英夫利西单抗糖化方法开发验证及其在抗体药物中的普适性 被引量：1

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作者 徐梦娇 刘涛 +11 位作者 徐进 郭清城 付蓉蓉 赵香 王福贵 宋兰坤 冀芦沙 钱卫珠 侯盛 李军 张大鹏 郭怀祖 《聊城大学学报（自然科学版）》 2024年第5期155-168,共14页

糖化修饰作为一种非酶促糖修饰,通过还原性糖与蛋白氨基酸残基共价结合,普遍发生于抗体药物生产储存等过程,显著影响产品的质量和功能。硼酸亲和色谱(BAC)法虽然是检测抗体类药物糖化修饰的主要技术,但其在测定英夫利西单抗糖化水平时... 糖化修饰作为一种非酶促糖修饰,通过还原性糖与蛋白氨基酸残基共价结合,普遍发生于抗体药物生产储存等过程,显著影响产品的质量和功能。硼酸亲和色谱(BAC)法虽然是检测抗体类药物糖化修饰的主要技术,但其在测定英夫利西单抗糖化水平时仍面临准确性挑战,在一定程度上限制了其在质量控制上的应用。本研究深入探讨了影响该单抗BAC方法准确性的因素,明确了该单抗BAC方法糖化检测不准确的原因,并针对性地对流动相的组成和浓度进行了优化,成功开发出一种改进的BAC方法,能够更精准地测定英夫利西单抗的糖化水平。该方法的准确性通过基于质谱的快速多属性方法确认,并通过了严格的方法学验证。验证结果表明该方法具有良好的准确性、精密度、耐用性等。此外,通过对不同类型抗体药物进行测试,证实了该方法在常规抗体药物糖化检测中的广泛适用性。本研究不仅解决了英夫利西单抗糖化检测的关键技术难题,还确认了该方法的普适性,为抗体药物的质量控制提供了一种新的快速、准确的技术方案。这些研究结果有助于推动相关技术平台的改进和理念的更新,从而增强产品开发和质控的能力。 展开更多

关键词 英夫利西单抗 糖化 硼酸亲和色谱 抗体药物 质量控制 普适性

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多糖基化位点抗体药物质控中基于单四级杆的多属性分析方法开发与验证

2

作者 王福贵 刘涛 +15 位作者 李锦豪 徐梦娇 付蓉蓉 赵香 聂爱英 宋兰坤 陈熙 冀芦沙 钱卫珠 侯盛 李军 徐忠升 范文强 张大鹏 徐进 郭清城 《聊城大学学报（自然科学版）》 2024年第5期169-182,共14页

抗体药物已经成为生物制品的重要组成部分,此类产品具有复杂的质量属性,尤其是具有多糖基化位点的抗体药物,其质量控制面临更高挑战。虽然基于高分辨质谱的多属性分析方法(Multi-attribute method,MAM)已在抗体药物的质控中获得应用,但... 抗体药物已经成为生物制品的重要组成部分,此类产品具有复杂的质量属性,尤其是具有多糖基化位点的抗体药物,其质量控制面临更高挑战。虽然基于高分辨质谱的多属性分析方法(Multi-attribute method,MAM)已在抗体药物的质控中获得应用,但针对多糖基化位点抗体药物的快速且简便的检测技术仍较为少见。开发一种基于单四级杆的多属性分析方法,对于提升这类药物的质控效率具有重要意义。本研究以双糖基化位点的治疗类单抗CMAB009为模型。通过基于高分辨质谱的MAM对其进行了深入的预表征分析,成功获取了其主要质量属性。随后将预表征信息用于基于单四级杆的MAM开发。该方法在单次分析中有效监测了多种产品质量属性,其准确性通过基于高分辨质谱的方法进行了确认。随后我们对该方法进行了严格的方法学验证。验证结果显示,该方法具有良好的专属性、线性、准确度以及精密度等。基于单四级杆的MAM不仅有效地解决了多糖基化位点单抗药物的多属性检测难题,还展示了一定的方法普适性,为不同糖基化位点抗体药物的质量控制提供了一种新的、简便的技术方案。本研究结果预计将推动相关技术平台的改进和理念的更新,从而增强产品开发和质控的整体能力。 展开更多

关键词 抗体药物 多属性分析方法 质量控制 CMAB009 单四级杆

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基于Wnt/β-catenin信号通路的DKK-1抗体药物生物活性报告基因法开发与评估

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作者 赵香 侯盛 +6 位作者 徐进 张大鹏 付蓉蓉 徐梦娇 王福贵 钱卫珠 李军 《聊城大学学报（自然科学版）》 2024年第5期183-190,共8页

生物活性检测对于确保治疗性抗体的安全性和有效性至关重要,需要准确反映药物的作用机制(MOA)。作为一类新兴靶点药物,DKK-1抗体在骨质疏松和肿瘤治疗领域展现出巨大潜力。然而,当前针对DKK-1抗体的生物活性评价主要基于碱性磷酸酶活性... 生物活性检测对于确保治疗性抗体的安全性和有效性至关重要,需要准确反映药物的作用机制(MOA)。作为一类新兴靶点药物,DKK-1抗体在骨质疏松和肿瘤治疗领域展现出巨大潜力。然而,当前针对DKK-1抗体的生物活性评价主要基于碱性磷酸酶活性测定,该方法存在操作复杂、耗时长及结果变异性大等问题,在一定程度上限制了此类抗体的研发及质控。为了建立一种DKK-1抗体高性能生物活性检测方法,本研究引入了报告基因法(RGA),通过将TCF/LEF反应元件控制的稳定表达荧光素酶的报告基因质粒转染HEK 293细胞,成功建立了一种基于DKK-1抗体MOA的Wnt/β-catenin信号通路的报告基因检测方法。该方法经过优化及模拟实验评估,显示出在实际应用中的潜力和可靠性。该新方法的建立预计将进一步促进DKK-1抗体类药物的筛选评估及其在后续开发过程中的质量控制。 展开更多

关键词 生物活性 抗体药物 DKK-1 报告基因方法

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抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性评价方法的建立 被引量：2

4

作者 钱卫珠 侯盛 +4 位作者 李博华 杨扬 王晓芸 王荣福 王皓 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期484-487,共4页

目的建立抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的评价方法。方法利用HER2表达阳性的人乳腺癌细胞系BT474建立抗HER2单抗体内外活性评价方法,对上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗的体外生物学活性、抗体依赖的细胞介导... 目的建立抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的评价方法。方法利用HER2表达阳性的人乳腺癌细胞系BT474建立抗HER2单抗体内外活性评价方法,对上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗的体外生物学活性、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性、对BT474荷瘤裸鼠的治疗作用及荷瘤裸鼠瘤体组织H E染色及免疫组化检测rh HER2mAb的分布与Herceptin进行了比较研究。结果建立了完整的该人源化单抗的体内外活性评价方法,测评结果显示,上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗在体外有效抑制BT474细胞增殖,与Herceptin体外生物学活性相似,EC50分别为148.3和145.9ng/ml;可通过ADCC效应杀伤BT474细胞,与Herceptin的EC50值一致,分别为185.0和183.9ng/ml;抑制BT474裸鼠异种移植模型肿瘤的生长,与无关抗体治疗组或PBS治疗组相比具有统计学差别(P<0.05),与Herceptin抑制能力接近,4mg/kg剂量组相比没有统计学差别;免疫组织化学检测显示抗体集中分布于肿瘤组织。结论建立的评价方法可对抗HER2单抗的抗肿瘤活性进行客观准确的评价,国内研制的抗HER2人源化单克隆抗体与进口同种抗体相比具有相同的体内外活性。 展开更多

关键词 HER2 人源化单克隆抗体 乳腺肿瘤 抗肿瘤活性

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肝癌细胞膜上转铁蛋白受体和去唾液酸糖蛋白受体数量的变化 被引量：8

5

作者 谢天培 吴孟超 +6 位作者 沈锋 施乐华 刘彦君 王皓 王华菁 钱卫珠 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期6-8,共3页

目的:研究肝癌细胞膜摄取转铁蛋白受体的变化。方法：采用免疫组化及配体受体结合法分别测定正常肝脏、肝癌组织及癌旁肝组织转铁蛋白受体及去唾液酸糖蛋白受体的含量。结果：肝癌组织中转铁蛋白受体的含量高于癌旁及正常肝组织，而去... 目的:研究肝癌细胞膜摄取转铁蛋白受体的变化。方法：采用免疫组化及配体受体结合法分别测定正常肝脏、肝癌组织及癌旁肝组织转铁蛋白受体及去唾液酸糖蛋白受体的含量。结果：肝癌组织中转铁蛋白受体的含量高于癌旁及正常肝组织，而去唾液酸糖蛋白受体却明显低于癌旁及正常肝组织。结论：该变化有利于肝癌细胞对转铁蛋白的有效提取，也增加了肝癌细胞对高度唾液酸化的转铁蛋白的相对特异性摄取。 展开更多

关键词 肝肿瘤 转铁蛋白 受体 去唾液酸糖蛋白

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人肝癌细胞与自体激活B淋巴细胞融合制备肿瘤疫苗 被引量：3

6

作者 刘彦君 王皓 +7 位作者 卫立辛 沈锋 谢天培 钱卫珠 刘小萍 周倩 吴孟超 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期507-510,共4页

目的：观察３例人肝癌组织细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合后融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况，以便为肿瘤疫苗向临床试验过渡提供人体细胞的实验依据。方法：应用聚乙二醇（ＰＥＧ）法将人... 目的：观察３例人肝癌组织细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合后融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况，以便为肿瘤疫苗向临床试验过渡提供人体细胞的实验依据。方法：应用聚乙二醇（ＰＥＧ）法将人肝癌细胞与其自体激活Ｂ淋巴细胞融合，利用流式细胞仪观察融合细胞表面分子ＧＰ７５和免疫相关分子ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ和Ｂ７的表达情况。结果：融合细胞表面不仅表达肝癌细胞表面的ＧＰ７５分子，还可表达共刺激分子Ｂ７及ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ。结论：人肝癌细胞与其自体激活的Ｂ淋巴细胞融合后的杂交瘤细胞既能表达肝癌细胞表面分子ＧＰ７５，又可表达共刺激信号分子。 展开更多

关键词 肿瘤疫苗 肝肿瘤 B细胞 细胞融合

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钾通道阻断剂和一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞钾电流的作用 被引量：2

7

作者 姚小鹏 钱卫珠 +5 位作者 李强 朱海峰 黄怡 白冲 董宇超 刘忠令 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期192-195,共4页

目的 :研究钾通道阻断剂、一氧化氮 (NO)对继代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)钾电流 (IK)的作用。 方法 :使用全细胞膜片钳技术观察继代培养大鼠 PASMC IK 及钾通道阻断剂格列本脲 (Gli) ,四乙胺 (TEA) ,4 -氨基吡啶 (4- AP)和 NO供... 目的 :研究钾通道阻断剂、一氧化氮 (NO)对继代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)钾电流 (IK)的作用。 方法 :使用全细胞膜片钳技术观察继代培养大鼠 PASMC IK 及钾通道阻断剂格列本脲 (Gli) ,四乙胺 (TEA) ,4 -氨基吡啶 (4- AP)和 NO供体 S-亚硝基乙酰青霉胺 (SNAP)对其的作用。 结果 :继代培养大鼠 PASMC较急性分离者之 IK 明显降低。 4 - AP和高浓度TEA显著降低继代培养大鼠 PASMC之 IK,SNAP显著增加继代培养大鼠 PASMC之 IK。结论 :继代培养大鼠 PASMC钾通道特性发生改变 ,但通道阻断剂和 NO仍能显著改变其活性。 展开更多

关键词 肺动脉 平滑肌细胞 钾通道 一氧化氮 膜片钳

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B细胞融合人肝癌细胞疫苗^(60)Co照射后生长及表型的观察 被引量：2

8

作者 卫立辛 钱卫珠 +8 位作者 阎振林 王皓 刘彦君 罗明 赵健 谢天培 沈锋 吴孟超 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期6-8,共3页

目的：探讨Ｂ细胞与人肝癌细胞的融合细胞经６０Ｃｏ照射后的生长和免疫原性相关表型的变化。方法：体外照射后观察融合细胞生长曲线和软琼脂集落形成；体内采用裸鼠成瘤试验，观察体外生长和动物体内成瘤性，应用流式细胞仪检测照射后... 目的：探讨Ｂ细胞与人肝癌细胞的融合细胞经６０Ｃｏ照射后的生长和免疫原性相关表型的变化。方法：体外照射后观察融合细胞生长曲线和软琼脂集落形成；体内采用裸鼠成瘤试验，观察体外生长和动物体内成瘤性，应用流式细胞仪检测照射后融合细胞ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及肝癌抗原（ＧＰ７５）表达，观察其免疫原性相关表型变化。结果：经６０Ｃｏ照射的融合细胞失去增殖能力，４ｄ后可见部分细胞死亡，７ｄ后几乎全部死亡。６０Ｃｏ照射后３ｄ内ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及ＧＰ７５表达无明显变化。结论：经６０Ｃｏ照射后融合细胞失去增殖能力。 展开更多

关键词 肝肿瘤 细胞融合 放射疗法 钴60 B细胞

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细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探 被引量：2

9

作者 卫立辛 钱卫珠 +7 位作者 闫振林 沈锋 谢天培 王皓 刘彦君 施军霞 吴孟超 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期504-506,共3页

目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备... 目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；（２）事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌ＢＥＲＨ－２细胞和大鼠膀胱癌ＮＢＴ－Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；（３）该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠ＣＤ４单抗或抗ＣＤ８单抗多次注射，以清除大鼠ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：ＢＥＲＨ－２细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而ＮＢＴ－Ⅱ细胞可致瘤；事先清除ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌ＢＥＲＨ－２细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了ＣＤ４＋细胞后不能被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤，清除了ＣＤ８＋细胞后则可被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 肝肿瘤 融合 肿瘤疫苗 T细胞 免疫疗法

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抗CD20单克隆抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的实验观察 被引量：4

10

作者 高磊 周倩 +2 位作者 钱卫珠 范晓强 郭亚军 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第24期1864-1867,1881,共5页

目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNE... 目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNEL法检测肿瘤凋亡,并绘制肿瘤体积曲线和裸鼠体质量曲线。体外实验:用CellTiter96 AQueous非同位素细胞增殖试验试剂盒检测抗CD20单克隆抗体、化疗和联合化疗对Raji细胞体外杀伤作用,并绘制剂量反应曲线。结果:体内实验:鼠抗人CD20单抗组及嵌合CD20抗体组均出现大量肿瘤细胞凋亡。联合治疗组疗效最佳,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。化疗组及联合治疗组体质量下降明显,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。体外实验:发现鼠抗人CD20单克隆抗体及嵌合型CD20抗体均可增加Raji细胞对化疗药物的细胞毒敏感性。结论:CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤具有明显的抑制作用,可以诱发大面积肿瘤细胞凋亡,能提高肿瘤对化疗药物的细胞毒敏感性,且较常规化疗毒副反应小。 展开更多

关键词 抗CD20单克隆抗体 人B细胞淋巴瘤 化学治疗

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肝癌组织中神经节苷脂谱改变的机理研究 被引量：2

11

作者 谢天培 沈锋 +6 位作者 施乐华 刘彦君 王华菁 王皓 钱卫珠 郭亚军 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期213-215,共3页

目的：检测肝癌组织中唾液酸酶的活性，探讨肝癌组织中神经节苷脂谱改变（ＧＤ３含量增加）的机理。方法：以蓖麻凝集素Ⅱ与乳糖基的特异结合为基础，用神经节苷脂ＧＭ３作为水解底物包被于９６孔板，在唾液酸酶的作用下，糖链末端的唾... 目的：检测肝癌组织中唾液酸酶的活性，探讨肝癌组织中神经节苷脂谱改变（ＧＤ３含量增加）的机理。方法：以蓖麻凝集素Ⅱ与乳糖基的特异结合为基础，用神经节苷脂ＧＭ３作为水解底物包被于９６孔板，在唾液酸酶的作用下，糖链末端的唾液酸被切除而暴露出乳糖残基，用生物素标记的蓖麻凝集素与后者结合，再用ＡＢＣ法测定结合量即可检测唾液酸酶活性。结果：肝癌组织中不管是可溶性的还是膜结合性的唾液酸酶，其活性都明显低于其癌旁组织。结论：肝癌组织中神经节苷脂ＧＤ３增加的原因不仅与ＧＤ３合成酶活性的增高有关，还与其水解酶唾液酸酶活性的降低相关。 展开更多

关键词 肝肿瘤 神经节苷脂 唾液酸酶

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Smac在TRAIL诱导人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡中的作用 被引量：1

12

作者 金军 赵健 +5 位作者 李博华 张霞 张瑞萍 李晓东 钱卫珠 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期87-89,共3页

目的 :初步研究 Smac在 TNF相关的凋亡诱导配体 (TNF- related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤 Saos- 2细胞凋亡中的作用。 方法 :观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析 TRAIL 作用的 Saos- 2细胞 DNA片段 ,利用流... 目的 :初步研究 Smac在 TNF相关的凋亡诱导配体 (TNF- related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导的人骨肉瘤 Saos- 2细胞凋亡中的作用。 方法 :观察细胞形态变化和以琼脂糖凝胶电泳分析 TRAIL 作用的 Saos- 2细胞 DNA片段 ,利用流式细胞术及细胞计数法比较 Smac或 Bcl- 2表达不同的细胞的凋亡程度 ,同时以 Western印迹半定量检测细胞胞质内Sm ac表达水平。结果 :Saos- 2细胞在 TRAIL 的作用下出现典型的凋亡样改变。在 TRAIL 作用 Saos- 2细胞时 ,Smac在胞质中的含量明显增加。在 TRAIL 作用 2 4 h后 ,Smac在 Saos- 2细胞中过表达 ,细胞凋亡率由 1 2 .7%增加到 31 .4 %。TRAIL 作用 Saos- 2细胞 4 8h后 ,转染 Bcl- 2的细胞与转染空载体的 Saos- 2细胞相比 ,凋亡率显著降低 (由 2 4 %降至 1 5 % ) ,且胞质中Sm ac的表达水平也明显降低。 结论 :在 TRAIL 诱导的凋亡中 Sm ac起促进作用 ,Bcl- 2可以通过阻止 Sm 展开更多

关键词 SMAC TRAIL 人骨肉瘤 SAOS-2 细胞凋亡 凋亡诱导配体

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抗CD3人源化抗体恒定区突变体的制备及其生物学活性 被引量：1

13

作者 李博华 王皓 +7 位作者 杨扬 陆斌 王华菁 张大鹏 钱卫珠 季军捷 李晓东 郭亚军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期28-33,共6页

为了降低抗CD3人源化抗体hu12F6对T细胞的激活作用以克服首剂效应 ,构建了恒定区特定位点突变的hu12F6重链表达载体 ,将其与hu12F6的轻链表达载体共转染CHO细胞 .ELISA和RT PCR证实 ,恒定区特定位点突变的人源化抗体hu12F6m在CHO细胞中... 为了降低抗CD3人源化抗体hu12F6对T细胞的激活作用以克服首剂效应 ,构建了恒定区特定位点突变的hu12F6重链表达载体 ,将其与hu12F6的轻链表达载体共转染CHO细胞 .ELISA和RT PCR证实 ,恒定区特定位点突变的人源化抗体hu12F6m在CHO细胞中获得了表达 .竞争抑制实验证实hu12F6m具有与原鼠源抗体及hu12F6相似的特异性和亲和力 .增殖实验表明hu12F6m对T细胞的刺激作用明显弱于hu12F6 .实验结果为深入探讨hu12F6m的生物学特性奠定了基础 . 展开更多

关键词 CD3 人源化抗体 定点突变 首剂效应 恒定区

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人细胞融合肝癌疫苗的制备及其融合细胞百分率的检测 被引量：1

14

作者 张从昕 季军捷 +5 位作者 钱卫珠 范晓强 范瑞芳 卫立辛 吴孟超 郭亚军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期808-809,共2页

手术取病人新鲜肝癌组织及部分脾脏 ,分离纯化、激活B细胞 ,应用PEG融合肝癌细胞与激活B细胞 ,经培养灭活制得肿瘤疫苗。同时测定了融合肝癌疫苗的融合率、冻存后复苏活细胞百分率。结果显示 ,3例融合细胞的融合率分别为 6 6 84 %、74 ... 手术取病人新鲜肝癌组织及部分脾脏 ,分离纯化、激活B细胞 ,应用PEG融合肝癌细胞与激活B细胞 ,经培养灭活制得肿瘤疫苗。同时测定了融合肝癌疫苗的融合率、冻存后复苏活细胞百分率。结果显示 ,3例融合细胞的融合率分别为 6 6 84 %、74 4 3%、76 5 5 % ,融合细胞经DMSO和甘油冻存后复苏活细胞百分率分别为 95 %、97%。研究表明 ,人细胞融合肝癌疫苗具有很高的融合率和冻存后复苏活细胞百分率 ,便于制备及储存 ,适合临床应用。 展开更多

关键词 人细胞融合肝癌疫苗 制备 融合细胞百分率 检测

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重组人CTLA4Ig融合蛋白体外对人T淋巴细胞功能的影响 被引量：1

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作者 周倩 钱卫珠 +6 位作者 寇庚 王皓 刘彦君 李晓冬 吴孟超 郭亚军 陈列平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期165-168,共4页

目的　研究重组人CTIA4Ig对人T淋巴细胞功能的影响。方法　采用初次混合淋巴细胞培养、再次混合淋巴细胞培养及细胞毒实验的方法。结果　CTLA4Ig在浓度高于3mg·L-1时能有效地抑制初次混合淋巴细胞反应 (P <0 0 5 ) ,其在作用 2... 目的　研究重组人CTIA4Ig对人T淋巴细胞功能的影响。方法　采用初次混合淋巴细胞培养、再次混合淋巴细胞培养及细胞毒实验的方法。结果　CTLA4Ig在浓度高于3mg·L-1时能有效地抑制初次混合淋巴细胞反应 (P <0 0 5 ) ,其在作用 2 4h内不能发挥有效的抑制作用 ,72h能达最大抑制效率 ;在再次混合淋巴细胞反应实验中CT LA4Ig作用后的T淋巴细胞对同一供者的外周血单核细胞的刺激表现出特异性无反应 ,而对无关供者的外周血单核细胞的刺激能产生正常的应答反应。结论　CTLA4Ig在体外能抑制T细胞的增殖 。 展开更多

关键词 CTLA4IG 人T细胞 混合淋巴细胞反应

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人CTLA4单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：1

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作者 卢洋 钱卫珠 +2 位作者 王皓 吴孟超 郭亚军 《医学研究生学报》 CAS 2002年第2期98-101,共4页

目的 :制备人的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4 )的单克隆抗体。　方法 :利用蛋白纯化技术获得人CTLA4Ig蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS1融合 ,用ELISA法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并用Western印... 目的 :制备人的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4 )的单克隆抗体。　方法 :利用蛋白纯化技术获得人CTLA4Ig蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS1融合 ,用ELISA法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并用Western印迹和流式细胞检测仪鉴定所制备的单克隆抗体。　结果 :获得一个稳定的分泌抗人CTLA4的杂交瘤细胞株。该细胞克隆培养上清中所含的单抗能和经过PHA刺激后的人T细胞结合 ,但不能和经过PHA刺激后的小鼠T细胞结合。　结论 :利用重组人CTLA4Ig制备获得高特异性的抗人CTLA4单克隆抗体。 展开更多

关键词 CTLA4 单克隆抗体 T细胞免疫 制备 鉴定

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LTβR-Ig融合蛋白的真核表达及其体外生物学功能的研究 被引量：1

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作者 周倩 崔淑芳 +3 位作者 樊克兴 吴桐 钱卫珠 郭亚军 《同济大学学报（医学版）》 CAS 2007年第3期11-15,共5页

目的为了研究LTβR-Ig的生物学功能,构建重组的LTβR-Ig/pcDNA3.1(+)真核表达载体,在CHO细胞中表达,无血清扩大培养,并初步研究了融合蛋白LTβR-Ig的体外生物学活性。方法将鼠LTβR胞外段cDNA与人IgG1 Fc段cDNA共同克隆至真核表达载体pc... 目的为了研究LTβR-Ig的生物学功能,构建重组的LTβR-Ig/pcDNA3.1(+)真核表达载体,在CHO细胞中表达,无血清扩大培养,并初步研究了融合蛋白LTβR-Ig的体外生物学活性。方法将鼠LTβR胞外段cDNA与人IgG1 Fc段cDNA共同克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),转染CHO-K细胞表达,阳性克隆进行无血清培养,采用PtoteinA亲和层析的方法进行纯化;3[H]TdR参入法检测对细胞增殖的影响。结果经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序,结果表明克隆了正确序列的LTβR胞外段序列,成功构建了重组表达质粒LTβR-Ig/pcDNA3.1,并在CHO细胞中稳定表达了LTβR-Ig的融合蛋白,证明LTβR-Ig融合蛋白能抑制混合淋巴细胞反应。结论本研究建立了能稳定表达有生物活性的LTβR-Ig融合蛋白的真核表达系统,为今后研究LTβR在移植排斥中的作用机制,及开展基因重组药物进行疾病的生物治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 鼠LTβR 基因表达 CHO细胞株 LTβR—Ig融合蛋白

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一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

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作者 姚小鹏 王皓 +5 位作者 李强 钱卫珠 黄怡 白冲 董宇超 刘忠令 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期999-1002,共4页

目的 :研究一氧化氮 (NO)对肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖和凋亡的作用。方法 :通过非核素标记细胞增殖检测试剂盒、3 H- Td R掺入、形态学、流式细胞术等方法研究 NO与 PASMC增殖和凋亡的关系。 结果 :2 5～ 5 0 0μm ol/L的 NO供体 S... 目的 :研究一氧化氮 (NO)对肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖和凋亡的作用。方法 :通过非核素标记细胞增殖检测试剂盒、3 H- Td R掺入、形态学、流式细胞术等方法研究 NO与 PASMC增殖和凋亡的关系。 结果 :2 5～ 5 0 0μm ol/L的 NO供体 S-亚硝基乙酰青霉胺 (SNAP)呈剂量依赖性地减少 PASMC的细胞数和 DNA合成 ,5 0 0μm ol/L的 SNAP显著减少 S期和G2 /M期的细胞比例 ,增加 G0 /G1 期的细胞比例。 10 0～ 5 0 0μmol/L的 SNAP呈剂量依赖性地增加 PASMC的凋亡率。结论 :NO可抑制 PASMC增殖并促进其凋亡。早期给予 展开更多

关键词 肺动脉高压 一氧化氮 肺动脉 平滑肌 细胞增殖 细胞凋亡

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肝细胞癌变时神经节苷脂对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响

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作者 谢天培 钱宝华 +7 位作者 沈锋 施乐华 王皓 刘彦君 王华菁 钱卫珠 吴孟超 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期212-214,共3页

目的：研究肝细胞癌变时神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３的变化对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响及其在促进肝癌生长中所起的作用。方法：采用放射性核素标记配体受体结合法，及洗脱法测定转铁蛋白与其受体的结合以及转铁蛋白受体介导的内... 目的：研究肝细胞癌变时神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３的变化对转铁蛋白受体介导的内吞作用的影响及其在促进肝癌生长中所起的作用。方法：采用放射性核素标记配体受体结合法，及洗脱法测定转铁蛋白与其受体的结合以及转铁蛋白受体介导的内吞作用；用ＭＴＴ比色法测定细胞生长情况。结果：（１）ＧＭ３抑制肝癌细胞的生长，ＧＤ３则促进肝癌细胞的生长；（２）这种影响与转铁蛋白对细胞的作用直接相关；（３）此相关作用不是通过影响转铁蛋白与其受体的结合，而是通过影响转铁蛋白受体介导的内吞作用而实现的。结论：肝细胞癌变时神经节苷脂组成的变化能明显加快转铁蛋白受体介导的内吞作用，增加肝癌细胞对转铁蛋白的摄取，从而促进肝癌细胞的生长与增殖。 展开更多

关键词 肝肿瘤 肝细胞 癌变 神经节苷脂 TF 受体介导

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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的鉴定

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作者 宋水川 季军捷 +4 位作者 寇庚 钱卫珠 史菊鲜 王皓 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期460-461,共2页

关键词 重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 鉴定 Ⅱ型膜糖蛋白 半胱氨酸蛋白酶 细胞凋亡 克隆 原核表达

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