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PRRSV ZQ-GD-2010株的分离及ORF5和ORF7基因的序列分析 被引量：1
1
作者 闫明菲 曹宗喜 +4 位作者 贺丹丹 郭泗虎 张超轶 张民泽 张桂红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期96-98,176,共4页
为了给研制基因工程疫苗选取毒株奠定基础,研究采集广东肇庆某猪场疑似患高热症猪的病料,通过RT-PCR检测、病毒分离传代,证实分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒,命名为ZQ-GD-2010株,并对其ORF5和ORF7基因进行序列测定,绘制遗传进化树。... 为了给研制基因工程疫苗选取毒株奠定基础,研究采集广东肇庆某猪场疑似患高热症猪的病料,通过RT-PCR检测、病毒分离传代,证实分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒,命名为ZQ-GD-2010株,并对其ORF5和ORF7基因进行序列测定,绘制遗传进化树。结果表明:该毒株为美洲型,其ORF5和ORF7基因核苷酸与近年来我国分离到的美洲型毒株的相似性为96%～100%,而与欧洲型毒株LV株的相似性仅为58.9%～62.8%;其与2007—2009年国内分离株的遗传演化关系较近。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因 ORF7基因 序列分析
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H3亚型猪流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：6
2
作者 郭泗虎 王文华 +6 位作者 张亮权 齐海涛 曹楠 闫明菲 黄昌力 张超轶 张桂红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期124-127,共4页
为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,... 为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,与普通PCR进行比较。研究结果表明,标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,R2为0.994,CV在0.17%～1.41%之间,具有良好稳定性。除H3亚型SIV外,对H1、H4、H6、H9亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒和猪圆环病毒2型的检测均为阴性,与普通PCR相比更灵敏。该方法特异性好,准确率高,适于临床分离鉴别H3亚型SIV。 展开更多
关键词 猪流感 H3亚型 实时荧光定量PCR
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PRRSV XH-GD株Nsp2部分缺失感染性克隆的构建 被引量：4
3
作者 张民泽 谢杰雄 +7 位作者 郭泗虎 王衡 闫明菲 赵孟孟 黄震 粟硕 孙龙 张桂红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期10-14,共5页
为研究Nsp2编码区不同区域缺失对病毒体外复制的影响,本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了pOK-AaBCD、pOK-AbBCD、pOK-AcBCD等3种Nsp2编码区部分缺失的感染性重组质粒。将这3种感染性质粒分别... 为研究Nsp2编码区不同区域缺失对病毒体外复制的影响,本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了pOK-AaBCD、pOK-AbBCD、pOK-AcBCD等3种Nsp2编码区部分缺失的感染性重组质粒。将这3种感染性质粒分别转染Marc-145细胞进行不同Nsp2缺失株的病毒拯救,结果显示,只有在Nsp2编码区缺失105个氨基酸的缺失株XH-GD-Δ105能够在Marc-145细胞中增殖,表明这一缺失区域为病毒复制的非必需,而其他两种感染性质粒则未拯救出相应的缺失重组病毒。本研究为进一步研究Nsp2的基因序列的缺失与PRRSV毒力之间的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合症病毒 Nsp2部分缺失 感染性克隆
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猪繁殖与呼吸综合征病毒XH株感染性克隆的构建 被引量：4
4
作者 吴欣伟 熊永忠 +5 位作者 秦宏阳 曹宗喜 于俊勇 闫明菲 郭泗虎 张桂红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期97-100,共4页
为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,本实验采用RT-PCR方法将PRRSV-XH株的基因组序列分为6个片段进行扩增,连接至低拷贝载体pOKQ中,获得全长cDNA克隆。将该克隆体外转录,经脂质体转染Marc-145细胞,观察细胞病变。经RT... 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,本实验采用RT-PCR方法将PRRSV-XH株的基因组序列分为6个片段进行扩增,连接至低拷贝载体pOKQ中,获得全长cDNA克隆。将该克隆体外转录,经脂质体转染Marc-145细胞,观察细胞病变。经RT-PCR、间接免疫荧光和western blot等试验验证,表明构建了具有感染性的PRRSV-XH株全长cDNA克隆。本实验为在分子水平上研究PRRSV的复制、致病机理和基因产物的功能等方面提供技术支持,并为构建新型病毒载体和开发安全有效的活病毒疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 全长CDNA 拯救病毒
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2株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因序列分析 被引量：4
5
作者 张民泽 闫明菲 +5 位作者 谢杰雄 黄震 曹宗喜 吴欣伟 郭泗虎 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期49-52,共4页
利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320bp的核苷酸序列... 利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株全基因组序列进行了遗传进化分析,结果显示PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株与美洲型参考株的核苷酸序列相似性分别为88.1%～97.8%和88.4%～98.0%;与欧洲型参考株(Lelystad)的核苷酸序列相似性分别为60.6%和60.4%,且在2株毒的Nsp2蛋白上有30个aa的缺失,表明PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株均为美洲型分离株的缺失变异株。 展开更多
关键词 PRRSV 基因组 序列测定 分析
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检测猪戊型肝炎病毒的荧光定量PCR方法的建立 被引量：4
6
作者 张亮权 欧阳昀 +5 位作者 刘志刚 曹宗喜 闫明菲 王文华 郭泗虎 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期16-18,共3页
根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析。结... 根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析。结果表明,建立标准曲线的相关系数为0.998,斜率为-3.039,Ct值变异系数(CV)在0.17%～1.41%之间,有良好的稳定性。同时在检测猪群常见病中显示出很好的特异性,并且比RT-nPCR更灵敏,适合于swHEV的检测。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 荧光定量PCR RT-nPCR
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猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3
7
作者 黄震 魏春娅 +5 位作者 闫明菲 田悦茹 张民泽 谢杰雄 孙龙 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期89-92,共4页
根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBRGreenⅠ实时定量PC... 根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测方法,同时与商品化荧光定量PCR试剂盒进行比对分析。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,能很好的区分美洲型猪繁殖与呼吸道综合征病毒和其他病毒。使用该方法对14份临床样品进行检测,阳性率85.7%,与商品化试剂盒符合率100%。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 实时荧光定量PCR Nsp7
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两株猪繁殖与呼吸征病毒的分离鉴定及遗传变异分析 被引量：2
8
作者 张超轶 吴欣伟 +7 位作者 闫明菲 张亮权 郭泗虎 黄昌力 黄震 张民泽 赵付荣 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期82-86,共5页
从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进... 从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和分析,结果表明,PRRSV ZH-GD株和ZS-GD株的核苷酸序列与欧洲型代表株LV株间的相似性相对较远,与美洲株经典毒株VR-2332间的相似性分别为88.6%和88.1%,与中国经典美洲毒株CH-1a间的相似性分别为94.4%和93.0%。在Nsp2上有30个氨基酸的缺失,与JXA1、XH-GD等高致病性变异株的Nsp2缺失位置一致。分离的两株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。 展开更多
关键词 PRRSV 分离鉴定 序列测定和分析
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一株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定 被引量：1
9
作者 郭泗虎 曹宗喜 +5 位作者 李海琴 闫明菲 张超轶 张民泽 赵付荣 张桂红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期93-95,F0003,共4页
为了对从湖南某发病猪场送检的血清中分离到的1株蓝耳病病毒进行鉴定,试验通过接种Marc-145细胞传代后产生明显而稳定的细胞病变,又经过RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)检测成功验证;通过对分离株的ORF5基因的测序结果表明,ORF5核苷酸序列与... 为了对从湖南某发病猪场送检的血清中分离到的1株蓝耳病病毒进行鉴定,试验通过接种Marc-145细胞传代后产生明显而稳定的细胞病变,又经过RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)检测成功验证;通过对分离株的ORF5基因的测序结果表明,ORF5核苷酸序列与欧洲型代表株LV株及北美经典毒株VR-2332、国内经典美洲株CH-1a的相似性分别为64.5%、87.4%、93.0%,说明其属于美洲型;而将NSP2高变区的测序结果与JXA1等高致病性变异株的Nsp2比较后发现,都在同一位置不连续缺失30个氨基酸。说明成功分离到1株北美型变异株,最终将其命名为PRRSV CZ-HN株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 鉴定
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反向遗传操作技术在猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗研发中的应用
10
作者 郭泗虎 曹宗喜 +4 位作者 李海琴 闫明菲 亓文宝 焦培荣 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期54-56,共3页
猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度传染性疾病。该病自1987年首次发现以来，已遍及世界各个养猪国家，它所引发的母猪流产和仔猪的呼吸障碍给养猪业造成了灾难性的打击。特别是2006年以... 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度传染性疾病。该病自1987年首次发现以来，已遍及世界各个养猪国家，它所引发的母猪流产和仔猪的呼吸障碍给养猪业造成了灾难性的打击。特别是2006年以来，变异株PRRSV的出现则对我国养猪业的发展产生了巨大的影响。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 反向遗传操作技术 病毒疫苗 应用 研发 传染性疾病 PRRSV 养猪业
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