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某医院ICU老年患者VAP病原菌检测及药敏结果分析
1
作者 郭庆利 王斌 钱冬萌 《航空航天医学杂志》 2024年第1期15-18,共4页
目的 探究重症监护室(ICU)患者呼吸机相关性肺炎(VAP)病原菌的分布情况以及相关药敏试验情况,为后续为患者制定有效且针对性控制措施提供依据。方法 选择本医院2020年04月-2023年04月ICU呼吸机相关性肺炎患者51例作为研究对象,对其痰液... 目的 探究重症监护室(ICU)患者呼吸机相关性肺炎(VAP)病原菌的分布情况以及相关药敏试验情况,为后续为患者制定有效且针对性控制措施提供依据。方法 选择本医院2020年04月-2023年04月ICU呼吸机相关性肺炎患者51例作为研究对象,对其痰液标本展开病原菌检测以及相关药敏检测,并对其病原菌的分布情况以及相关药敏结果进行统计分析。结果 在51例重症监护室VAP患者中共分离出78株病原菌,其中,革兰阴性菌有59株(75.64%),居前5位的依次为鲍曼不动杆菌,肺炎克雷伯菌,铜绿假单胞,大肠埃希菌,阴沟肠杆菌;革兰阳性菌有5株(6.41%),占比最高的是金黄色葡萄球菌有4株(80.00%);以及真菌共有14株(17.95%)。对于肺炎克雷伯菌而言,常用的抗生素可选择哌拉西林/他唑巴坦复方制剂、头孢唑林、头孢他啶;鲍氏不动杆菌对多数抗生素均有较高的耐药性,其中排首位的为美罗培南(84.21%)、其次为左氧氟沙星、环丙沙星、氨苄西林/舒巴坦、头孢吡肟和头孢他啶,均占73.68%;铜绿假单胞菌对亚胺培南、美罗培南耐药性相较而言较高;大肠埃希菌对大部分抗生素均有较好的耐药性,如头孢类药物,其耐药性可高达100%,金黄色葡萄球菌对青霉素、克林霉素具有一定的耐药性。结论 在重症监护室呼吸机相关性肺炎病原菌中占比最高的为革兰阴性菌鲍曼不动杆菌,其对多数药物均有较高的耐药性,各个病原菌对抗生素的耐药性不同,临床应当根据病原菌检测的药敏结果为患者选择合适的抗生素予以治疗,以保证患者病情稳定,促进其恢复。 展开更多
关键词 重症监护室 呼吸机相关性肺炎 病原菌检测 药敏结果
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烟曲霉蛋白激酶A催化亚基对孢子萌发和抗氧化损伤的调节作用 被引量：3
2
作者 周秀芝 赵巍 +5 位作者 王斌 喻娜娜 闫志勇 钱冬萌 宋旭霞 丁守怡 《医学研究生学报》 CAS 2010年第10期1025-1028,共4页
目的烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种重要的条件致病性真菌,在免疫受损宿主体内引起侵袭性曲霉病。cAMP-PKA信号通路调控真菌的生长、发育等重要过程。文中检测了烟曲霉野生株（WT株）及蛋白激酶A（protein kinase a,PKA）催化... 目的烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种重要的条件致病性真菌,在免疫受损宿主体内引起侵袭性曲霉病。cAMP-PKA信号通路调控真菌的生长、发育等重要过程。文中检测了烟曲霉野生株（WT株）及蛋白激酶A（protein kinase a,PKA）催化亚基基因突变株（ΔpkaC1株）的孢子萌发曲线、菌株生长、对H2O2的敏感性,分析pkaC1在烟曲霉孢子萌发、抗氧化损伤中的作用。方法WT株和ΔpkaC1株孢子接种于曲霉菌基础培养液（Aspergillusminimal medium,AMM）,观察孢子萌发曲线和菌株径向生长曲线。孢子与不同浓度H2O2作用后涂于AMM上培养,计数残存菌落个数。结果WT株和ΔpkaC1株孢子均于培养4.5 h后开始出现第1个萌发管,ΔpkaC1株孢子萌发1个或1个以上萌发管的萌发动力学降低;ΔpkaC1出现第2个萌发管的时间相对于WT株推迟约1 h,于培养13 h时,WT株100%萌发2个或2个以上萌发管,此时ΔpkaC1株萌发2个或2个以上萌发管的萌发率约为42%。ΔpkaC1株生长缓慢,同时期菌落直径仅为WT株的1/3~1/2。低浓度的H2O2（0.005%~0.050%）处理后,WT株与ΔpkaC1株孢子的存活率差异有显著统计学意义（P〈0.01）;对高浓度H2O2（0.100%~0.500%）,存活率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论cAMP-PKA信号通路中PKA催化亚基在烟曲霉孢子萌发和抗氧化损伤中起着调节作用。 展开更多
关键词 烟曲霉 蛋白激酶A催化亚基 过氧化氢 氧化损伤
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靶向抑制Myc对小鼠LLC全细胞疫苗免疫原性的影响
3
作者 张学明 王惠 +1 位作者 钱冬萌 王斌 《精准医学杂志》 2023年第4期294-299,共6页
目的制备小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)全细胞疫苗,并探讨该疫苗在提高C57BL/6N小鼠免疫系统对抗LLC方面的作用。方法利用TCGA数据库分析MYC扩增背景下人类肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)组织内免疫细胞浸润丰度的变化特... 目的制备小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)全细胞疫苗,并探讨该疫苗在提高C57BL/6N小鼠免疫系统对抗LLC方面的作用。方法利用TCGA数据库分析MYC扩增背景下人类肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)组织内免疫细胞浸润丰度的变化特点,探讨确定制备LLC全细胞疫苗时紫外线照射的最佳时长。利用小鼠模型,评估靶向抑制Myc的LLC全细胞疫苗在抵抗LLC方面的效果。结果在人LUAD组织样本中,相较于N-MYC低表达组,N-MYC高表达组的激活CD4^(+)记忆T细胞与激活NK细胞浸润丰度显著降低(W=28233、27990,P<0.05),Tregs细胞浸润丰度显著升高(W=36074,P<0.05)。抑制剂处理过的小鼠LLC细胞在经过15 min的紫外线照射后完全失去活性,并且LLC细胞内的c-Myc、N-Myc和PD-L1表达量显著降低(t=6.26~13.51,P<0.05)。在小鼠模型实验中,与Irra组相比,Irra处理组中的小鼠表现出肿瘤生长速度减缓和生存期延长的现象。此外,Irra处理组小鼠的脾脏和肿瘤内CD3^(+)CD8^(+)/CD3^(+)T细胞比值以及血清中的细胞因子TNF-α和IFN-γ表达水平也显著增加(F=54.83~381.10,P<0.05)。结论本研究成功制备了LLC全细胞疫苗。在小鼠实验中,接种靶向抑制Myc的LLC全细胞疫苗能够提高免疫系统对LLC的攻击能力,抑制肿瘤细胞的生长速度,延长小鼠生存期。 展开更多
关键词 肺肿瘤 肿瘤微环境 基因 MYC 基因扩增 免疫原性 疫苗 数据库 计算生物学
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26肽蜂毒素与基因变构IL-2嵌合蛋白的原核表达、纯化及活性测定 被引量：4
4
作者 钱冬萌 侯伟 +3 位作者 闫志勇 赵百慧 付强 王斌 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第10期56-58,共3页
在E .coliDH5α中表达 2 6肽蜂毒素与基因变构人白细胞介素 2的嵌合体蛋白 ,并进行初步纯化和抗原性检测。利用剪接式重叠延伸 (splicedoverlapextension ,SOE)技术在 2 6肽蜂毒素与基因变构IL 2的基因之间导入四个易形成空间结构的氨... 在E .coliDH5α中表达 2 6肽蜂毒素与基因变构人白细胞介素 2的嵌合体蛋白 ,并进行初步纯化和抗原性检测。利用剪接式重叠延伸 (splicedoverlapextension ,SOE)技术在 2 6肽蜂毒素与基因变构IL 2的基因之间导入四个易形成空间结构的氨基酸残基组成的连接肽 (Gly4Ser) 3 ,构建嵌合体蛋白的基因 ,克隆到原核表达载体pGEX4T 2中 ,重组质粒转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达目的融合蛋白 ,纯化蛋白经Thrombin酶切后进行SDS PAGE与Western blot鉴定。 展开更多
关键词 蜂毒素 蛋白 基因 IL-2 抗原性 DH 嵌合体 纯化 IPTG 剪接
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风疹病毒E1膜抗原的原核表达与纯化鉴定 被引量：8
5
作者 钱冬萌 卢宁 +1 位作者 闫志勇 王斌 《青岛大学医学院学报》 CAS 2003年第1期31-34,共4页
①目的　重组表达风疹病毒 (RV)E1膜蛋白的抗原决定簇多肽 ,探索制备用于RV血清学检测的基因工程抗原。②方法　通过反转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增RVE1膜蛋白 2 12～ 2 4 1位氨基酸的编码基因片段nt8886～ 8976 ,将此片段重组于质粒... ①目的　重组表达风疹病毒 (RV)E1膜蛋白的抗原决定簇多肽 ,探索制备用于RV血清学检测的基因工程抗原。②方法　通过反转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增RVE1膜蛋白 2 12～ 2 4 1位氨基酸的编码基因片段nt8886～ 8976 ,将此片段重组于质粒载体 pGEX4T 2上 ,在大肠杆菌中表达目的多肽片段与谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)的融合蛋白 ,纯化融合蛋白并经Western Blot鉴定其抗原性。③结果　有效地表达出相对分子质量约为330 0 0的融合蛋白 ,经Western Blot检测结果证实可与RV的单克隆抗体发生特异性结合反应。④结论　在原核表达系统中有效地表达了保留风疹病毒抗原性的融合蛋白 ,为今后进一步研制RV重组抗原提供了方法学和实验室基础。 展开更多
关键词 风疹病毒 膜蛋白质类 基因表达 重组融合蛋白质类
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威海地区孕妇B族链球菌血清学分型及耐药性研究
6
作者 李金鹏 钱冬萌 《医学检验与临床》 2023年第9期59-62,共4页
目的:了解威海地区孕晚期孕妇感染的B族链球菌(GBS)对常用抗菌药物的敏感性及菌株的血清型分布特点。方法:对2022年就诊于我院的孕35~37周孕妇送检的生殖道分泌物进行细菌培养、菌株分离,对阳性菌株进行药敏和血清分型实验。结果:共268... 目的:了解威海地区孕晚期孕妇感染的B族链球菌(GBS)对常用抗菌药物的敏感性及菌株的血清型分布特点。方法:对2022年就诊于我院的孕35~37周孕妇送检的生殖道分泌物进行细菌培养、菌株分离,对阳性菌株进行药敏和血清分型实验。结果:共2685例围产期孕妇中培养结果为GBS阳性的有156例,感染率为5.81%,分离的GBS菌株对青霉素、氨苄西林、利奈唑胺、万古霉素100%敏感,无耐药菌株,对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、替加环素的耐药率分别为79.5%、76.3%、48.1%、44.2%、20.5%。对156株菌进行血清学分型,其中Ib型51株(32.7%)、III型44株(28.2%)、Ia型38株(24.4)、V型8株(5.1%)、II型6株(3.8%)、VI型2株(1.3%)和IV型1株(0.6%),6株(3.8%)未检出分型。结论:威海地区GBS菌株主要以血清型Ib、III、Ia为主,对青霉素、氨苄西林、利奈唑胺、万古霉素敏感,对大环内酯类,克林霉素和喹诺酮类抗菌药物的耐药性较高。 展开更多
关键词 B族链球菌 血清型 耐药
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从肺部感染患者痰液中分离出Kerstersia gyiorum及其药物敏感性的研究
7
作者 梅静 钱冬萌 《山东医学高等专科学校学报》 2023年第1期1-3,F0002,共4页
目的探讨Kerstersia gyiorum的鉴定方法及其药敏特性。方法应用生化试验、MALDI-TOF MS仪及16SrDNA测序对菌株进行鉴定,用微量生化反应管分析其生物学特性,利用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏系统对其进行药物敏感性分析。结果在... 目的探讨Kerstersia gyiorum的鉴定方法及其药敏特性。方法应用生化试验、MALDI-TOF MS仪及16SrDNA测序对菌株进行鉴定,用微量生化反应管分析其生物学特性,利用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定药敏系统对其进行药物敏感性分析。结果在血平板、中国蓝、巧克力平板上菌落扁平,呈灰白色,不透明,表面粗糙,迁徙生长。镜下形态为单个、成对或短链状排列的革兰阴性球杆。主要生化试验为氧化酶阴性、过氧化氢、动力阳性。MALDI-TOF MS及16SrDNA测序鉴定为Kerstersia gyiroum。菌株对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢呋辛耐药。结论MALDI-TOF MS及16SrDNA测序技术有利于Kerstersia gyiorum的诊断。 展开更多
关键词 Kerstersia gyiorum 药物敏感性 16SrDNA
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乌鸡白凤丸对Aβ_(1-40)诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用 被引量：3
8
作者 钱冬萌 谢俊霞 《青岛大学医学院学报》 CAS 2007年第1期1-4,共4页
目的研究乌鸡白凤丸(BFP)对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导体外培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用以及可能的作用机制。方法体外培养新生Wistar大鼠海马神经元,MTT法检测不同浓度Aβ1-40的细胞毒作用,选择出现显著细胞毒性的剂量为使... 目的研究乌鸡白凤丸(BFP)对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导体外培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用以及可能的作用机制。方法体外培养新生Wistar大鼠海马神经元,MTT法检测不同浓度Aβ1-40的细胞毒作用,选择出现显著细胞毒性的剂量为使用剂量。同时给予BFP(100 mg/L)干预。用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况,用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3基因mRNA的表达水平。结果10μmol/L Aβ1-40与海马神经元共孵育24 h有明显的细胞毒作用,并可诱导神经元凋亡,加入BFP干预后凋亡指数降低。Aβ1-40可使bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调,caspase-3基因的表达增强。加入BFP干预后,部分拮抗了Aβ1-40诱导的bcl-2基因的表达变化,从而使caspase-3基因的表达降低。结论BFP可通过调控bcl-2/bax的比值、降低caspase-3基因mRNA的表达来阻断Aβ1-40所诱导的海马神经元凋亡,具有神经保护作用。 展开更多
关键词 乌鸡白凤丸 淀粉样Β蛋白 细胞凋亡 海马 神经元 基因 bcl-2 BAX caspase-3
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GST-IL-21融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性测定
9
作者 钱冬萌 王斌 +1 位作者 丁守怡 王静 《生物技术通讯》 CAS 2006年第2期177-179,共3页
目的:克隆人白细胞介素21(IL-21)编码区的cDNA,在大肠杆菌中得以表达,并检测其促进人外周血单核细胞(PBMC)增殖的生物学活性。方法:利用基因工程技术,以植物血凝素(PHA)刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR扩增获得IL-21的编码基因... 目的:克隆人白细胞介素21(IL-21)编码区的cDNA,在大肠杆菌中得以表达,并检测其促进人外周血单核细胞(PBMC)增殖的生物学活性。方法:利用基因工程技术,以植物血凝素(PHA)刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR扩增获得IL-21的编码基因,并将其重组于表达载体pGEX4T-2中,转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达,纯化得到GST-IL-21重组融合蛋白;MTT法检测其对促进PBMC增殖的功能。结果:获得了IL-21编码区的cDNA克隆;SDS-PAGE显示经IPTG诱导表达的该融合蛋白相对分子质量为41000;纯化后的GST-IL-21融合蛋白在体外具有显著的促进PBMC增殖的作用。结论:GST-IL-21融合蛋白在原核表达系统中可以有效表达,并具有较好的生物学活性。 展开更多
关键词 人白细胞介素21 原核表达 生物学活性
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基因重组人白细胞介素21体外对NK细胞活性的影响
10
作者 钱冬萌 王斌 +3 位作者 丁守怡 王静 宋旭霞 闫志勇 《药品评价》 CAS 2005年第5期345-348,共4页
目的在原核系统中表达基因重组人IL-21,研究其在体外对NK细胞杀伤活性的影响。方法利用基因工程技术,获得人IL-21的编码基因,重组于表达载体pGEX4T-2中,转化E.coliDH5α进行诱导表达,纯化获得重组人IL-21,分别将0、10、20、40μg/L的IL... 目的在原核系统中表达基因重组人IL-21,研究其在体外对NK细胞杀伤活性的影响。方法利用基因工程技术,获得人IL-21的编码基因,重组于表达载体pGEX4T-2中,转化E.coliDH5α进行诱导表达,纯化获得重组人IL-21,分别将0、10、20、40μg/L的IL-21与健康人外周血单核细胞共同孵育,改良的MTT法检测NK细胞对靶细胞K562的杀伤活性。结果在原核表达系统中成功表达了GST-IL-21的融合蛋白,一定剂量的纯化后IL-21(40μg/L)在体外具有增强NK细胞杀伤活性的作用。结论在大肠杆菌中表达的基因重组人IL-21在体外可增强NK细胞杀伤活性,为系统研究新型的免疫调节因子IL-21奠定基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素21 原核表达 NK细胞 杀细胞活性
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基础医学实验教学改革的研究和探索 被引量：29
11
作者 王斌 宋旭霞 +2 位作者 钱冬萌 闫志勇 丁守怡 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2014年第4期168-170,183,共4页
既往我国的高等医学教育模式中,基础医学实验教学是理论课程教学的补充和验证,是依附于理论课程的教学体系。近年来,基础医学实验课程开始独立于理论课程之外形成独立的课程体系,本实验室的基础医学实验教学在模块化实验课程开设、分层... 既往我国的高等医学教育模式中,基础医学实验教学是理论课程教学的补充和验证,是依附于理论课程的教学体系。近年来,基础医学实验课程开始独立于理论课程之外形成独立的课程体系,本实验室的基础医学实验教学在模块化实验课程开设、分层次实验内容设计、多样化培养模式实施、现代化教学手段运用、多元化教学方法并举、考核方式完善等方面进行了实验教学改革,打破了传统的基础医学实验教学完全依附于理论教学的框架和模式,建立了高等医学教育实验教学课程的新体系,在培养医学生基本技能、提高创新思维和动手能力,造就高素质医学人才方面起到了关键作用。 展开更多
关键词 基础医学 实验教学 教学改革
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沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株的筛选及其酶学性质 被引量：13
12
作者 代玉梅 闫志勇 +5 位作者 王斌 钱冬萌 宋旭霞 丁守怡 刘明军 张艳丽 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第7期493-496,共4页
目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks... 目的从海洋生物双齿围沙蚕消化道筛选产蛋白酶菌株,并对其胞外蛋白酶的性质进行分析。方法用脱脂奶粉平板溶圈法及改良Lowry法进行产蛋白酶菌株的筛选和蛋白酶活力测定;Bradford法测定蛋白含量;UVP GDS8000型凝胶成像系统和VisionWorks、Bandscan4·03软件进行相对分子质量和纯度分析,并对酶的各项性质进行检测。结果筛选出高蛋白水解活性菌株D2,其胞外蛋白酶比活性为156·0U/mg,相对分子质量约为42000,纯度大于97%,最适作用温度60℃,最适pH为9,在pH6～10及0～55℃具有较好的稳定性。结论D2株分泌的胞外蛋白酶有望成为一种新型的海洋微生物蛋白酶资源。 展开更多
关键词 双齿围沙蚕 胞外蛋白酶 筛选 酶学性质
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一株具有纤维蛋白溶解活性的海单胞菌的分离和鉴定 被引量：8
13
作者 闫志勇 王斌 +3 位作者 宋旭霞 李荣贵 钱冬萌 丁守怡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第10期717-720,732,共5页
目的对从双齿围沙蚕消化道内分离的菌株Y5进行纤维蛋白溶解活性检测及系统分类鉴定。方法用纤维蛋白平板法检测Y5的纤维蛋白溶解活性,并从形态、生理、生化、DNA(G+C)含量、脂肪酸成分、16S rRNA基因序列及系统发生分析等方面进行分类... 目的对从双齿围沙蚕消化道内分离的菌株Y5进行纤维蛋白溶解活性检测及系统分类鉴定。方法用纤维蛋白平板法检测Y5的纤维蛋白溶解活性,并从形态、生理、生化、DNA(G+C)含量、脂肪酸成分、16S rRNA基因序列及系统发生分析等方面进行分类鉴定。结果菌株Y5为革兰阴性杆菌;DNA(G+C)含量为47.5%;主要脂肪酸成分为C_(18:1)ω7c,C_(16:1)ω7c,C_(16:0),C_(10:0)3-OH;16S rRNA基因序列与9种已确定的海单胞菌一致性为93%～97%;在系统发生树中与其他海单胞菌位于同一类群中;该菌株在纤维蛋白平板上显示出明显的纤维蛋白溶解活性。结论菌株Y5属于海单胞菌属。该菌株具有纤维蛋白溶解活性,有望为开发溶栓药物提供又一重要资源。 展开更多
关键词 海单胞菌 纤维蛋白溶解活性 双齿围沙蚕 分离 鉴定
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沙蚕消化道细菌D2胞外蛋白酶的分离纯化及其性质 被引量：6
14
作者 代玉梅 闫志勇 +5 位作者 王斌 钱冬萌 宋旭霞 丁守怡 刘明军 张艳丽 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期93-98,共6页
目的分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析。方法收集48 h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的... 目的分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析。方法收集48 h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的部分氨基酸序列。结果经纯化,得到电泳纯的D2蛋白酶,纯化倍数为4.9倍,活性回收率为33%,相对分子质量约42 000,纯度大于99%;最适作用温度为60℃,最适pH为9,在pH6-11及0-60℃具有较好的稳定性,水解酪蛋白的Km值为2.44 mg/ml;Cu2＋、Ca2＋、Mg2＋、K＋等金属离子对酶活力有明显促进作用,EDTA和PMSF对酶活力有强烈抑制作用;该酶对尿素、SDS、DTT等变性剂有较好的耐受性,其两个内部肽段经质谱测序,序列分别为AHGFLPLTK和APSATG-GSALYPLEFVVGK。结论该酶为一高温碱性丝氨酸蛋白酶,具有较高的工业开发价值和较大的应用潜力。 展开更多
关键词 双齿围沙蛋 消化道 蛋白酶 纯化 性质
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胃癌中COX-2与P-gp表达及其预后的研究 被引量：7
15
作者 叶书成 王军业 +2 位作者 袁国珍 钱冬萌 王斌 《中国全科医学》 CAS CSCD 2008年第4期291-294,共4页
目的探讨环氧化酶-2(COX-2)与P-糖蛋白(P-gp)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测COX-2和P-gp在60例胃癌组织中的表达情况。结果全组COX-2阳性率为63.3%(38/60),P-gp阳性率为68.3%(41/60)。COX-2的表达与组织分... 目的探讨环氧化酶-2(COX-2)与P-糖蛋白(P-gp)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测COX-2和P-gp在60例胃癌组织中的表达情况。结果全组COX-2阳性率为63.3%(38/60),P-gp阳性率为68.3%(41/60)。COX-2的表达与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期相关(P<0.05);P-gp的表达与浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期相关(P<0.05)。COX-2和P-gp同时表达、单独表达及不表达时,胃癌的组织分化程度、病变浸润深度(T分期)、淋巴结转移(N分期)和临床分期组间差异有统计学意义(P<0.05)。COX-2和P-gp在胃癌组织中的表达具有相关性(r=0.374,P=0.004)。胃癌患者1、3、5年生存率分别为83.3%、40.0%和30.0%;COX-2阳性组和COX-2阴性组的1、3、5年生存率分别为79.0%、28.9%、15.8%和90.9%、59.1%、54.6%,两组间差异有统计学意义(χ2=7.885,P=0.005)。结论在胃癌组织中COX-2参与了P-gp的表达调控。COX-2的表达可能成为影响胃癌生存的重要预测因子。 展开更多
关键词 胃肿瘤 COX-2 P-GP 多药耐药 预后
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蛋白质芯片飞行质谱技术检测体外培养的肝癌细胞株与转染HBV的肝癌细胞株蛋白质的差异表达 被引量：7
16
作者 丁守怡 钱冬萌 +3 位作者 闫志勇 宋旭霞 牟文凤 王斌 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第14期1684-1687,共4页
目的:运用SELDI蛋白质芯片技术检测体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与转染乙肝病毒的肝癌细胞株(HepG2.2.15)蛋白质的差异表达,从而为进一步研究肝癌的发病机制奠定基础. 方法:常规培养上述两种细胞,细胞状态良好时收集细胞,裂解细胞后采用... 目的:运用SELDI蛋白质芯片技术检测体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与转染乙肝病毒的肝癌细胞株(HepG2.2.15)蛋白质的差异表达,从而为进一步研究肝癌的发病机制奠定基础. 方法:常规培养上述两种细胞,细胞状态良好时收集细胞,裂解细胞后采用SELDI—TOF—MS技术用WCX2 芯片检测HepG2、HepG2.2.15蛋白质组学的差异. 结果:WCX2芯片共捕获91个蛋白,其中HepG2、HepG 2.2.15细胞差异蛋白共19个,9个蛋白在HepG2 细胞中表达量增高,10个蛋白在HepG2细胞中表达量降低.通过在Swiss蛋白数据库中搜索,发现Mr 11 081 蛋白与钙结合蛋白S100 A10相符,其他几种蛋白暂时寻找不到. 结论:SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与转染乙肝病毒的肝癌细胞株蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,重复性好,本文发现的这些组织特异性蛋白生物标记对我们从血清或组织标本中筛选和鉴定不同型别肝癌细胞之间的标志蛋白有重要意义. 展开更多
关键词 蛋白质芯片飞行质谱技术 检测 体外培养 肝癌 转染HBV 肝癌细胞株蛋白质 差异表达
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人巨细胞病毒感染对人神经干细胞定向星形胶质细胞分化过程中Notch相关信号分子表达的影响 被引量：6
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作者 李玲 白志强 +9 位作者 李鹏 刘志军 王海涛 刘海燕 姜光域 宋旭霞 钱冬萌 闫志勇 丁守怡 王斌 《医学研究生学报》 CAS 2010年第10期1013-1019,共7页
目的人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染可抑制神经干细胞（neural stem cell,NSC）的增殖和分化,Notch信号对NSC的增殖和分化具有重要的调控功能。文中研究HCMV感染对人NSC向星形胶质细胞分化过程中Notch信号相关分子Notc... 目的人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染可抑制神经干细胞（neural stem cell,NSC）的增殖和分化,Notch信号对NSC的增殖和分化具有重要的调控功能。文中研究HCMV感染对人NSC向星形胶质细胞分化过程中Notch信号相关分子Notch1~3、Jagged（JAG）1、delta-like（DLL）1及早老素（presenilin,PS）1表达的影响。方法体外分离培养海马NSC,并诱导其向星形胶质细胞分化。同时以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为5的HCMV AD169株感染NSC,分别在感染后0、1、3、5、7 d收获细胞,用实时RT-PCR法检测细胞内Notch1-3及其受体JAG1、DLL1的转录水平,Westernblot法检测Notch1细胞内段（Notch 1 intracellular domain,NICD）含量的变化。结果未分化状态的NSC含有大量Notch1NICD,Notch1-3、JAG1、DLL1mRNA呈高表达。诱导分化1d后,Notch各受体、配体mRNA表达均显著下降,3 d后表达回升,至第7天显著升高且可检出大量激活的NICD。HCMV感染组细胞在诱导分化1 d后Notch相关受体、配体mRNA水平亦明显下降,与对照组相比Notch1、Notch2和DLL1的表达更少。在以后各个时间点Notch相关受体、配体mRNA水平均低于对照组。PS1的表达仅在1 d时低于对照组。病毒感染7 d后,细胞内NICD含量明显低于对照组。结论HCMV感染可抑制Notch相关受体、配体的表达与活化,Notch信号异常表达参与HCMV感染所致NSC分化和增殖异常。 展开更多
关键词 神经干细胞 人巨细胞病毒 细胞分化 Notch信号转导途径 实时定量PCR
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体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达 被引量：11
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作者 宋旭霞 闫志勇 +4 位作者 王斌 牟文凤 钱冬萌 丁守怡 姚宗良 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第22期2689-2692,共4页
目的:运用SELDI蛋白质芯片技术分析体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与正常肝细胞株(L02)蛋白质表达差异．方法:在体外培养HepG2和L02细胞株,收获细胞,将细胞用细胞裂解液裂解后,采用SELDI蛋白质芯片技术用IMAC3 及WCX2芯片检测HepG2、L02... 目的:运用SELDI蛋白质芯片技术分析体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与正常肝细胞株(L02)蛋白质表达差异．方法:在体外培养HepG2和L02细胞株,收获细胞,将细胞用细胞裂解液裂解后,采用SELDI蛋白质芯片技术用IMAC3 及WCX2芯片检测HepG2、L02的蛋白质谱．结果:体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株的蛋白质存在差异表达,IMAC3芯片共捕获61个蛋白,发现差异峰7个,与 L02细胞相比,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,4个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．WCX2芯片共捕获91个蛋白, 发现差异峰14个,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,11 个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．结论:SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,重复性好． 展开更多
关键词 蛋白质芯片 肝癌细胞株 差异蛋白
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人巨细胞病毒诱导分化中的神经干细胞分泌神经生长因子前体 被引量：4
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作者 李玲 王斌 +8 位作者 白志强 李鹏 王海涛 刘海燕 姜光域 宋旭霞 钱冬萌 闫志勇 丁守怡 《医学研究生学报》 CAS 2010年第9期904-909,共6页
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提... 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提供理论依据。方法体外培养人海马NSC,感染组以感染复数(multiplicity of infectin,MOI)为5的HCMVAD169株感染NSC,对照组只加入与病毒悬液等体积的培养液,在感染病毒的同时,诱导感染组和对照组NSC向星形胶质细胞分化,分别在感染后0、1、3、5、7、9 d收获细胞,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot方法检测细胞内NGF及其受体p75NTR、trkA的转录水平和蛋白表达水平。结果对照组NSC不表达NGF及其受体P75NTR和trkA。感染组细胞在第3天开始出现NGFmRNA的表达,第5天出现P75NTRmRNA的表达,且其表达强度随时间增强;第5天出现相对分子质量为40000和100000NGF前体蛋白(ProNGF)和P75NTR蛋白,随时间延长,表达强度升高。免疫荧光检测显示,NGF前体蛋白位于细胞的细胞质;整个感染过程中未检测到trkA的表达。结论 HCMV感染可诱导向星形胶质细胞分化的海马NSC分泌NGF前体蛋白及其受体p75NTR。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 神经干细胞 神经生长因子 神经生长因子前体蛋白 P75NTR 细胞凋亡
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多重半套式PCR检测细菌16srRNA基因方法的建立 被引量：11
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作者 闫志勇 王斌 +3 位作者 苏维奇 毕春霞 钱冬萌 李慧 《青岛大学医学院学报》 CAS 2001年第1期22-24,共3页
①目的　设计并建立多重半套式聚合酶链反应 (PCR)快速检测临床标本中感染病原菌DNA方法。②方法　通过对多数病原菌 16srRNA基因保守区和变异区序列分析 ,设计通用引物和革兰阴性菌及革兰阳性菌的特异性引物分别作为外侧和内侧引物 ,... ①目的　设计并建立多重半套式聚合酶链反应 (PCR)快速检测临床标本中感染病原菌DNA方法。②方法　通过对多数病原菌 16srRNA基因保守区和变异区序列分析 ,设计通用引物和革兰阴性菌及革兰阳性菌的特异性引物分别作为外侧和内侧引物 ,分两步先后加入同一反应体系中对不同细菌的DNA进行扩增。③结果金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌经扩增后均有长度为 10 32bp的DNA片段产生 ;金黄色葡萄球菌另有一长度为336bp的特异性产物 ,大肠埃希菌另有一长度为 12 7bp的特异性产物。 ④结论　该方法可以特异、敏感、快速检测出临床感染的病原菌。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 RNA 病原菌 基因诊断 实验室诊断 细菌感染
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