina Hiseq2500高通量测序技术分析了2月龄、5月龄、9月龄的马口鱼肠道菌群结构,并对2月龄、5月龄、9月龄马口鱼的生长性能和养殖水质进行了检测。生长性能检测结果显示:从体重来看,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼呈递增关系,但2月龄、5月龄存在显著性差异,5月龄、9月龄马口鱼无显著性差异;从体长来看,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼也呈递增关系,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼之间均存在显著性差异;从肥满度来看,5月龄与2月龄、9月龄马口鱼均存在显著性差异,2月龄、9月龄马口鱼无显著性差异,2月龄、5月龄、9月龄马口鱼呈先增长后下降关系。养殖水质检测结果显示:2月龄、5月龄、9月龄马口鱼养殖水质pH值和养殖水温均有显著性差异,2月龄、5月龄马口鱼的溶解氧无显著性差异;2月龄、9月龄马口鱼溶解氧存在显著性差异,5月龄、9月龄马口鱼溶解氧存在显著性差异。微生物分析描述物种丰富度的指标中,从ACE来看,2月龄、5月龄马口鱼存在显著性差异,而9月龄和2月龄、5月龄马口鱼均无显著性差异;从Chaol指数来看,2月龄、9月龄均与5月龄马口鱼存在显著性差异,2月龄、9月龄马口鱼无显著性差异。从多样性指数(Shannon指数和Simpson指数)来看,2月龄、9月龄马口鱼均与5月龄马口鱼存在显著性差异,2月龄、9月龄马口鱼无显著性差异。从肠道菌群组成分析来看,2月龄、5月龄马口鱼以气单胞菌属(Aeromonas)、鲸蜡杆菌属(Cetobacterium)为主导菌属,9月龄马口鱼这2种菌属(气单胞菌属、鲸蜡杆菌属)几乎消失,出现了更多种类的其他菌属。2月龄、5月龄马口鱼以变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、梭杆菌门(Fusobacteriota)为主,占比达到81.0%~99.6%。9月龄马口鱼梭杆菌门(Fusobacteriota)消失。2月龄、9月龄马口鱼细菌群落结构呈现高度相似性。综合上述,当喂养饲料不发生变化时,养殖水温是影响马口鱼菌属的因素之一;马口鱼肠道菌群丰富度和多样性和马口鱼的肥满度变化规律相同。 展开更多
关键词 马口鱼 生长性能 肥满度 水温 肠道菌群
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下渚湖养殖青虾氨基脲含量本底调查
4
作者 徐磊 王俊 +1 位作者 王雨辰 郝贵杰 《现代农业科技》 2024年第14期152-157,共6页
为探究德清县下渚湖养殖青虾(Macrobrachium nipponense)体内氨基脲(semicarbazide,SEM)的本底情况和存在特征,采集了养殖青虾样品73批次、野生青虾样品9批次,对样品的肌肉、背壳和肝胰腺进行了SEM含量检测分析。结果表明:养殖青虾肌肉... 为探究德清县下渚湖养殖青虾(Macrobrachium nipponense)体内氨基脲(semicarbazide,SEM)的本底情况和存在特征,采集了养殖青虾样品73批次、野生青虾样品9批次,对样品的肌肉、背壳和肝胰腺进行了SEM含量检测分析。结果表明:养殖青虾肌肉中SEM的检出值主要集中在2.35~8.51μg/kg之间,平均值为(4.41±1.54)μg/kg,5%~95%置信区间为2.46~7.53μg/kg;背壳中SEM的检出值主要集中在71.98~266.04μg/kg之间,平均值为(143.07±40.27)μg/kg,5%~95%置信区间为98.51~233.12μg/kg;肝胰腺中SEM的检出值集中在3.91~17.42μg/kg之间,平均值为(9.19±2.67)μg/kg,5%~95%置信区间为5.49~14.52μg/kg。青虾组织中SEM含量呈现背壳>肝胰腺>肌肉的分布特征,且养殖青虾组织内SEM的含量普遍高于野生青虾。研究结果可为甲壳类水产品中SEM残留限量标准的修订提供基础数据。 展开更多
关键词 青虾 氨基脲 本底 形态分布 下渚湖
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浙江省农业面源污染治理现状及对策
5
作者 陈正道 郝贵杰 《现代农业科技》 2024年第16期96-98,109,共4页
农业面源污染是农业生产过程中由于化学投入品使用不合理,以及养殖废弃物、农作物秸秆等处置不当,对生态环境造成的污染。加强农业面源污染治理是实现农业绿色发展、保障农产品质量安全的根本措施,也是实施乡村振兴战略、改善农村生态... 农业面源污染是农业生产过程中由于化学投入品使用不合理,以及养殖废弃物、农作物秸秆等处置不当,对生态环境造成的污染。加强农业面源污染治理是实现农业绿色发展、保障农产品质量安全的根本措施,也是实施乡村振兴战略、改善农村生态环境的重要内容。基于此,总结了浙江省近年来农业面源污染治理的主要做法和取得的成效,分析了农业面源污染治理存在的问题,提出了深入推进农业面源污染治理的对策,以期为保障生态环境安全和农业高质量发展提供理论支撑。 展开更多
关键词 农业面源污染治理 做法 成效 问题 对策 浙江省
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冷藏大口黑鲈鱼片品质变化规律及优势腐败菌致腐能力分析 被引量：2
6
作者 黄爱霞 林锋 +6 位作者 崔雁娜 徐磊 沈亚芳 王雨辰 孙博怿 沈佳敏 郝贵杰 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第15期93-100,共8页
目的 分析冷藏大口黑鲈鱼片品质的变化规律并确定其贮藏过程中的优势腐败菌及其致腐能力。方法 以新鲜鲈鱼为原料,通过测定鱼肉的质构特性、菌落总数、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)和K值等指标,对冷藏过程中鱼片... 目的 分析冷藏大口黑鲈鱼片品质的变化规律并确定其贮藏过程中的优势腐败菌及其致腐能力。方法 以新鲜鲈鱼为原料,通过测定鱼肉的质构特性、菌落总数、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)和K值等指标,对冷藏过程中鱼片的品质和优势腐败菌及其致腐能力进行了分析,并通过16S rRNA序列鉴定分析各腐败菌的种属。结果 质构特性、菌落总数、TVB-N、K值等品质相关指标的测定结果表明,随着贮藏时间的延长,鱼片的咀嚼性和胶着性均呈缓慢下降的趋势;菌落总数逐渐增长;TVB-N在贮藏前7 d变化不大,在第7 d后急速上升;K值在第7 d时超过了60%,达到了初期腐败。采用选择性培养基获得鲈鱼腐败期的特定菌落,结合菌落形态观察、16S rDNA与革兰氏染色技术,确定所属菌株属种,并评价各菌株的致腐能力。筛选出T2、C1和C2 3株菌为4℃贮藏鲈鱼片的疑似优势腐败菌。16S rDNA鉴定出这3株菌分别为希瓦氏菌、假单胞菌和普罗维登斯菌。根据接种这3株腐败菌的大口黑鲈鱼片的TVB-N产量因子(YTVB-N/CFU)的评价结果,确定这3株腐败菌的致腐能力为假单胞菌>希瓦氏菌>普罗维登斯菌。结论 假单胞菌为4℃贮藏的鲈鱼片腐败的优势菌。 展开更多
关键词 大口黑鲈鱼 冷藏 品质变化 优势腐败菌 致腐能力
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罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)致病性豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)的分离鉴定及其特性分析 被引量：1
7
作者 王雨辰 雷宁 +6 位作者 郝贵杰 周冬仁 王锋 黄爱霞 崔雁娜 孙博怿 林锋 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期866-874,共9页
近年来细菌性疾病因病原菌种类繁多、覆盖区域广而影响了其养殖业的健康发展,造成较大的经济损失。从体表具有黑斑、肢体残损症状的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)肝胰腺组织中分离得到1株病原菌,通过形态学观察、生理生化特性鉴... 近年来细菌性疾病因病原菌种类繁多、覆盖区域广而影响了其养殖业的健康发展,造成较大的经济损失。从体表具有黑斑、肢体残损症状的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)肝胰腺组织中分离得到1株病原菌,通过形态学观察、生理生化特性鉴定、16S rRNA序列和特定毒力基因检测鉴定,以及人工回归感染试验和药敏试验分析其致病性和耐药性。结果表明,该菌为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),含有aer、lip、gcat、ser和OMPA I等毒力基因;药敏试验显示其对头孢曲松、氯霉素等7种抗生素高度敏感,对恩诺沙星、阿米卡星及复方新诺明3种抗生素中度敏感,对四环素、环丙沙星等10种抗生素具有耐药性;人工回归感染实验表明该菌具有较高的致病性,对罗氏沼虾的半致死浓度为6.54×10~5 CFU/mL。豚鼠气单胞菌作为水产养殖中的条件性致病菌,研究结果揭示了该菌株的部分生物学特性,有利于丰富豚鼠气单胞菌属的基础数据,同时也为罗氏沼虾养殖过程中的病害防控提供了一定参考依据。 展开更多
关键词 罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii) 豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae) 药敏试验 毒力基因
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三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CTL基因SNP位点E4-205 C/T与抗溶藻弧菌相关性分析
8
作者 郝贵杰 林锋 +6 位作者 母昌考 雷宁 黄爱霞 崔雁娜 沈亚芳 张海琪 文菁 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1434-1443,共10页
C-型凝集素(C-typelectin,CTL)是甲壳类动物体液免疫中重要的免疫因子之一。但CTL基因在溶藻弧菌对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)感染的过程中的表达及抗病机制尚有待进一步研究。为初步阐明CTL基因SNP E4-205 C/T位点与抗溶藻... C-型凝集素(C-typelectin,CTL)是甲壳类动物体液免疫中重要的免疫因子之一。但CTL基因在溶藻弧菌对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)感染的过程中的表达及抗病机制尚有待进一步研究。为初步阐明CTL基因SNP E4-205 C/T位点与抗溶藻弧菌感染相关的分子机制,对不同基因型梭子蟹进行溶藻弧菌感染,通过绝对定量方法分析不同基因型梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中溶藻弧菌的复制情况。发现溶藻弧菌感染后12 h内梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中C/C组细菌数量显著高于T/T组,结果表明T/T组梭子蟹抗感染能力显著高于C/C组。进一步对该位点非同义突变(ACT-ATT)导致的一个氨基酸改变(Thr-Ile)的两种蛋白进行体外重组表达,并对两种重组蛋白CTL-ATT及CTL-ACT进行活性分析。发现两种重组蛋白对溶藻弧菌生长均具有一定的抑制作用,CTL-ATT的抑菌活性显著高于CTL-ACT。重组蛋白CTL-ATT与PAMPs的结合活性高于CTL-ACT与PAMPs的结合活性,同时两种蛋白与PAMPs和溶藻弧菌的结合活性具有浓度依赖性。结果表明三疣梭子蟹CTL基因参与机体感染溶藻弧菌后的免疫应答过程,其单核苷酸多态性与抗溶藻弧菌感染存在一定的关联性,三疣梭子蟹CTL基因SNPE4-205C/T位点为T/T基因型时的抗溶藻弧菌感染能力强于C/C型。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus) 溶藻弧菌 单核苷酸多态性 凝集素 高分辨率溶解曲线
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暂养净化对池塘养殖大口黑鲈营养成分及挥发性风味物质的影响
9
作者 崔雁娜 徐磊 +7 位作者 郭水荣 雷宁 林锋 周冬仁 王俊 沈亚芳 黄爱霞 郝贵杰 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第16期94-103,共10页
目的探究暂养净化处理对大口黑鲈肌肉中营养成分及挥发性风味物质的影响。方法利用氨基酸自动分析仪、气相色谱-质谱法、气相色谱-离子迁移谱法(gas chromatography-ion mobility spectrometry,GC-IMS)对暂养净化处理前后大口黑鲈肌肉... 目的探究暂养净化处理对大口黑鲈肌肉中营养成分及挥发性风味物质的影响。方法利用氨基酸自动分析仪、气相色谱-质谱法、气相色谱-离子迁移谱法(gas chromatography-ion mobility spectrometry,GC-IMS)对暂养净化处理前后大口黑鲈肌肉中的基本营养组分、氨基酸、脂肪酸及挥发性风味物质进行测定。结果相较于对照组,暂养净化后大口黑鲈肌肉中的水分、总灰分、脂肪和蛋白质含量均无显著变化。大口黑鲈肌肉中共鉴定出16种氨基酸、19种脂肪酸,暂养净化后大口黑鲈肌肉中的氨基酸营养价值有所降低,脂肪酸的抗氧化能力也会降低。大口黑鲈肌肉中的挥发性风味物质中以醛类(11种)、醇类(7种)和酮类(8种)物质为主,伴有少量酯类(2种),暂养净化后大口黑鲈肌肉中的正戊醛、正己醛、正庚醛、正辛醛、正壬醛、反-2-戊烯醛、反-2-己烯醛和2-戊酮的含量升高,异丁醛、2-甲基丁醛、异戊醛、苯甲醛、6-甲基-5-庚烯-2-酮、3-戊酮、2-庚酮、2-己酮、2-丁酮、异丙醇、异戊醇、2-乙基己醇和3-异戊酸甲酯的含量降低。此外,暂养净化后大口黑鲈肌肉中的2-甲基异莰醇(2-methylisobornyl,2-MIB)含量会显著降低(P<0.05)。结论暂养净化对大口黑鲈肌肉的营养成分影响不大,对挥发性风味物质的影响较大,能有效改善鲈鱼风味,并减少鱼肉中的土腥味。 展开更多
关键词 大口黑鲈 暂养净化 营养成分 挥发性风味物质
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金属有机框架材料的制备及其在食品污染物分离分析中的应用 被引量：3
10
作者 周冬仁 郝贵杰 +7 位作者 徐磊 孙博怿 王雨辰 王俊 吴琦芳 高晟 孙伟杰 李占明 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第4期195-205,共11页
金属有机框架材料(metal-organic framework materials,MOFs)具有高比表面积、高吸附容量、高稳定性、结构可控、孔隙率可调等特点,在储能和转换器件、光催化剂、抗菌药物吸附,以及催化去除污染物等领域应用广泛。其中,在食品污染物的... 金属有机框架材料(metal-organic framework materials,MOFs)具有高比表面积、高吸附容量、高稳定性、结构可控、孔隙率可调等特点,在储能和转换器件、光催化剂、抗菌药物吸附,以及催化去除污染物等领域应用广泛。其中,在食品污染物的吸附或分析等相关研究领域具有良好的应用潜力。然而,MOFs材料对于食品污染物的吸附和检测,特别是农药残留、重金属污染和抗生素残留等相关研究的系统综述较少。本文详细介绍了MOFs材料的分类、特性及合成等内容,并系统概括了MOFs材料在食品污染物吸附和检测分析中的应用现状,以期为利用MOFs材料开发针对食品污染物的高灵敏性、高选择性的吸附材料和检测分析材料提供参考。 展开更多
关键词 金属有机框架材料 吸附 分离 传感 食品污染物
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珍珠和珍珠母贝蛋白肽提取分离、生物活性及其在营养与健康领域的应用研究进展 被引量：2
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作者 邹仙果 费洁羽 +6 位作者 郝贵杰 曾泽国 王龑 於雨碟 阮华君 杨开 孙培龙 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第12期455-460,共6页
蛋白肽是近年较热门的一种小分子多肽,在保健品领域应用广泛,珍珠和珍珠母贝蛋白肽是珍珠和珍珠母贝中的一种多肽类活性成分。本文总结了水提法、酸水解法和酶水解法等,以及色谱法和膜分离法制备珍珠和珍珠母贝蛋白肽的相关报道,并分析... 蛋白肽是近年较热门的一种小分子多肽,在保健品领域应用广泛,珍珠和珍珠母贝蛋白肽是珍珠和珍珠母贝中的一种多肽类活性成分。本文总结了水提法、酸水解法和酶水解法等,以及色谱法和膜分离法制备珍珠和珍珠母贝蛋白肽的相关报道,并分析了各提取和分离方法的优缺点,同时对其抗氧化、抗衰老、美白、抗菌、抗炎、降血压等生物活性及其在营养保健品和生物医药领域的应用进行了归纳,以期为珍珠和珍珠母贝蛋白肽的研究与高值化利用提供一定的参考。 展开更多
关键词 珍珠 蛋白肽 提取 生物活性 营养保健品 生物医药
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草鱼呼肠孤病毒湖州分离株的分离及鉴定 被引量：21
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作者 郝贵杰 沈锦玉 +3 位作者 潘晓艺 徐洋 姚嘉赟 尹文林 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期47-52,共6页
2008年6月从湖州某患病草鱼池塘采集草鱼出血病疑似病样,将除菌过滤后的患病鱼肝、脾、肾组织滤液,注射健康的8~10 cm的草鱼鱼种。5d后草鱼开始发病,且症状与原发病症状一样,死亡率为57%,对照组未有死亡。将无菌处理的病样滤液接种草鱼... 2008年6月从湖州某患病草鱼池塘采集草鱼出血病疑似病样,将除菌过滤后的患病鱼肝、脾、肾组织滤液,注射健康的8~10 cm的草鱼鱼种。5d后草鱼开始发病,且症状与原发病症状一样,死亡率为57%,对照组未有死亡。将无菌处理的病样滤液接种草鱼肾细胞（CIK）,连续接5代均出现明显的细胞病变（CPE）,并与草鱼呼肠孤病毒参考株所产生的CPE一致。该株病毒的TCID50为10-8/0.1ml。内脏组织经超薄切片,电子显微镜观察,发现组织内有大量的病毒颗粒,大小均一,近似球形,直径约70~75 nm。理化鉴定表明,氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比并没有多大变化,说明该株病毒对氯仿和乙醚有一定的抗性。经草鱼呼肠孤病毒特异性的RT-PCR检测,获得阳性的目的片段,测序的结果与草鱼呼肠孤病毒相应序列的同源性达99%以上。上述鉴定结果表明所分离的病毒为草鱼呼肠孤病毒,将其命名为HZ2008。 展开更多
关键词 草鱼 草鱼呼肠孤病毒 草鱼肾细胞 分离 鉴定
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草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白VP7基因真核表达载体pCI-VP7的构建及鉴定 被引量：9
13
作者 郝贵杰 潘晓艺 +3 位作者 姚嘉赟 徐洋 尹文林 沈锦玉 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期807-813,共7页
将编码草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)主要衣壳蛋白VP70.9kb的基因片段连接至克隆载体pMD19-T中,筛选阳性克隆并测序,经检测为正确序列后,再将目的片段克隆入真核表达载体pCI,筛选得到阳性重组质粒pCI-VP7。然后构建pCI-VP-... 将编码草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)主要衣壳蛋白VP70.9kb的基因片段连接至克隆载体pMD19-T中,筛选阳性克隆并测序,经检测为正确序列后,再将目的片段克隆入真核表达载体pCI,筛选得到阳性重组质粒pCI-VP7。然后构建pCI-VP-GFP重组表达质粒(即GFP基因与VP7的一段上游基因融合表达),用PCR及酶切方法鉴定克隆的正确性。并用脂质体法将其转染入真核细胞COS-1和CIK进行瞬时表达,荧光显微镜观察及RT-PCR特异性检测。结果表明,GFP基因与VP7的一段上游基因被成功转染到COS-1和CIK细胞,并得到了很好的表达。进而证明pCI-VP7可以成功的表达,为GCRV基因疫苗的研制提供了实验资料。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 衣壳蛋白 转染 真核表达
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草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定 被引量：9
14
作者 郝贵杰 沈锦玉 +2 位作者 徐洋 姚嘉贇 潘晓艺 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期808-810,共3页
目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析。方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM,以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA法对杂交瘤进行筛选,并鉴定mAb的生物学... 目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析。方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM,以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA法对杂交瘤进行筛选,并鉴定mAb的生物学特性。结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后,共获得5株抗草鱼IgM的mAbs,分别命名为4B3、2B11、4D5、3F2和4E6,它们的细胞上清ELISA效价为1∶3200～1∶6400,其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶6400和1∶256000,经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1。交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应,除mAb4B3外,其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应,而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应。mAb4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应,而与其他鱼类血清反应很弱。免疫印迹实验结果表明mAb4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链。ELISA检测mAb4D5对草鱼IgM的敏感性达10μg/L。结论:制备的抗草鱼IgMmAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 免疫球蛋白 间接ELISA 单克隆抗体 BALB/C小鼠
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抗哈维氏弧菌脂多糖单克隆抗体的制备及其鉴定 被引量：9
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作者 郝贵杰 沈锦玉 +2 位作者 潘晓义 曹铮 尹文林 《上海水产大学学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期274-279,共6页
以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性... 以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9。该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1∶1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应。用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC1108-1的LPS与2 F 9的反应部分减弱,免疫印迹结果表明2 F9识别LPS的类脂A抗原。用抑制ELISA法半定量检测GYC1108-1培养上清的LPS,测得培养48 h LPS释放量不超过39μg/mL,大大低于使鱼类致死所需的LPS的剂量。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 脂多糖 间接ELISA 单克隆抗体 免疫印迹 抑制ELISA 交叉反应
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大黄鱼病原哈维氏弧菌单克隆抗体的制备及其应用 被引量：7
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作者 郝贵杰 沈锦玉 +3 位作者 徐洋 姚嘉赟 潘晓艺 尹文林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期413-417,共5页
用甲醛灭活哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)GYC1108-1制备免疫原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经2—3次亚克隆后,共获得5株针对GYC1108-1的单克隆抗体。选取1B7... 用甲醛灭活哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)GYC1108-1制备免疫原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经2—3次亚克隆后,共获得5株针对GYC1108-1的单克隆抗体。选取1B7制备小鼠腹水抗体,其细胞上清及腹水效价分别为1∶3200和1∶32000。同样用灭活的哈维氏弧菌免疫新西兰大白兔,5次免疫后颈动脉采血,离心取血清,并用饱和硫酸铵法进行纯化,制备了兔抗哈维氏弧菌多克隆抗体,其ELISA效价为1∶51200。利用1B7单克隆抗体和兔抗哈维氏弧菌多克隆抗体以及山羊抗小鼠HRP酶标二抗,建立了检测哈维氏弧菌的三抗体夹心酶联免疫吸附试验(TAS-ELISA)方法。该方法对哈维氏弧菌的最小检出浓度为1×104个/mL。用该TAS-ELISA方法检测大黄鱼(Pseudosciaena crocea)样品,54尾患病大黄鱼中有45尾检出哈维氏弧菌,而14尾健康大黄鱼都没有检出哈维氏弧菌。由此可见,本试验建立的TAS-ELISA方法,可以用于患病大黄鱼哈维氏弧菌的快速诊断。 展开更多
关键词 大黄鱼 哈维氏弧菌 单克隆抗体 三抗体夹心酶联免疫吸附试验
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WSSV单抗的制备及其在红螯螯虾病毒病检测中的应用 被引量：7
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作者 郝贵杰 沈锦玉 +2 位作者 徐洋 曹铮 潘晓艺 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第2期120-125,共6页
将提纯的感染红螯螯虾的WSSV，免疫BALB／c小鼠，三次免疫后取其脾细胞与SP2／0融合．间接ELISA筛选，阳性克隆经3次亚克隆后，共获得7株针对WSSV的特异性单抗，分别命名为E2、C2、E3、G3、C4、D5以及F10．细胞上清ELISA效价为1：1600—... 将提纯的感染红螯螯虾的WSSV，免疫BALB／c小鼠，三次免疫后取其脾细胞与SP2／0融合．间接ELISA筛选，阳性克隆经3次亚克隆后，共获得7株针对WSSV的特异性单抗，分别命名为E2、C2、E3、G3、C4、D5以及F10．细胞上清ELISA效价为1：1600—1：6400．抗体亚类鉴定结果表明：E2、G3、C4属于IgG1，C2、D5、F10属于IgG3，E3属于IgG2a亚类；单抗热稳定性试验表明7株单抗均是热稳定的．选取单抗G3和F10进行病毒中和试验，结果表明：在适宜的抗原浓度下，两株单抗均有较好的中和能力．选取单抗G3作为一抗建立了间接ELISA方法，通过对人工感染红螯螯虾WSSV的测定，初步证实该单抗可用于WSSV的检测． 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 红螯螯虾 单克隆抗体 间接ELISA 中和试验
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奥尼罗非鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用 被引量：4
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作者 郝贵杰 潘晓艺 +3 位作者 徐洋 姚嘉赟 尹文林 沈锦玉 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期7-11,共5页
采用饱和硫酸铵盐析和Sephadex G-200柱层析方法制备奥尼罗非鱼Oreochromis niloticus×O.aureus(体质量为500～1 000 g)免疫球蛋白(IgM),以其为抗原免疫8周龄的BALB/c小鼠,免疫3～4次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELIS... 采用饱和硫酸铵盐析和Sephadex G-200柱层析方法制备奥尼罗非鱼Oreochromis niloticus×O.aureus(体质量为500～1 000 g)免疫球蛋白(IgM),以其为抗原免疫8周龄的BALB/c小鼠,免疫3～4次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法对杂交瘤进行筛选。结果表明:阳性克隆经3次亚克隆后,共获得6株针对罗非鱼IgM的单克隆抗体(mAb),分别命名为1C10、1C2、1G11、2C2、2F9和4B3,所有单抗均为IgG类,各株杂交瘤的细胞上清ELISA效价为1∶800～1∶3 200;制备4B3和1G11的腹水单抗,ELISA效价分别为1∶102 400和1∶6 400。免疫印迹试验结果表明,mAb 4B3能在变性条件下识别罗非鱼IgM的重链,约在相对分子质量85 000左右。用ELISA检测4B3对罗非鱼IgM的敏感性,IgM灵敏度为10μg/L。利用所制备的单抗4B3建立了评价无乳链球菌Streptococcus agalactiae灭活疫苗免疫罗非鱼血清抗体水平的三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)方法,结果表明:腹腔注射和浸泡免疫无乳链球菌灭活疫苗14 d后,两种免疫方式的罗非鱼血清抗无乳链球菌的抗体比对照组稍有增加;免疫21 d后,两种免疫方式的罗非鱼血清抗体均有明显增加;免疫35 d后增加更为显著,达到最高峰,注射组效价达1∶2 560,浸泡组达1∶640;免疫56 d后抗体开始下降,直到第98天还维持在明显高于对照组的抗体水平。本研究表明,所制备的罗非鱼IgM mAb可用于评价罗非鱼疫苗免疫效果及抗体产生规律等,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 奥尼罗非鱼 免疫球蛋白 间接ELISA 单克隆抗体 BALB C小鼠
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RT-PCR检测草鱼呼肠孤病毒的方法研究 被引量：5
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作者 郝贵杰 盛鹏程 +8 位作者 林锋 潘晓艺 徐洋 姚嘉赟 尹文林 曹铮 袁雪梅 蔺凌云 沈锦玉 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第1期8-13,共6页
草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)为草鱼出血病的病原.本实验根据GenBank中GCRV和其他水生呼肠孤病毒毒株的第六基因片段,在其保守区设计了一对GCRV特异性引物,建立了快速检测GCRV的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法.该PCR体... 草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)为草鱼出血病的病原.本实验根据GenBank中GCRV和其他水生呼肠孤病毒毒株的第六基因片段,在其保守区设计了一对GCRV特异性引物,建立了快速检测GCRV的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法.该PCR体系中,上下游引物的最适终浓度为120 nmol/L,最适退火温度为52℃.PCR特异性试验表明:所设计的引物只能扩增GCRV的核酸,而不能扩增嗜水气单胞菌BSK-10、WSSV以及正常CIK细胞的DNA或RNA.敏感性试验表明,当GCRV的反转录模板稀释至5-7时,PCR结果还为阳性.用所建立的RT-PCR方法对5份样品进行检测,结果表明本研究建立的RT-PCR检测方法可靠且可行. 展开更多
关键词 GCRV 草鱼肾细胞系 逆转录聚合酶链式反应 细胞病变效应 快速诊断
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哈维氏弧菌GYC1108-1胞外蛋白酶的制备及免疫原性研究 被引量：4
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作者 郝贵杰 沈锦玉 +2 位作者 潘晓艺 尹文林 曹铮 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期107-112,共6页
胞外蛋白酶(ECPase)是哈维氏弧菌GYC1108-1胞外产物的主要致病因子,经鉴定其为半胱氨酸蛋白酶,分子量约55kD,能够分解脱脂奶中的酪蛋白,命名为1108-ECPase。本实验建立了胞外蛋白酶活性平板法检测1108-ECPase和YZ-ECPase的相对酶活(YZ... 胞外蛋白酶(ECPase)是哈维氏弧菌GYC1108-1胞外产物的主要致病因子,经鉴定其为半胱氨酸蛋白酶,分子量约55kD,能够分解脱脂奶中的酪蛋白,命名为1108-ECPase。本实验建立了胞外蛋白酶活性平板法检测1108-ECPase和YZ-ECPase的相对酶活(YZ为由本实验室构建的能够分泌目的蛋白酶的重组菌),并利用这个方法确定了细菌分泌ECPase达最高峰的培养时间为36h,粗提ECPase最适的饱和硫酸铵浓度为70%。GYC1108-1和YZ培养上清经硫酸铵盐析,SephadexG-25凝胶过柱后,得到较为纯化的1108-ECPase和YZ-ECPase。选择白油、蜂胶和弗氏3种不同佐剂与适量抗原混匀,分别免疫3只ICR小鼠,并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。3次免疫后制备小鼠血清,间接ELISA测定抗体效价,除空白对照外,其他8组小鼠的免疫血清效价达1∶1.6×104～1∶2.56×105,免疫组的效价从高到低依次为弗氏>白油>蜂胶>不加佐剂,不同佐剂的免疫效果依次为:弗氏>白油>蜂胶。免疫印迹实验结果表明,小鼠血清在55kD处有明显的反应条带。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 胞外蛋白酶 佐剂 间接ELISA 免疫印迹
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