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FACS技术在酶定向进化中的应用
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作者 刘金升 陈振娅 +1 位作者 霍毅欣 郭淑元 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期93-106,共14页
流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种在单细胞水平上对大量细胞进行快速、相对定量的多参数分析技术。基于FCM建立的荧光激活细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)可物理分离荧光标记的单细胞,目前已被广泛应用于酶... 流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种在单细胞水平上对大量细胞进行快速、相对定量的多参数分析技术。基于FCM建立的荧光激活细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)可物理分离荧光标记的单细胞,目前已被广泛应用于酶定向进化领域。定向进化已被证明是获得高酶活、强热稳定性、耐溶剂性等优良性质工业酶的有效方法,其首先需通过随机突变和DNA重组等方法构建酶突变文库,随后需在人工选择压力下对突变文库进行筛选。传统筛选方法如平板法、微孔板法等,存在通量低、成本高、误差大、准确性差等局限,无法实现对大型文库的高通量筛选。相较于传统筛选方法,FACS具有高通量、耗费低、误差小、精度高等优势。本文首先总结了FCM及FACS的发展进程,以及由此衍生的相关仪器的组成和分类,随后讨论了FACS在酶定向进化中的应用现状及现阶段的应用局限性,最后总结并展望了FACS发展方向及其在酶定向进化领域的应用前景。 展开更多
关键词 流式细胞术 荧光激活细胞分选 高通量筛选 定向进化
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卤水-氨法沉淀制备滤饼状氢氧化镁 被引量:5
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作者 郭淑元 张雨山 +4 位作者 黄西平 张家凯 刘骆峰 王玉琪 武海虹 《化学工业与工程》 CAS 2010年第1期30-33,共4页
以卤水和氨水为原料,制备滤饼状氢氧化镁,主要考察了反应温度和时间、陈化温度和时间、物料配比等条件对制备滤饼状氢氧化镁的影响,得出了最适宜制备工艺条件,在该条件下制备滤饼状氢氧化镁符合HY/T111-2008规定的技术指标,卤水中的镁... 以卤水和氨水为原料,制备滤饼状氢氧化镁,主要考察了反应温度和时间、陈化温度和时间、物料配比等条件对制备滤饼状氢氧化镁的影响,得出了最适宜制备工艺条件,在该条件下制备滤饼状氢氧化镁符合HY/T111-2008规定的技术指标,卤水中的镁离子转化率高于95%。 展开更多
关键词 卤水 氨水 氢氧化镁 制备
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碱式硫酸镁晶须的制备 被引量:4
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作者 郭淑元 张雨山 +1 位作者 黄西平 董泽亮 《化学工业与工程》 CAS 2011年第2期35-39,共5页
利用苦卤与工业氨水反应制备氢氧化镁滤饼,按比例将其与一定浓度的七水硫酸镁溶液置于高压反应釜中,通过水热反应制备碱式硫酸镁晶须,主要考察了物料配比、七水硫酸镁浓度、反应温度、搅拌速度和反应时间对晶须晶形的影响,得出适宜条件... 利用苦卤与工业氨水反应制备氢氧化镁滤饼,按比例将其与一定浓度的七水硫酸镁溶液置于高压反应釜中,通过水热反应制备碱式硫酸镁晶须,主要考察了物料配比、七水硫酸镁浓度、反应温度、搅拌速度和反应时间对晶须晶形的影响,得出适宜条件为:七水硫酸镁的浓度为0.8 mol/L,m(七水硫酸镁)∶m(氢氧化镁)为2∶1,反应温度为160℃,搅拌速度为300 r/min,反应时间为8 h。并对在此条件下合成的晶须进行了化学分析、电镜扫描(SEM)观察、X射线衍射(XRD)分析及TG-DTG分析。 展开更多
关键词 碱式硫酸镁 晶须 水热反应
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精氨酸激酶及其底物复合物的结晶和结晶学初步研究 被引量:4
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作者 郭淑元 叶盛 +2 位作者 王政 王希成 刘一苇 《自然科学进展》 北大核心 2004年第12期1475-1478,共4页
精氨酸激酶是一种存在于无脊椎动物体内的磷酸源激酶 ,对于无脊椎动物体内能量的代谢、储存和利用具有至关重要的作用 .海参体内的精氨酸激酶在磷酸源激酶的进化中具有特殊的地位 ,氨基酸序列比对的结果表明 :它与鲎源单亚基精氨酸激酶... 精氨酸激酶是一种存在于无脊椎动物体内的磷酸源激酶 ,对于无脊椎动物体内能量的代谢、储存和利用具有至关重要的作用 .海参体内的精氨酸激酶在磷酸源激酶的进化中具有特殊的地位 ,氨基酸序列比对的结果表明 :它与鲎源单亚基精氨酸激酶的氨基酸序列的同源性为 6 4% ,而与双亚基兔肌肌酸激酶的氨基酸序列同源性却达到了 75 % .为了揭示海参源精氨酸激酶的催化机理 ,研究其与单亚基精氨酸激酶及肌酸激酶催化机理的异同 ,实验获得了精氨酸激酶复合物晶体 ,取得了X射线衍射数据 ,进行了结晶和结晶学的初步研究 . 展开更多
关键词 精氨酸激酶 无脊椎动物 氨基酸序列 进化 同源性 底物 结晶学 体内 肌酸激酶 初步研究
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人乳头瘤病毒16型晚期基因L1的原核表达质粒的构建和鉴定 被引量:1
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作者 郭淑元 凌虹 +5 位作者 钟照华 庄敏 林道红 曲章义 郭彩玲 谷鸿喜 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期472-473,共2页
目的 构建人类乳头瘤病毒 (HPV) 16型晚期基因 L1的原核表达质粒 ,以期从中选出能够高效表达 HPV16 L1的重组子 ,为进一步表达 L1蛋白奠定基础。方法 应用定向克隆策略 ,将 HPV16 L1基因分别克隆到原核表达载体 p Trac99A和 p ET- 2 1... 目的 构建人类乳头瘤病毒 (HPV) 16型晚期基因 L1的原核表达质粒 ,以期从中选出能够高效表达 HPV16 L1的重组子 ,为进一步表达 L1蛋白奠定基础。方法 应用定向克隆策略 ,将 HPV16 L1基因分别克隆到原核表达载体 p Trac99A和 p ET- 2 1c中。结果 通过酶切鉴定选出了重组子 p Trc99A- HPV16 L1和 p ET- 2 1c-HPV16 L1。结论  HPV16 展开更多
关键词 人类乳头瘤病毒16 晚期基因L1 基因重组 质粒
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人乳头瘤病毒16型晚期基因L1在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 郭淑元 凌虹 +3 位作者 庄敏 林道红 郭彩玲 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期22-23,54,共3页
人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生关系密切。其晚期蛋白L1是主要结构蛋白,可以刺激机体产生中和抗体,对病毒攻击可以起到保护作用。本研究将HPV16型中国分离株的L1基因定向克隆到原核表达载体pET-21c质粒中... 人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌的发生关系密切。其晚期蛋白L1是主要结构蛋白,可以刺激机体产生中和抗体,对病毒攻击可以起到保护作用。本研究将HPV16型中国分离株的L1基因定向克隆到原核表达载体pET-21c质粒中,建立HPV16 L1在大肠杆菌中的高效表达系统pET21c-HPV16L1,该系统在IPTG的诱导下可表达 60ku的 L1蛋白,表达效率为 23%,此蛋白通过Western-blot得到证实。该表达体系的成功建立可以为进一步研究HPV16 L1蛋白的分子和免疫学特性以及基因疫苗的研制提供实验依据。 展开更多
关键词 人类乳头瘤病毒16型 晚期基因L1 基因表达 大肠杆菌
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原位RT-PCR法定位检测柯萨奇B病毒RNA
7
作者 郭淑元 郭彩玲 +3 位作者 庄敏 谷鸿喜 张凤民 赵德超 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期775-776,共2页
目的 用定位检测细胞或组织中柯萨奇B病RNA的原位RT PCR方法 (直接法 )。方法 对柯萨奇B病毒 ( 1~ 6型 )感染HeLa细胞 ,经核酸酶 (DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行RT PCR和原位RT RCR检测。结果 经... 目的 用定位检测细胞或组织中柯萨奇B病RNA的原位RT PCR方法 (直接法 )。方法 对柯萨奇B病毒 ( 1~ 6型 )感染HeLa细胞 ,经核酸酶 (DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行RT PCR和原位RT RCR检测。结果 经原位RT PCR扩增后 ,病毒感染的HeLa细胞呈蓝黑阳性信号 ;并且这种阳性信号经RNaseA作用而消失 ,却不受DNase作用的影响 ;而非感染的HeLa细胞则不着色 ,其显示的结果与RT PCR的结果一致。结论 原位RT PCR法可特异地检测柯萨奇B病毒感染HeLa细胞中的病毒RNA ,是一种特异和敏感的定位检测方法 ,可应用于研究该病毒的持续性感染及其与克山病等相关疾病的关系。 展开更多
关键词 柯萨奇B病毒 原位RT-PCR HELA细胞
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浓海水或卤水制备氢氧化镁粉体的研究进展 被引量:7
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作者 董泽亮 张雨山 +3 位作者 黄西平 王俐聪 郭淑元 曹冬梅 《化学工业与工程》 CAS 2011年第4期69-73,共5页
我国拥有丰富的浓海水和卤水资源,但利用率较低,造成了严重的资源浪费和环境污染。如何有效开发其中的镁资源是海水卤水化学资源综合利用中的一个重要课题。本文从海水卤水化学资源合理利用的角度出发,综述了直接以制盐苦卤、盐湖卤水... 我国拥有丰富的浓海水和卤水资源,但利用率较低,造成了严重的资源浪费和环境污染。如何有效开发其中的镁资源是海水卤水化学资源综合利用中的一个重要课题。本文从海水卤水化学资源合理利用的角度出发,综述了直接以制盐苦卤、盐湖卤水和浓海水为原料制备氢氧化镁粉体材料的研究状况,并结合当前国内外学者在此领域内的研究热点对氢氧化镁粉体的开发和研究进行了分析。 展开更多
关键词 卤水 氢氧化镁 制备 粉体
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白结构和功能研究进展 被引量:11
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作者 吴洪福 郭淑元 +1 位作者 李海涛 高继国 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期118-122,共5页
对目前解析的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的三维结构进行了比较分析。它们都有类似的结构,有三个结构域,结构域Ⅰ是由7个α螺旋以α5螺旋为中心形成的α螺旋束;结构域Ⅱ是由三个反平行β折叠形成的β棱柱;结构域Ⅲ是一个β"三明治&... 对目前解析的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的三维结构进行了比较分析。它们都有类似的结构,有三个结构域,结构域Ⅰ是由7个α螺旋以α5螺旋为中心形成的α螺旋束;结构域Ⅱ是由三个反平行β折叠形成的β棱柱;结构域Ⅲ是一个β"三明治"结构。对这三个结构域的Loop及氨基酸残基与杀虫活性的关系、与通道形成相关的杀虫作用机制的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 杀虫晶体蛋白 结构域 LOOP
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柯萨奇B3病毒中国分离株VP1基因序列分析 被引量:5
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作者 钟照华 田野 +7 位作者 郭淑元 赵文然 赵铁强 安毅 孟繁超 谷鸿喜 鲁凤民 叶鸿瑁 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期8-10,共3页
目的 分析柯萨奇 B3病毒 (CVB3 )中国分离株编码主要中和抗原的 VP1基因序列。方法 用逆转录 PCR技术扩增 CVB3中国分离株的 VP1基因 ,通过 TA克隆法构建 p CR2 .1-VP1并进行核苷酸序列的测定分析。结果 测序发现 CVB3中国分离株与 C... 目的 分析柯萨奇 B3病毒 (CVB3 )中国分离株编码主要中和抗原的 VP1基因序列。方法 用逆转录 PCR技术扩增 CVB3中国分离株的 VP1基因 ,通过 TA克隆法构建 p CR2 .1-VP1并进行核苷酸序列的测定分析。结果 测序发现 CVB3中国分离株与 CVB3 Nancy株 VP1基因均编码 2 93个氨基酸 ,二者存在 5 9个核苷酸差异 ,其中 10处影响到氨基酸的编码 ,其余均为同义变异。结论  CVB3中国分离株与 Nancy株 VP1基因序列存在一定的差异 。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B 序列测定 VP1基因
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毛细管电泳法表征离子液体与蛋白质的相互作用 被引量:3
11
作者 赵新颖 郭淑元 +2 位作者 陈凡 屈锋 罗爱芹 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1204-1208,共5页
基于毛细管区带电泳考察了不同离子液体的阳离子母核、烷基侧链碳原子数目和阴离子组成对牛血清白蛋白的影响,以及离子液体[C4mim]BF4与肌红蛋白、牛血清白蛋白、血红蛋白、牛凝血酶和转铁蛋白之间的相互作用。利用亲和毛细管电泳法比较... 基于毛细管区带电泳考察了不同离子液体的阳离子母核、烷基侧链碳原子数目和阴离子组成对牛血清白蛋白的影响,以及离子液体[C4mim]BF4与肌红蛋白、牛血清白蛋白、血红蛋白、牛凝血酶和转铁蛋白之间的相互作用。利用亲和毛细管电泳法比较了[C4mim]BF4与上述蛋白之间的相互作用,并计算得到结合常数Kb分别为1.24×107 L/mol,1.23×106 L/mol,5.75×104 L/mol和5.60×104 L/mol。结果表明,转铁蛋白、血红蛋白、肌红蛋白、牛血清白蛋白与离子液体的相互作用依次减弱,存在1~2个数量级的差异。结合毛细管区带电泳和亲和毛细管电泳模式可实现离子液体与多种蛋白质相互作用的定性与定量表征。 展开更多
关键词 离子液体 蛋白质 相互作用 毛细管区带电泳 亲和毛细管电泳
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卤水和高盐废水中SO_4^(2-)脱除技术的研究状况 被引量:5
12
作者 董泽亮 张雨山 +3 位作者 黄西平 王俐聪 曹冬梅 郭淑元 《盐业与化工》 CAS 2012年第2期4-8,共5页
硫酸根是海水制盐、盐湖、井矿等卤水资源和采矿、冶金、制药等行业产生的高盐工业废水中主要的阴离子杂质,它的大量存在会给化工生产和环境安全造成极为不利的影响。因此,卤水和高盐工业废水在利用和排放前需要进行脱除硫酸盐处理。实... 硫酸根是海水制盐、盐湖、井矿等卤水资源和采矿、冶金、制药等行业产生的高盐工业废水中主要的阴离子杂质,它的大量存在会给化工生产和环境安全造成极为不利的影响。因此,卤水和高盐工业废水在利用和排放前需要进行脱除硫酸盐处理。实验从技术原理不同的角度出发,对各种从卤水或高盐工业废水体系中脱除硫酸根的技术和方法进行了整理和分类,对其原理、操作特点、应用领域进行了总结和分析。 展开更多
关键词 卤水 废水处理 脱除 硫酸根
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人乳头瘤病毒16型L1基因重组表达质粒的构建及在E.Coli宿主中的表达与鉴定 被引量:2
13
作者 林道红 凌虹 +3 位作者 庄敏 郭淑元 马培林 谷鸿喜 《中国公共卫生》 CSCD 北大核心 2000年第10期875-876,共2页
构建 pGEX4T 1 HPV16L1重组表达系统 ,为进一步研制基因工程疫苗奠定基础 ,采用PCR方法扩增HPV16中国分离株L1外源基因片段 ,pGEX4T 1为表达载体 ,构建pEGX4T 1 HPV16L1重组表达系统 ,在大肠杆菌宿主BL(2 1)中 ,经IPTG诱导 ,表达融合蛋... 构建 pGEX4T 1 HPV16L1重组表达系统 ,为进一步研制基因工程疫苗奠定基础 ,采用PCR方法扩增HPV16中国分离株L1外源基因片段 ,pGEX4T 1为表达载体 ,构建pEGX4T 1 HPV16L1重组表达系统 ,在大肠杆菌宿主BL(2 1)中 ,经IPTG诱导 ,表达融合蛋白GST L1,经SDS PAGE电泳和Westernblot进行鉴定结果表明 ,成功构建pEGX4T 1 HPV16L1重组表达质粒并获得高效表达并经Westernblot鉴定为L1外源蛋白。提示 :所构建的 pGEX4T 1 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 质粒构建 L1基因表达 鉴定
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原位RT-PCR法检测柯萨奇B病毒RNA的实验研究 被引量:1
14
作者 张凤民 赵德超 +2 位作者 郭淑元 郭彩玲 谷鸿喜 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期166-168,共3页
目的建立定位检测细胞或组织中柯萨奇B病毒RNA的原位RT-PCR方法(直接法)。方法对柯萨奇B病毒(1~6型)感染HeLa细胞,经核酸酶(DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进... 目的建立定位检测细胞或组织中柯萨奇B病毒RNA的原位RT-PCR方法(直接法)。方法对柯萨奇B病毒(1~6型)感染HeLa细胞,经核酸酶(DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行原位RT-PCR检测。结果经扩增后,病毒感染的HeLa细胞呈蓝黑阳性信号;并且这种阳性信号经RNaseA作用而消失,却不受DNase作用的影响;而非感染的HeLa细胞则不着色。结论原位RT-PCR法可特异地检测柯萨奇B病毒感染HeLa细胞中的病毒RNA,是一种特异和敏感的定位检测方法。 展开更多
关键词 柯萨奇B病毒 原位RT-PCR HELA细胞 RNA
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胃腺癌组织中EB病毒EBNA1基因存在情况的检测 被引量:1
15
作者 张凤民 郭淑元 +3 位作者 谷鸿喜 姜晓峰 郭彩玲 黄建林 《世界华人消化杂志》 CAS 1998年第S2期331-332,共2页
关键词 胃肿瘤 爱泼斯坦-巴尔病毒 基因 病毒 DNA
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我国镁资源利用现状及开发前景 被引量:43
16
作者 黄西平 张琦 +1 位作者 郭淑元 王功伟 《海湖盐与化工》 2004年第6期1-6,共6页
文章介绍了我国镁资源及利用现状 ,分析了在镁资源利用方面和国外存在的差距 ,提出了只有通过技术进步、市场开拓 。
关键词 卤水 皮江法 镁合金 功能材料
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我国海水提钾的产业化前景 被引量:8
17
作者 烟伟 黄西平 +2 位作者 张琦 郭淑元 王功伟 《海湖盐与化工》 2004年第4期13-17,共5页
 文章对国内外海水提钾方法及工业化中试作了详细的评述,特别对我国海水提钾的研究现状、工艺流程进行了分析和描述,同时对钾离子富集剂研究现状也进行了评价。并对其工业化前景提出了一些建议。
关键词 海水提钾 富集剂 盐湖
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苏云金芽孢杆菌Cry8Ca2蛋白的纯化与活性的研究
18
作者 吴洪福 张彦彩 +3 位作者 郭淑元 张杰 王容燕 高继国 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期29-32,共4页
cry8 Ca2基因是本实验室自行分离克隆的一种新型苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白基因,其表达130 kDa蛋白对铜绿异丽金龟(Anomala corpulenta)和黄褐异丽金龟(A.exoleta)幼虫具有较高的活性。本研究对Cry8Ca2蛋... cry8 Ca2基因是本实验室自行分离克隆的一种新型苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白基因,其表达130 kDa蛋白对铜绿异丽金龟(Anomala corpulenta)和黄褐异丽金龟(A.exoleta)幼虫具有较高的活性。本研究对Cry8Ca2蛋白原毒素及胰凝乳蛋白酶消化片断的纯化条件及活性进行研究,最适的消化条件为质量比1∶20,37℃,消化1 h。通过阴离子交换层析得到纯的活性毒素蛋白。用原毒素与纯化的毒素对铜绿丽金龟幼虫进行生测,Cry8Ca2原毒素蛋白的LC50为0.47μg/g土,纯化的毒素的LC50为0.08μg/g土,毒素的杀虫活性可以达到原毒素的6倍。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 Cry8Ca2原毒素 Cry8Ca2毒素 纯化 活性
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海水提取亚硫酸钾浓缩工艺研究
19
作者 刘骆峰 郭淑元 +2 位作者 黄西平 蔡荣华 张雨山 《盐业与化工》 CAS 2010年第1期11-13,26,共4页
以亚硫酸钾为蒸煮剂制浆,是目前我国草浆造纸行业最具发展前景的方法。从海水中提取钾离子制备亚硫酸钾的新技术可有效解决其高生产成本问题,但经吸附洗脱工艺得到的富钾液(洗脱液)中亚硫酸钾含量仍偏低,且含有大量杂质。因此,研究在添... 以亚硫酸钾为蒸煮剂制浆,是目前我国草浆造纸行业最具发展前景的方法。从海水中提取钾离子制备亚硫酸钾的新技术可有效解决其高生产成本问题,但经吸附洗脱工艺得到的富钾液(洗脱液)中亚硫酸钾含量仍偏低,且含有大量杂质。因此,研究在添加抗氧化剂条件下,将洗脱液进行蒸发浓缩,低成本制备符合制浆要求的亚硫酸钾蒸煮剂,并通过比较两种不同浓缩方式,探讨亚硫酸钾蒸煮剂的最佳浓缩工艺。 展开更多
关键词 亚硫酸钾 蒸煮剂 海水综合利用 抗氧化剂 蒸发浓缩
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pH响应的层层自组装(LBL)微胶囊和多层薄膜研究 被引量:2
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作者 李峰 龚骞 +2 位作者 严月 冯冬梅 郭淑元 《化工新型材料》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期83-85,共3页
首先简述了一种新颖的制备微胶囊和薄膜的方法-层层自组装法(LbL),LbL法制备微胶囊和薄膜的显著优越性在于能够在纳米尺度上对微胶囊和薄膜的组成、结构、形态和厚度进行精确的控制。然后,详细介绍了pH响应的微胶囊和薄膜的制备、对某... 首先简述了一种新颖的制备微胶囊和薄膜的方法-层层自组装法(LbL),LbL法制备微胶囊和薄膜的显著优越性在于能够在纳米尺度上对微胶囊和薄膜的组成、结构、形态和厚度进行精确的控制。然后,详细介绍了pH响应的微胶囊和薄膜的制备、对某些物质的包埋以及释放。pH值的改变会引起薄膜和微胶囊通透性的变化,甚至导致薄膜与微胶囊的分解,从而释放内部比如蛋白、多肽等物质。最后,对微胶囊和薄膜的应用前景做了简单的展望。 展开更多
关键词 层层自组装 聚电解质多层膜 微胶囊 PH响应
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