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新型PCV2衣壳融合蛋白在HEK293F细胞瞬时表达研究
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作者 罗清平 彭妍 +2 位作者 ALI Mohsin 庄英萍 郭美锦 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期62-70,共9页
猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)衣壳(Capsid)蛋白是制备抗猪圆环2型病毒亚单位疫苗的有效免疫抗原,能在大肠杆菌及杆状病毒/昆虫细胞表达系统中获得表达,然而在哺乳细胞中的表达研究仍然缺乏。瞬时表达条件考察结果显示... 猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)衣壳(Capsid)蛋白是制备抗猪圆环2型病毒亚单位疫苗的有效免疫抗原,能在大肠杆菌及杆状病毒/昆虫细胞表达系统中获得表达,然而在哺乳细胞中的表达研究仍然缺乏。瞬时表达条件考察结果显示,采用宿主HEK293F细胞及PEI-40kDa转染试剂能获得35%病毒PCV2 Capsid基因细胞转染效率。转染试剂PEI(Polyethylenimine)与DNA比例差异会影响复合物形成大小及形态,复合物形成15~80 nm颗粒有利于转染效率的提高。实验以免疫逃逸型猪圆环病毒2b型NDSU41513病毒株,设计了新型PCV2 Capsid (△1-41aa)-Fc(pig) protein(PCFP)分子。在3 L反应器中成功实现了HEK293F细胞瞬时表达PCFP,表达水平达到3.8 mg/L。PCFP蛋白能够自主装形成约为41 nm类病毒颗粒,诱导小鼠机体内产生强烈的体液免疫反应,具有很高的应用潜力。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 瞬时表达 HEK293F 类病毒颗粒 疫苗
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三七悬浮细胞生物合成绿原酸类物质及其生物活性 被引量:1
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作者 周倍 刘楠 +3 位作者 刘泽波 庄英萍 王泽建 郭美锦 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期515-528,共14页
利用三七(Panax notoginseng)悬浮细胞生物合成绿原酸类物质(CGAs),并对其生物活性进行了研究。对三七细胞中CGAs进行定性分析,优化了细胞培养条件以及6种诱导模式,测定了三七细胞CGAs的抗氧化及α-葡萄糖苷酶活性抑制能力。结果表明三... 利用三七(Panax notoginseng)悬浮细胞生物合成绿原酸类物质(CGAs),并对其生物活性进行了研究。对三七细胞中CGAs进行定性分析,优化了细胞培养条件以及6种诱导模式,测定了三七细胞CGAs的抗氧化及α-葡萄糖苷酶活性抑制能力。结果表明三七愈伤组织内含有4种CGAs;最优工艺条件为:B5+40 g/L蔗糖,pH 7.5,15%接种量;经30μmol/L茉莉酸甲酯诱导3 d后,CGAs产量(684.07 mg/L)比原工艺(475.18 mg/L)提高了0.44倍;三七细胞CGAs具有良好的抗氧化及α-葡萄糖苷酶活性抑制能力。 展开更多
关键词 三七愈伤组织细胞 悬浮培养 绿原酸生物合成 工艺优化 生物活性
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重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达rHSA 被引量:14
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作者 郭美锦 庄英萍 +2 位作者 储炬 张嗣良 刘志敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期62-68,共7页
对基因工程菌Pichiapastoris的摇瓶发酵条件进行了试验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在摇瓶发酵时 ,甲醇诱导基因工程菌P .pastoris表达重组人血清白蛋白的发酵周期为 96h ;甲醇的最佳诱导浓度为 1 0g L ;发酵p... 对基因工程菌Pichiapastoris的摇瓶发酵条件进行了试验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在摇瓶发酵时 ,甲醇诱导基因工程菌P .pastoris表达重组人血清白蛋白的发酵周期为 96h ;甲醇的最佳诱导浓度为 1 0g L ;发酵pH范围为 5 72~ 6 5 9;在摇瓶培养时 ,随着接种量的增加 ,虽然目的蛋白表达量缓慢增加 ,但单位细胞光密度的蛋白产率却明显下降 ,符合y =1 2 941x- 0 50 59方程 (线性相关系数r=0 9789) ,其限制性因子很可能为溶氧。在分批发酵 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 (OD60 0 )为 2 0左右时 ,细胞生长的延迟期为 2 1 1h左右 ,细胞生长光密度与培养时间的关系模型为 :y =0 7841e0 .2 3 19t(线性相关系数r=0 .993 6 ) ;在补料发酵时细胞干重浓度可达到 1 1 5g L— 1 6 0g L ,在 1 2 0h重组人血清白蛋白表达量最大达到 3 6g L。 展开更多
关键词 重组巴斯德毕赤酵母 高密度发酵 重组人血清白蛋白 rHSA 表达
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重组毕赤酵母甲醇利用表型与基因拷贝数对外源基因表达的影响 被引量:21
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作者 郭美锦 朱泰承 +3 位作者 张明 储炬 庄英萍 张嗣良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期7-11,共5页
毕赤酵母是目前最优秀的外源蛋白表达系统之一。着重对重组毕赤酵母甲醇利用表型(Mut+型、MutS型和Mut-型)、基因剂量对外源蛋白高效表达的影响机理进行综述。MutS型的比生长速率和蛋白产率比Mut+型低、发酵周期长、副产物(如乙醇、乙酸... 毕赤酵母是目前最优秀的外源蛋白表达系统之一。着重对重组毕赤酵母甲醇利用表型(Mut+型、MutS型和Mut-型)、基因剂量对外源蛋白高效表达的影响机理进行综述。MutS型的比生长速率和蛋白产率比Mut+型低、发酵周期长、副产物(如乙醇、乙酸等)形成速率不同。外源基因拷贝数对外源蛋白的影响主要有三种情况:(1)高基因拷贝数对外源蛋白表达水平有明显的正效应作用;(2)基因拷贝数增加反而降低了表达水平,即负效应作用;(3)重组蛋白表达与基因剂量正相关,之后则表现负相关关系,这可能与外源蛋白翻译后加工有关(如二硫键形成、折叠等),而与分子伴侣共表达可促进外源蛋白的高表达。 展开更多
关键词 重组毕赤酵母 表型 基因剂量 外源蛋白表达
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基因工程菌Pichia pastoris高密度培养条件研究 被引量:20
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作者 郭美锦 吴康华 +3 位作者 杭海峰 储炬 庄英萍 张嗣良 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期6-11,共6页
基因工程菌pichiapastoris最佳种子培养基为添加 4mL/LPTMl的BMGY培养基 ;全合成高密度摇瓶培养基是甘油 4% ,(NH4) 2 SO41 0g/L ,CaSO40 93g/L ,K2 SO41 8 2g/L ,MgSO4·7H2 O 1 4 9g/L ,0 1mol/L磷酸缓冲液 (pH =6 0 )配制 ,培养... 基因工程菌pichiapastoris最佳种子培养基为添加 4mL/LPTMl的BMGY培养基 ;全合成高密度摇瓶培养基是甘油 4% ,(NH4) 2 SO41 0g/L ,CaSO40 93g/L ,K2 SO41 8 2g/L ,MgSO4·7H2 O 1 4 9g/L ,0 1mol/L磷酸缓冲液 (pH =6 0 )配制 ,培养 2 6h后细胞密度OD60 0 可达到 65。经SDS PAGE电泳图谱分析 ,甲醇诱导培养 72h结果 :1 2h有重组人血清白蛋白表达 ,2 4h达到最大。此全合成摇瓶培养基与批补料发酵培养基相类似 ,有利于指导发酵罐上发酵培养。 展开更多
关键词 基因工程菌 毕赤酵母 高密度培养
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重组巴氏毕赤酵母恒化培养动力学及代谢迁移特性研究 被引量:8
6
作者 郭美锦 吴康华 +2 位作者 庄英萍 储炬 张嗣良 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期617-624,共8页
通过对甲醇营养型毕赤酵母基因工程菌以碳源甘油为限制性基质进行恒化培养动力学试验 ,结果认为 :(1 )细胞光密度与其干、湿重呈线性关系 ,当细胞光密度 (OD60 0 )为 1 0 0时细胞湿重 (WCW)为 1 2 8 3g L ,细胞干重 (WDW)则为 2 2 9g L... 通过对甲醇营养型毕赤酵母基因工程菌以碳源甘油为限制性基质进行恒化培养动力学试验 ,结果认为 :(1 )细胞光密度与其干、湿重呈线性关系 ,当细胞光密度 (OD60 0 )为 1 0 0时细胞湿重 (WCW)为 1 2 8 3g L ,细胞干重 (WDW)则为 2 2 9g L ;(2 )基因工程菌P .pastoris的生长与限制性基质甘油残留浓度的关系符合Monod关系式 ,通过 1 μ对 1 S进行线性回归得 μmax=0 .366h- 1,Ks=0 .1 82 3g L ,经参数推导甘油最大菌体得率系数YG =0 .54g g ,菌体维持生长消耗底物系数m =0 .0 0 69g (g·h) ;氧最大菌体系数YX O2 =30 .96g moL ,菌体维持生长时消耗氧系数mO2 =0 .0 0 0 8mol (g·h) ,最适理论稀释速率Dm =0 .341h- 1;(3)从氨水的消耗速率和呼吸商 (RQ)的变化认为随着比生长速率 (μ)的增大 ,甘油代谢流从糖原异生和磷酸戊糖途径线性地向糖酵解和三羧酸循环途径进行代谢迁移 。 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恒化培养 代谢迁移 动力学 重组人血清白蛋白
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基于氧碳平衡的重组巴氏毕赤酵母碳源代谢分析 被引量:7
7
作者 郭美锦 储炬 +2 位作者 庄英萍 杭海峰 张嗣良 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1724-1728,共5页
基于氧元素和碳元素平衡对重组巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)的不同碳源代谢进行了分析 .结果表明 :以甘油为惟一碳源 ,当比生长速率由 0 0 6 4h-1增大到 0 2 5 7h-1时 ,用于细胞生长的甘油代谢比速率由1 36mmol·g-1·h-1... 基于氧元素和碳元素平衡对重组巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)的不同碳源代谢进行了分析 .结果表明 :以甘油为惟一碳源 ,当比生长速率由 0 0 6 4h-1增大到 0 2 5 7h-1时 ,用于细胞生长的甘油代谢比速率由1 36mmol·g-1·h-1增大到 5 4 6mmol·g-1·h-1,而用于细胞维持代谢流比例降低了 10 4 % ,同时甘油用于合成代谢和分解代谢的比速率均增大 ,但是分解代谢流比例逐渐下降 ,而合成代谢流比例却升高了 5 9% ;以甲醇为碳源进行表达重组人血清白蛋白恒化培养时 ,当比生长速率由 0 0 19h-1增大至 0 0 4 6h-1时 ,用于产物重组人血清白蛋白形成的比速率呈先增大后减少的趋势 ,在比生长速率为 0 0 2 7h-1时最大 ,为 0 31mmol·g-1·h-1,占甲醇总代谢流的 13 2 % . 展开更多
关键词 氧碳元素平衡 重组巴氏毕赤酵母 代谢流分析 恒化培养 重组人血清白蛋白
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重组毕赤酵母表达工程植酸酶发酵过渡相参数相关分析 被引量:5
8
作者 郭美锦 储炬 +2 位作者 庄英萍 杭海峰 张嗣良 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期932-936,共5页
微生物发酵是一个涉及不同尺度的互相关联的复杂生物系统的过程 ,将重组毕赤酵母表达工程植酸酶过渡相的在线和离线参数进行了相关分析研究。通过对发酵过程的在线细胞代谢生理参数 (OUR)和环境参数 (DO)的变化进行相关分析表明 :甘油... 微生物发酵是一个涉及不同尺度的互相关联的复杂生物系统的过程 ,将重组毕赤酵母表达工程植酸酶过渡相的在线和离线参数进行了相关分析研究。通过对发酵过程的在线细胞代谢生理参数 (OUR)和环境参数 (DO)的变化进行相关分析表明 :甘油和葡萄糖碳源对AOX合成的阻遏强度不同 ,葡萄糖的阻遏性明显强于甘油 ,相对于醇氧化酶启动子 ,葡萄糖为强阻遏性底物。根据甲醇代谢途径关键酶酶活性变化 ,推测出各代谢途径流量分布的变化 ,即甲醇诱导后糖酵解途径和三羧酸循环途径代谢流比例下降 ,而磷酸戊糖途径中代谢流通量上升 ,甲醇完全氧化代谢流成为主要代谢流 ,与过渡相在线参数pH、OUR(CER)和RQ等相关分析的甲醇代谢途径的变化结果一致。此外 ,建立了生产过程在线控制与分析的标准 :当OUR和CER逐渐增大 ,则可判断甲醇已被利用和启动子已被甲醇成功诱导 。 展开更多
关键词 重组毕赤酵母 工程植酸酶 过渡相 在线参数 酶活分析 相关分析
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毕赤氏酵母工程菌高密度发酵表达恶性疟原虫融合抗原的研究 被引量:5
9
作者 郭美锦 吴康华 +5 位作者 储炬 庄英萍 张嗣良 黄大庆 张青锋 潘卫庆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期456-459,共4页
The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in geneti... The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in genetically engineered methylotrophic Pichia pastoris were investigated by shake flask experiments in this paper.The results showed:(1)fermentation period with methanol inducement is about 96 hours;(2)the optimum methanol concentration as sole carbon source is 10g/L;(3)the range of pH is from 6.0 to 7.0. On the base of above experimental results the cell high-density fermentation had been done on the FMG-5L fermentor with multi-sensors.The results showed that the cell optical density (OD 600) can reached 550 and the ma-ximum expression level of target proteins was 780mg/L which was 4 times higher or more than the shake flask culture’s. 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恶性疟原虫融合抗原 发酵条件 优化 高密度发酵 表达
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基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵表达重组人血清白蛋白 被引量:4
10
作者 郭美锦 庄英萍 +2 位作者 吴康华 储炬 张嗣良 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期101-103,116,共4页
在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生... 在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生长光密度与培养时间的关系模型为 :y=0 .7841 e0 .2 319t(线性相关系数 r=0 .9936) ;在补料发酵时细胞浓度可达 1 1 5 g/L~ 1 60 g/L (干重 ) ,在 1 2 0 h重组人血清白蛋白表达量达 3. 展开更多
关键词 重组巴氏毕赤酵母 高密度发酵 重组人血清蛋白 基因表达 分批发酵 补料发酵
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重组人血清白蛋白表达研究进展 被引量:9
11
作者 郭美锦 储炬 +3 位作者 杭海峰 庄英萍 叶勤 张嗣良 《生物工程进展》 CSCD 2000年第5期39-42,共4页
本文综述了重组人血清白蛋白在细菌 ,酵母 ,植物和动物等表达系统中表达的研究进展。用酵母表达系统 ,尤其是毕赤酵母 ,表达的重组白蛋白产量高且提取工艺简单 ,是其产业化最具有前途的表达系统。同时在转基因动物、植物中培养表达也具... 本文综述了重组人血清白蛋白在细菌 ,酵母 ,植物和动物等表达系统中表达的研究进展。用酵母表达系统 ,尤其是毕赤酵母 ,表达的重组白蛋白产量高且提取工艺简单 ,是其产业化最具有前途的表达系统。同时在转基因动物、植物中培养表达也具有诱人的前景。 展开更多
关键词 人血清 白蛋白 表达系统 基因工程 基因重组
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龟裂链霉菌原生质体诱变与筛选研究 被引量:3
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作者 郭美锦 涂国全 曹秀香 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期260-262,共3页
采用定向推理筛选方法对龟裂链霉菌原生质体进行诱变筛选得到 346 #菌株 ,其复筛时比对照产量高 7% ,而在 6 0吨大罐上连续发酵 9批 ,发酵指数比对照高了 13%。
关键词 龟裂链霉菌 原生质体 定向推理诱变 土霉素
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龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)原生质体制备与再生条件研究 被引量:1
13
作者 郭美锦 金建国 涂国全 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第3期355-358,共4页
报道了龟裂链霉菌( Streptom yces rimosus) 原生质体制备与再生最佳条件和该原生质体对抗生素的抗性结果。在 S生长培养基中加入φ= 1 % 甘氨酸进行菌丝体培养24 h ,原生质体制备最佳条件为:溶菌酶浓... 报道了龟裂链霉菌( Streptom yces rimosus) 原生质体制备与再生最佳条件和该原生质体对抗生素的抗性结果。在 S生长培养基中加入φ= 1 % 甘氨酸进行菌丝体培养24 h ,原生质体制备最佳条件为:溶菌酶浓度φ= 3 % 、酶解温度28 ℃、酶解时间90 min ,其制备的原生质体数达到6 .0 亿个/ m L 以上;原生质体最佳再生培养基为 R5 再生培养,其再生率达到46 % 。 展开更多
关键词 龟裂链霉菌 原生质体制备 原生质体再生
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生物过程关键技术及装备开发进展
14
作者 郭美锦 庄英萍 《生物产业技术》 2014年第6期7-13,共7页
生物过程是一个复杂的动态非线性系统,是生物制造必不可少的环节。文章对我国近五年来生物过程关键技术与装备的研发进展进行了综述,主要包括生物过程优化技术与装置、流场特性与生理特性相结合的生物过程放大技术与测定装置、生物过... 生物过程是一个复杂的动态非线性系统,是生物制造必不可少的环节。文章对我国近五年来生物过程关键技术与装备的研发进展进行了综述,主要包括生物过程优化技术与装置、流场特性与生理特性相结合的生物过程放大技术与测定装置、生物过程关键参数在线检测技术与装置等,并结合相关产业化案例进行了分析。 展开更多
关键词 生物过程 优化技术 装备 开发 测定装置 在线检测技术 非线性系统 生物制造
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链霉素抗性突变理性筛选avermectin高产菌株 被引量:21
15
作者 陶纯长 谌颉 +4 位作者 郭美锦 郭元昕 储炬 庄英萍 张嗣良 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期521-523,528,共4页
为提高菌株avermectin的产量 ,本文以链霉素抗性为选择压力 ,对除虫链霉菌Streptomycesavermi tilis进行紫外诱变 (2 53 7nm ,30w ,照射时间 45s) ,得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高 2 5 %以上的 4株突变株 ,其中 2株提高水平达 3... 为提高菌株avermectin的产量 ,本文以链霉素抗性为选择压力 ,对除虫链霉菌Streptomycesavermi tilis进行紫外诱变 (2 53 7nm ,30w ,照射时间 45s) ,得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高 2 5 %以上的 4株突变株 ,其中 2株提高水平达 30 %以上。实验表明了链霉素抗性突变与产抗生素突变之间的密切联系。同时 。 展开更多
关键词 AVERMECTIN 除虫链霉菌 链霉素抗性 理性筛选
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链霉菌分解角蛋白的生化机制研究 Ⅲ含硫化合物对角蛋白酶作用机理和角蛋白降解的生化机制初步研究 被引量:12
16
作者 涂国全 张宝 +2 位作者 叶亚建 郭美锦 孙宇晖 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 1998年第1期6-11,共6页
硫酸钠、亚硫酸钠和巯基乙醇对角蛋白酶具有强烈的激活作用,使角蛋白酶活力分别依次提高了4,7和20多倍,其主要表现作用于角蛋白酶中的二硫键还原酶。亚硫酸钠在0.01mol/L浓度下不仅作用于二硫键还原酶,而且还作用于多... 硫酸钠、亚硫酸钠和巯基乙醇对角蛋白酶具有强烈的激活作用,使角蛋白酶活力分别依次提高了4,7和20多倍,其主要表现作用于角蛋白酶中的二硫键还原酶。亚硫酸钠在0.01mol/L浓度下不仅作用于二硫键还原酶,而且还作用于多肽水解酶。硫代硫酸钠对二硫键还原酶有强烈的抑制作用。角蛋白酶降解羽毛角蛋白首先是角蛋白酶中的二硫键还原酶使角蛋白中二硫键裂解产生变性角蛋白,然后在多肽水解酶的共同作用下,将变性角蛋白逐渐分解成多肽、寡肽和游离氨基酸,使角蛋白彻底分解。角蛋白酶中的二硫键还原酶是降解角蛋白的关键酶。 展开更多
关键词 弗氏链霉菌 含硫化合物 角蛋白酶 链霉菌 分解
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链霉菌分解角蛋白的生化机制研究 被引量:19
17
作者 涂国全 孙宇晖 +2 位作者 郭美锦 叶亚建 张宝 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 1998年第2期164-169,共6页
对弗氏链霉菌S-221变种分解角蛋白的生化机制进行了初步研究。该菌在角蛋白底物作用下诱导产生胞外角蛋白酶。它是一种复合蛋白酶,含有二硫键还原酶和多肽水解酶等多种酶活性组分,其中,二硫键还原酶是分解角蛋白的关键酶,二硫... 对弗氏链霉菌S-221变种分解角蛋白的生化机制进行了初步研究。该菌在角蛋白底物作用下诱导产生胞外角蛋白酶。它是一种复合蛋白酶,含有二硫键还原酶和多肽水解酶等多种酶活性组分,其中,二硫键还原酶是分解角蛋白的关键酶,二硫键还原酶首先作用于角蛋白中的二硫键,使角蛋白高级结构解体形成变性角蛋白,然后变性角蛋白在多肽水解酶的共同作用下逐步水解成多肽,寡肽和游离氨基酸,使角蛋白彻底分解。在角蛋白分解过程中,角蛋白中的硫也随之转化成巯基化合物,H2S和硫酸盐3种含硫化合物存在于分解产物中。 展开更多
关键词 弗氏链霉菌 角蛋白酶 生化机制
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中心组合设计优化梅岭霉素发酵培养基 被引量:11
18
作者 陈斌 庄英萍 +2 位作者 郭美锦 储炬 张嗣良 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第12期29-33,共5页
应用中心组合设计对梅岭霉素发酵培养基进行优化。通过部分因子实验对发酵培养基进行评估 ,确认玉米粉、淀粉和酵母粉是影响梅岭霉素发酵水平的关键因子 ,通过快速登高法搜索关键组分的适宜浓度范围。在此基础上 ,采用中心组合设计方法 ... 应用中心组合设计对梅岭霉素发酵培养基进行优化。通过部分因子实验对发酵培养基进行评估 ,确认玉米粉、淀粉和酵母粉是影响梅岭霉素发酵水平的关键因子 ,通过快速登高法搜索关键组分的适宜浓度范围。在此基础上 ,采用中心组合设计方法 ,基关键因子的数学模型 ,确定关键组分的最佳浓度与优化后的培养基并进行实验验证。经上述优化过程 ,梅岭霉素发酵单位从 5 1 3μg/ml提高至 2 31 8μg/ml。 展开更多
关键词 梅岭霉素 中心组合设计 优化 抗生素 发酵 培养基
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基因工程菌Pichia pastoris连续培养的生长及抑制动力学 被引量:7
19
作者 吴康华 郭美锦 +2 位作者 庄英萍 储炬 张嗣良 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期605-609,共5页
在同一稀释率μ(μ=0 .1 4h-1)下用不同浓度的甘油流加进行连续培养 ,研究甘油浓度对基因工程菌毕赤酵母 ( Pichia pastori)生长的影响。结果表明甘油浓度对细胞生物量 ( DCW和WCW)、底物得率系数 ( YX/ S)、底物比消耗速率 ( qs)、呼吸... 在同一稀释率μ(μ=0 .1 4h-1)下用不同浓度的甘油流加进行连续培养 ,研究甘油浓度对基因工程菌毕赤酵母 ( Pichia pastori)生长的影响。结果表明甘油浓度对细胞生物量 ( DCW和WCW)、底物得率系数 ( YX/ S)、底物比消耗速率 ( qs)、呼吸熵 ( RQ)与二氧化碳释放率 ( CER)都有影响 ,在低甘油残留浓度 ( <63.3g/L)下 ,甘油是激活剂 ,菌体生长符合 Monod方程 ,Ks=1 9.62 g/L,甘油激活常数 Ka=1 9.45 g/L;而在高甘油残留浓度 ( >63.3g/L )下甘油是抑制剂 ,菌体生长特征符合 Haldance方程 ,Ks=0 .0 1 4g/L,KI=1 5 6.67g/L。毕赤酵母生长的甘油抑制浓度为 5 5 .42 展开更多
关键词 基因工程菌 毕赤酵母 连续培养 生长动力学 重组人血清白蛋白 抑制动力学 甘油浓度
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pH值对绿色木霉(Trichoderma viride)产纤维素酶的影响 被引量:17
20
作者 耿冰 郭美锦 +3 位作者 张嗣良 王永红 储炬 庄英萍 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期1-6,共6页
采用微晶纤维素为唯一诱导性碳源,对绿色木霉(Trichoderma viride)在摇瓶发酵过程中控制与不控制pH产纤维素酶进行比较。控制pH时胞外蛋白浓度为0.72 mg/mL比不控制pH时提高43%;FPA、EG、CB和CBH酶活为15.0U/mL,120.0U/mL,1.75U/mL,0.85... 采用微晶纤维素为唯一诱导性碳源,对绿色木霉(Trichoderma viride)在摇瓶发酵过程中控制与不控制pH产纤维素酶进行比较。控制pH时胞外蛋白浓度为0.72 mg/mL比不控制pH时提高43%;FPA、EG、CB和CBH酶活为15.0U/mL,120.0U/mL,1.75U/mL,0.85U/mL分别是不控制pH时的2.1、2.3、11.7和1.7倍。在不同pH下测定纤维素酶液各酶活,表明pH值显著影响纤维素酶各单酶酶活。在pH2.7时,β-葡萄糖苷酶酶活仅为pH4.8时酶活的4%;pH回调试验结果表明β-葡萄糖苷酶对pH敏感,并在催化功能上发生不可逆变化。对纤维素酶液添加分离得到的各单酶,当添加β-葡萄糖苷酶时最多可以提高FPA酶活20%。因此β-葡萄糖苷酶是影响综合酶活的关键酶。通过拉曼光谱检测出β-葡萄糖苷酶在pH5.0有活性状态下,酶蛋白主链结构主要为α-螺旋和无规则卷曲;在pH2.0没有活性状态下,酶蛋白主链结构的无规则卷曲发生较大变化,α-螺旋也受到一定影响。这说明pH对β-葡萄糖苷酶构象的改变是造成其活性变化的主要原因。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 拉曼光谱 PH控制 纤维素酶
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