CRISPR/Cas9介导的adeG基因敲除大肠杆菌细菌模型的建立

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作者 朱恬仪 孔桂美 +5 位作者 焦红梅 郭停停 乌日汗 刘翠翠 高成凤 李国才 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期55-64,共10页

【目的】鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是引起医院内感染的重要条件致病菌之一,耐药性AB是目前防治的棘手问题。细菌外排泵是引起耐药性的重要原因之一,拟通过PCR检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(resistance-nodulation-d... 【目的】鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是引起医院内感染的重要条件致病菌之一,耐药性AB是目前防治的棘手问题。细菌外排泵是引起耐药性的重要原因之一,拟通过PCR检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族(resistance-nodulation-division,RND)外排泵基因adeLFGH的分布,探索其与耐药性的关系;建立adeG耐药基因模型,利用CRISPR/Cas9系统对其进行靶向敲除的初步研究。【方法】运用肉汤微量稀释法检测耐药性分布;PCR筛查13株临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌adeLFGH外排泵基因并分析其分布;扩增RND外排泵关键基因adeG并构建耐药细菌模型;设计特异性sgRNA,利用CRISPR/Cas9系统进行靶向敲除,药敏实验检测其敲除效果。【结果】13株临床鲍曼不动杆菌对多黏菌素E敏感,对左氧氟沙星耐药率较低,仅为38.5%,对头孢他啶的耐药率为92.3%,对妥布霉素耐药率为84.6%,对其他临床常见药物耐药率均为100%。13株多重耐药鲍曼不动杆菌adeLFGH携带率为100%。药敏实验结果显示adeG模型耐药菌株的哌拉西林、替卡西林/克拉维酸以及哌拉西林/他唑巴坦由敏感转为耐药,氯霉素、美罗培南、米诺环素由敏感转为中介。特异性sgRNA介导CRISPR/Cas9系统靶向敲除效率不同。pCas9-sgRNA1(adeG)靶向后哌拉西林/他唑巴坦的耐药性得到了逆转,对妥布霉素、四环素、多西环素、米诺环素的耐药性也有不同程度的降低;pCas9-sgRNA2(adeG)和pCas9-sgRNA3(adeG)使哌拉西林/他唑巴坦由耐药恢复到了中介,但对其他药物的耐药性逆转效果并不显著。【结论】特异性CRISPR/Cas9系统可以特异性敲除耐药基因,提示可为耐药菌的治疗提供新的思路和方法。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 耐药性 sgRNA adeG

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鲍曼不动杆菌多黏菌素E耐药机制研究

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作者 郭停停 杨厉颖 +4 位作者 李梦影 杨洁 孙晓利 周娜 李国才 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2023年第5期87-94,共8页

为探讨鲍曼不动杆菌新的多黏菌素E耐药机制,采用体外诱导法将临床菌株和参考菌株诱导成多黏菌素E耐药株。利用生长曲线、生物膜形成、体外竞争和抗血清试验检测多黏菌素E耐药前后菌株生物学性状变化。PCR和qRT-PCR试验检测多黏菌素E耐... 为探讨鲍曼不动杆菌新的多黏菌素E耐药机制,采用体外诱导法将临床菌株和参考菌株诱导成多黏菌素E耐药株。利用生长曲线、生物膜形成、体外竞争和抗血清试验检测多黏菌素E耐药前后菌株生物学性状变化。PCR和qRT-PCR试验检测多黏菌素E耐药后相关基因序列及表达量的变化。结果表明:多黏菌素E耐药前后菌株生长曲线未发现显著差异。AB13-R耐药株生物膜形成能力显著增强,另外2菌株生物膜形成能力在耐药前后无显著差异。鲍曼不动杆菌获得多黏菌素E耐药后均表现出体外竞争缺陷。AB156-R与其敏感菌相比抗血清增强,而ATCC19606-R和AB13-R与其敏感菌相比抗血清降低。AB13-R中pmrB基因谷氨酸缺失,脂多糖(LPS)合成及脂质A合成基因下调,药物外排泵基因上调,达到LPS合成减少并降低菌体内药物浓度,使AB13-R对多黏菌素E耐药。ATCC19606-R及AB156-R中均无基因突变,可能由其他机制介导菌株对多黏菌素E耐药。综上,鲍曼不动杆菌获得多黏菌素E耐药后会出现适应性改变,pmrB基因中谷氨酸的缺失可能是新的多黏菌素E耐药机制。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 多黏菌素E 耐药机制

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技术非对称发展下的区域工业经济研究——基于省际面板数据 被引量：1

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作者 卫平 郭停停 《工业技术经济》 CSSCI 北大核心 2017年第4期3-9,共7页

基于"再工业化"、供给侧结构性改革的背景下,本文运用2002~2014年的面板数据研究在省际自主研发和引进技术两种技术进步方式非对称发展下区域工业经济发展问题,研究表明:引进技术和自主研发都促进了西部地区工业经济发展,引... 基于"再工业化"、供给侧结构性改革的背景下,本文运用2002~2014年的面板数据研究在省际自主研发和引进技术两种技术进步方式非对称发展下区域工业经济发展问题,研究表明:引进技术和自主研发都促进了西部地区工业经济发展,引进技术的促进作用更大,但是引进技术对区域经济发展存在"倒U型"机制,过度引进技术、忽略自主研发会陷入"引进——落后——再引进"的技术陷阱,且在"再工业化"国际趋势下,引进技术的边际收益变小,此外劳动力在模型中的作用并不显著,因此为快速缩小区域工业经济差距,现阶段西部地区应实行以引进技术为主、兼顾二次创新的技术发展战略,同时应注重制定因地制宜的人才激励政策,吸引本地人才回流。 展开更多

关键词 技术非对称 自主研发 技术引进 区域工业经济 生产函数

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促性腺激素抑制激素在公猪下丘脑-垂体-睾丸轴的分布定位研究 被引量：5

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作者 郑路程 苏娟 +5 位作者 房蕊 靳蒙蒙 马志禹 郭停停 侯园龙 雷治海 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期101-105,共5页

为揭示促性腺激素抑制激素(GnIH)在公猪生殖发育中的作用,本研究以15头雄性小梅山猪为研究对象,用免疫组化和半定量RT-PCR方法研究3、30、60、90和120 d的公猪(n=3)GnIH阳性细胞在下丘脑-垂体-睾丸轴的分布定位及在下丘脑的发育学变化... 为揭示促性腺激素抑制激素(GnIH)在公猪生殖发育中的作用,本研究以15头雄性小梅山猪为研究对象,用免疫组化和半定量RT-PCR方法研究3、30、60、90和120 d的公猪(n=3)GnIH阳性细胞在下丘脑-垂体-睾丸轴的分布定位及在下丘脑的发育学变化。结果表明:GnIH在下丘脑主要分布于室旁核,GnIH阳性神经元呈纺锤形和多角形,且在下丘脑室旁核GnIH阳性神经元数目随日龄增长而上下波动,形态趋向成熟;在垂体分布非常广泛,无论是腺垂体还是神经垂体均有强烈的免疫阳性反应;在睾丸集中分布于生精小管内部,可见强烈的免疫阳性反应,在间质细胞也可见免疫阳性反应。GnIH mRNA的丰度随日龄增长而呈规律性波动,在120 d出现显著降低(P<0.05)。结论:GnIH分布于小梅山公猪下丘脑-垂体-睾丸轴,并对其发育有调节作用。 展开更多

关键词 促性腺激素抑制激素(GnIH) 公猪 小梅山猪 下丘脑-垂体-睾丸轴

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动物源抗菌肽治疗鲍曼不动杆菌感染的研究进展 被引量：1

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作者 郭停停 陆超榕 +6 位作者 高洁 开龙鑫 孙晓利 杨厉颖 焦红梅 孔桂美 李国才 《实用临床医药杂志》 CAS 2021年第19期123-127,132,共6页

鲍曼不动杆菌是一种革兰阴性菌,是重要的病原菌之一。由于抗生素的滥用,多重耐药鲍曼不动杆菌的检出率越来越高。抗菌肽作为细菌感染治疗的替代品,是从生物体中自然产生的,具有快速杀伤和高效广谱的抗菌活性。本文对人源、两栖动物源、... 鲍曼不动杆菌是一种革兰阴性菌,是重要的病原菌之一。由于抗生素的滥用,多重耐药鲍曼不动杆菌的检出率越来越高。抗菌肽作为细菌感染治疗的替代品,是从生物体中自然产生的,具有快速杀伤和高效广谱的抗菌活性。本文对人源、两栖动物源、昆虫源抗菌肽在治疗鲍曼不动杆菌感染中的作用、机制和应用前景进行综述。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 抗菌肽 抗菌活性 作用机制

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“翻转课堂”在医学院校机能实验学教学中的应用 被引量：2

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作者 郭停停 何新龙 李国才 《新课程研究》 2021年第36期75-76,共2页

医学院校是医学教育的主力军,教师要熟知国际发展动态,努力推进教育教学改革。机能实验学是本科生的一门必修课,目前的教学方法仍为传统的“填鸭式”,该方式已不能满足医学教育新形势下的要求。翻转课堂是一种新型的教学模式,这种教学... 医学院校是医学教育的主力军,教师要熟知国际发展动态,努力推进教育教学改革。机能实验学是本科生的一门必修课,目前的教学方法仍为传统的“填鸭式”,该方式已不能满足医学教育新形势下的要求。翻转课堂是一种新型的教学模式,这种教学模式将知识传授与知识内化的顺序颠倒。本文对当今社会可用于机能实验学“翻转课堂”的策略进行总结。 展开更多

关键词 机能实验学 翻转课堂 教学改革

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AdeB基因变异介导鲍曼不动杆菌多药耐药 被引量：1

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作者 李金月 李梦影 +7 位作者 郑文浩 焦红梅 郭停停 何新龙 任禛誉 张译尹 董华兴 李国才 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2019年第6期47-53,共7页

采用纸片扩散法(K-B法)测定鲍曼不动杆菌(AB)菌株对临床常用9大类22种抗生素的耐药性,应用PCR检测耐药基因,将耐药基因adeB转化至敏感菌株AB43中,荧光定量PCR检测AdeB mRNA的转录,药敏试验检测转化后菌株的耐药性变化。结果表明:收集的6... 采用纸片扩散法(K-B法)测定鲍曼不动杆菌(AB)菌株对临床常用9大类22种抗生素的耐药性,应用PCR检测耐药基因,将耐药基因adeB转化至敏感菌株AB43中,荧光定量PCR检测AdeB mRNA的转录,药敏试验检测转化后菌株的耐药性变化。结果表明:收集的68株AB对亚胺培南和美罗培南耐药率分别高达51.47%和50.00%。耐药基因adeR、adeS、adeA、adeB、adeC、OXA-23、OXA-51、TEM-1、VIM-1在碳青霉烯类耐药、中介及敏感株中的分布差异不大;adeB基因在耐药株和敏感株中的序列存在较大差异,二者同源区也存在3个氨基酸残基的变异;耐药菌株来源的adeB基因在敏感菌株中表达后可导致AB的耐药性显著增强。这一研究提示AdeB基因变异可导致AB多药耐药性显著增加。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 耐药性 基因变异 AdeB基因

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动物福利在动物传染病实验教学中的思考 被引量：3

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作者 郇长超 陈鹏翔 +2 位作者 郭停停 高清清 高崧 《教育教学论坛》 2020年第49期382-384,共3页

实验动物在动物传染病研究中作出了巨大的贡献。在动物传染病实验教学中,发现学生缺乏实验动物福利的相关知识,对实验动物福利的科学认知不足,不能科学、正确地认识和对待实验动物,不能科学、合理地使用实验动物,不能充分发挥实验动物... 实验动物在动物传染病研究中作出了巨大的贡献。在动物传染病实验教学中,发现学生缺乏实验动物福利的相关知识,对实验动物福利的科学认知不足,不能科学、正确地认识和对待实验动物,不能科学、合理地使用实验动物,不能充分发挥实验动物的优势和作用。为进一步提升学生对动物生命伦理的认识,在动物传染病实验教学中应加强动物生命伦理的教育;为加强学生的动物福利素养,应规范动物福利课程设置和教育;为提高学生对动物实验的认知,应遵循动物福利的5项基本自由和3R原则,在动物传染病实验教学中贯彻学生的动物福利观。使学生能更加规范地开展动物实验,为以后科研生涯奠定基础,从而促进动物传染病学与人类道德文明的和谐发展。 展开更多

关键词 动物传染病 动物福利 实验动物 实验教学

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鲍曼不动杆菌CRISPR相关蛋白Csy1对耐药性和毒力的影响

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作者 李梦影 孙晓利 +7 位作者 王宇航 杨洁 郑文浩 何香玲 季诗雨 焦红梅 郭停停 李国才 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2021年第1期35-40,共6页

采用RecAb同源重组系统,将携带I-Fb亚型CRISPR-Cas系统的鲍曼不动杆菌临床分离株AB43的csy1基因敲除,观察野生株(AB43)和缺失株(AB43Δcsy1)的耐药性、生物膜形成以及小鼠致死率等生物学性状变化,并通过转录组测序分析两者间的差异表达... 采用RecAb同源重组系统,将携带I-Fb亚型CRISPR-Cas系统的鲍曼不动杆菌临床分离株AB43的csy1基因敲除,观察野生株(AB43)和缺失株(AB43Δcsy1)的耐药性、生物膜形成以及小鼠致死率等生物学性状变化,并通过转录组测序分析两者间的差异表达基因。与野生株相比,csy1的缺失显著提高突变株的耐药水平和体外形成生物膜的能力,且AB43Δcsy1感染组小鼠的存活率与AB43感染组相比显著降低,提示其毒力有所提高。RNA-seq分析结果显示,csy1的缺失能影响细菌与抗生素耐药性、毒力以及代谢相关基因的表达,推测是引起AB43Δcsy1表型变化的主要原因。结果提示Csy1蛋白可通过调节自身基因表达抑制鲍曼不动杆菌的耐药性、生物膜形成及致病性。这说明创造有利于维持CRISPR-Cas系统的环境,保证CRISPR-Cas系统阳性菌株处于进化优势地位,使鲍曼不动杆菌保持低毒力和抗生素敏感状态。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 CRISPR-Cas系统 Csy1蛋白 耐药性 毒力

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神经介素B研究进展 被引量：5

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作者 雷瑞鹏 高清松 +3 位作者 马志禹 郭停停 马俊晓 雷治海 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第6期87-92,共6页

神经介素B(neuromedine B,NMB)是1983年从猪脊髓提纯分离的一种神经肽,含10个氨基酸,大分子肽含32个氨基酸,属于蛙肽家族,为铃蟾肽相关肽。NMB通过其受体发挥生物学作用,铃蟾肽受体家族有3～4种(BB1、BB2、BRS-3、BB4或BRS-3.5),NMB优... 神经介素B(neuromedine B,NMB)是1983年从猪脊髓提纯分离的一种神经肽,含10个氨基酸,大分子肽含32个氨基酸,属于蛙肽家族,为铃蟾肽相关肽。NMB通过其受体发挥生物学作用,铃蟾肽受体家族有3～4种(BB1、BB2、BRS-3、BB4或BRS-3.5),NMB优先受体是BB1(NBM-R),与其他受体的亲和力较低。NMB及其受体在中枢神经系统和外周组织广泛分布,具有多种生物学作用,包括刺激平滑肌收缩,改变胃肠道的运动性,抑制垂体促甲状腺素的释放;参与摄食和体温调节,介导应激和恐惧反应,影响行为和记忆,促进肿瘤生长等。 展开更多

关键词 神经介素B 神经介素B受体 铃蟾肽相关肽 综述

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黏菌素与其他药物联用治疗多药耐药鲍曼不动杆菌感染的研究进展

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作者 何思勉 刘智超 +3 位作者 杨洁 杨厉颖 孙晓利 郭停停 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期491-497,共7页

黏菌素,即多黏菌素E,是一种多肽类抗生素,可用于治疗革兰阴性杆菌感染。由于黏菌素破坏细菌细胞膜结构的特性,在体外或体内与许多药物都有协同效应,可通过联合用药治疗多药耐药鲍曼不动杆菌感染。黏菌素与美罗培南联用临床上可治疗碳青... 黏菌素,即多黏菌素E,是一种多肽类抗生素,可用于治疗革兰阴性杆菌感染。由于黏菌素破坏细菌细胞膜结构的特性,在体外或体内与许多药物都有协同效应,可通过联合用药治疗多药耐药鲍曼不动杆菌感染。黏菌素与美罗培南联用临床上可治疗碳青霉烯敏感鲍曼不动杆菌感染,黏菌素与舒巴坦、黏菌素与米诺环素的组合也有良好的抗菌作用和安全性。替加环素、利福平、万古霉素等抗生素与黏菌素联用尽管在体外及小鼠实验中展现出协同效应,但临床上与黏菌素联用治疗鲍曼不动杆菌感染的效果尚不明确。此外,黏菌素与达托霉素、替考拉宁的联用在实验室中展现出良好的杀菌效果,其疗效有待临床研究的证实。 展开更多

关键词 黏菌素 抗生素 联合用药 抗药性 多药 鲍曼不动杆菌

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双组份系统在鲍曼不动杆菌毒力和耐药中的作用及机制 被引量：1

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作者 郭停停 马文景 +5 位作者 陈国微 孙晓利 杨厉颖 焦红梅 孔桂美 李国才 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第11期1353-1356,1363,共5页

鲍曼不动杆菌是不动杆菌属中较为多见的一种专性需氧的非发酵革兰阴性菌,也是导致医院内感染的常见病原菌之一。该菌在环境中广泛分布且存活时间较长,可引起呼吸道感染、败血症等。近年来,鲍曼不动杆菌感染持续增多且其耐药性逐渐增强,... 鲍曼不动杆菌是不动杆菌属中较为多见的一种专性需氧的非发酵革兰阴性菌,也是导致医院内感染的常见病原菌之一。该菌在环境中广泛分布且存活时间较长,可引起呼吸道感染、败血症等。近年来,鲍曼不动杆菌感染持续增多且其耐药性逐渐增强,已成为危重症患者的一大威胁。作者就近年来有关双组份系统在鲍曼不动杆菌毒力及耐药中的作用及机制的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 双组份系统 毒力 多重耐药 基因表达 综述

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CRISPR系统中Cas蛋白的分类及作用机制 被引量：8

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作者 冯欢欢 单彩龙 +8 位作者 李金月 陆佳静 王茜璐 沈沁浩 焦红梅 阴银燕 孔桂美 郭停停 李国才 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期652-654,663,共4页

CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)系统存在于40%细菌与90%古细菌中,由前导序列、回文重复序列、相关Cas蛋白三部分构成。Cas蛋白是CRISPR系统中的一类核酸酶,对CRISPR系统发挥获得性免疫功能具有重... CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)系统存在于40%细菌与90%古细菌中,由前导序列、回文重复序列、相关Cas蛋白三部分构成。Cas蛋白是CRISPR系统中的一类核酸酶,对CRISPR系统发挥获得性免疫功能具有重要作用。已鉴定出至少45个Cas蛋白家族,其多样性对现有分类系统提出了巨大挑战。不同类型的Cas蛋白在CRISPR系统适应、表达、干扰等作用阶段发挥的功能各异。本文主要讨论Cas蛋白的分类及作用机制的研究进展。 展开更多

关键词 CRISPR Cas蛋白 获得性免疫 核酸酶 综述

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