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LY294002抑制TFF3阳性甲状腺乳头状癌TPC-1细胞恶性生物学行为 被引量：6
1
作者 郭梦姚 裴达 +4 位作者 林旭 张文静 王树 吴靖芳 薛刚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1684-1690,共7页
目的探讨PI3K/AKT通路抑制剂LY294002对肠三叶因子3(intestinal trefoil factor,TFF3)阳性甲状腺乳头状癌细胞TPC-1恶性生物学行为的影响及机制。方法不同浓度LY294002培养的TFF3过表达甲状腺乳头状癌细胞TFF3-TPC-1为实验组;TFF3-TPC-... 目的探讨PI3K/AKT通路抑制剂LY294002对肠三叶因子3(intestinal trefoil factor,TFF3)阳性甲状腺乳头状癌细胞TPC-1恶性生物学行为的影响及机制。方法不同浓度LY294002培养的TFF3过表达甲状腺乳头状癌细胞TFF3-TPC-1为实验组;TFF3-TPC-1细胞株为过表达组;野生型TPC-1细胞株为Control组。倒置显微镜观察各组细胞形态变化;生长曲线检测各组细胞增殖水平;Transwell和划痕实验检测侵袭和迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡比例;Western blot检测与通路和凋亡相关蛋白的表达。结果形态学显示,实验组细胞间隙随LY294002浓度增加而变大,且圆形透亮细胞增多。LY294002呈浓度依赖性地抑制TFF3-TPC-1细胞的增殖、侵袭和迁移并逐渐诱导细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。Western blot显示通路蛋白和抗凋亡蛋白p-Akt、p-IκB-α、NF-κB-p65、Bcl-2随LY294002浓度增加而被下调,促凋亡蛋白IκB-α、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、Bax表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论LY294002可有效抑制TFF3阳性TPC-1细胞恶性生物学行为,其机制可能与LY294002通过抑制Akt磷酸化,下调PI3K/AKT通路及下游NF-κB等转录因子活性有关。 展开更多
关键词 LY294002 PI3K/AKT/NF-κB 甲状腺乳头状癌 凋亡 p-IκB-α IΚB-Α cleaved-caspase-3 cleaved-caspase-9
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三叶因子3/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子-κB在人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1增殖和凋亡中的作用 被引量：1
2
作者 郭梦姚 孙琳 +4 位作者 林旭 张文静 张静 吴靖芳 薛刚 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期528-535,共8页
目的探讨三叶因子3(TFF3)对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗粒,病毒液转染TPC-1细胞,构建稳定增强TFF3表达的TFF3-TPC-1细... 目的探讨三叶因子3(TFF3)对人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法构建TFF3基因过表达和敲低表达的慢病毒表达载体,包装293T细胞,产生慢病毒颗粒,病毒液转染TPC-1细胞,构建稳定增强TFF3表达的TFF3-TPC-1细胞系以及增强对照组细胞系ConT FF3-TPC-1;构建抑制TFF3表达的shRNA-TFF3-TPC-1细胞系以及沉默对照组细胞系shC on-TPC-1;利用Western blotting实验与Real\|time PCR验证TFF3过表达和沉默效率;生长曲线和集落形成实验检测4组细胞增殖状况;流式细胞术检测4组细胞凋亡情况;Western blotting和免疫细胞化学染色检测凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、核因子-κB(NF-κB)通路蛋白表达水平。结果1.成功构建TFF3过表达和抑制表达稳转细胞系TFF3-TPC-1及细胞系shRNA-TFF3-TPC-1;2.TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显高于ConT FF3-TPC-1组(P<0.05或P<0.01),shRNA-TFF3-TPC-1细胞增殖能力和集落形成能力明显低于shC on-TPC-1组(P<0.01);3.TFF3-TPC-1细胞凋亡率低于ConT FF3-TPC-1(0.75%±0.08%vs 5.62%±0.3%,P<0.01),shRNA-TFF3-TPC-1凋亡率高于shC on-TPC-1(22.2%±1.2%vs 5.34%±0.4%,P<0.01);4.沉默TFF3基因后,Bax、细胞色素C(Cyt-C)、cleaved-Caspase-9、cleaved-Caspase-3表达升高,Bcl-2、通路蛋白Akt、p-Akt、NF-κB-P65表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论TFF3可能通过影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路调节TPC-1细胞的增殖和凋亡。 展开更多
关键词 三叶因子3 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/核因子κB 甲状腺乳头癌 慢病毒转染 免疫印迹法 流式细胞术 实时定量聚合酶链反应 人
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大肠杆菌感受态细胞制备及转化研究现状 被引量：4
3
作者 郭梦姚 吴靖芳 《河北北方学院学报（自然科学版）》 2020年第8期44-48,共5页
大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)又称大肠杆菌,因结构简单、遗传背景明确而成为基因克隆实验中最常用的受体菌种。感受态细胞的制备与转化是生物转化实验中的重要环节,大肠杆菌感受态细胞的转化效率直接影响携带目的基因的重组... 大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)又称大肠杆菌,因结构简单、遗传背景明确而成为基因克隆实验中最常用的受体菌种。感受态细胞的制备与转化是生物转化实验中的重要环节,大肠杆菌感受态细胞的转化效率直接影响携带目的基因的重组质粒能否导入受体细胞,表达出新的遗传性状。大肠杆菌感受态细胞(competent cells)制备常采用物理或化学方式改变细胞膜通透性,诱导受体菌摄取外源性DNA并整合入受体菌。此外,细菌细胞密度值(OD600)、转化液浓度、热激参数、培养条件等因素也影响转化效率。综述了国内外大肠杆菌感受态细胞的制备及转化方法,以期为各大实验室制备和转化大肠杆菌感受态细胞提供参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 制备方法 转化
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三叶因子3对甲状腺乳头状癌细胞周期的影响及机制 被引量：5
4
作者 代金 林旭 +4 位作者 郭梦姚 张静 张文静 薛刚 吴靖芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期211-219,共9页
目的探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。方法包装TFF3 shRNA慢病毒载体,病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况;... 目的探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。方法包装TFF3 shRNA慢病毒载体,病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况;流式细胞术检测TFF3基因对TPC-1和BCPAP细胞周期的影响;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测P27、P21和cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶(CDK) 4 mRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blotting)、免疫细胞化学染色检测周期相关蛋白P27、P21、cyclin D1、CDK4和蛋白激酶B(Akt)、p Akt的蛋白表达水平。结果成功包装TFF3 shRNA慢病毒载体,病毒液感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验结果显示,沉默TFF3后,细胞增殖能力减弱;流式细胞术结果显示,与对照组相比,TFF3基因沉默组G1期的细胞比例明显增高(*P<0. 05),S和G2期的细胞比例明显下降(*P<0. 05); TFF3沉默组TPC-1和BCPAP细胞中的P27、P21 mRNA和蛋白明显上调(*P<0. 05),而cyclin D1,CDK4mRNA和蛋白表达降低(*P<0. 05); 4株细胞Akt蛋白含量无明显差异,但沉默TFF3组磷酸化蛋白激酶B(p Akt)表达减弱;免疫细胞化学染色显示,cyclin D1阳性蛋白位于癌细胞胞核,P27、P21蛋白表达于胞质和胞核,且沉默TFF3后在细胞核中阳性信号增强,细胞质中阳性表达降低。结论沉默TFF3可明显延长甲状腺癌细胞周期,抑制细胞的增殖,可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 三叶因子3 细胞周期 慢病毒转染 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B 流式细胞术 人
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空调控温与保粮磷综合应用试验研究 被引量：3
5
作者 郭梦姚 《现代食品》 2020年第15期1-3,共3页
利用智能空调调节粮堆温度,可以有效控制粮温上升速度,使粮堆冷芯在夏季得以维持,同时在粮堆表层施拌保粮磷,防治书虱和螨类,抑制因上层粮温相对较高而引发的储粮害虫生长繁殖,使粮堆一直处于无虫或基本无虫粮状态,既减少了储粮熏蒸药... 利用智能空调调节粮堆温度,可以有效控制粮温上升速度,使粮堆冷芯在夏季得以维持,同时在粮堆表层施拌保粮磷,防治书虱和螨类,抑制因上层粮温相对较高而引发的储粮害虫生长繁殖,使粮堆一直处于无虫或基本无虫粮状态,既减少了储粮熏蒸药剂使用,又延缓了储粮品质劣变,实现全年免熏蒸和绿色储粮。 展开更多
关键词 空调控温 保粮磷 绿色储粮 免熏蒸
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平房仓储藏小麦压盖与非压盖温度对比试验 被引量：1
6
作者 郭梦姚 刘磊 +2 位作者 王中伟 袁靖 鲁克 《现代食品》 2021年第20期50-52,共3页
对高大平房仓储藏的小麦相同条件下压盖与不压盖三温进行对比,试验表明利用覆铝箔EPE珍珠棉进行压盖的小麦仓房,在夏季高温季节可以有效减缓表层粮温上升速度,延缓小麦品质变化,使小麦在储藏期间水分流失减缓,从而实现准低温或低温储粮... 对高大平房仓储藏的小麦相同条件下压盖与不压盖三温进行对比,试验表明利用覆铝箔EPE珍珠棉进行压盖的小麦仓房,在夏季高温季节可以有效减缓表层粮温上升速度,延缓小麦品质变化,使小麦在储藏期间水分流失减缓,从而实现准低温或低温储粮,压盖薄膜可以重复利用,节省低温储粮费用。 展开更多
关键词 薄膜压盖 低温储藏 小麦
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