采用Cre/loxP条件性基因敲除技术构建肠上皮敲除VDR(Vitamin D receptor)基因小鼠.利用Casp9方法构建的VDR^(flox/flox)小鼠与Villin-Cre转基因小鼠进行繁殖杂交获得VDR肠上皮特异敲除小鼠,其基因型鉴定为VDR^(flox/flox)Villin-Cre^+....采用Cre/loxP条件性基因敲除技术构建肠上皮敲除VDR(Vitamin D receptor)基因小鼠.利用Casp9方法构建的VDR^(flox/flox)小鼠与Villin-Cre转基因小鼠进行繁殖杂交获得VDR肠上皮特异敲除小鼠,其基因型鉴定为VDR^(flox/flox)Villin-Cre^+.通过建立小鼠TNBS诱导的炎症性肠病模型,比较肠上皮特异敲除VDR基因的小鼠与野生型小鼠的发病程度,结果显示VDR基因条件敲除小鼠,体重下降更加明显,肠损伤和病理评分更加严重,说明了肠上皮中的VDR缺失促进肠炎发生,预示其对肠上皮具有保护作用.本研究为进一步探讨肠上皮VDR的表达对炎症性肠病的作用机制提供坚实基础和强有力的研究平台.展开更多
目的:确定维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)的核定位信号并验证其功能。方法:通过软件分析及文献调研预测VDR核定位信号,利用点突变试剂盒构建了VDR一系列点突变体,通过蛋白质免疫印迹检测VDR在胞质和胞核里的分布,并结合免疫荧光...目的:确定维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)的核定位信号并验证其功能。方法:通过软件分析及文献调研预测VDR核定位信号,利用点突变试剂盒构建了VDR一系列点突变体,通过蛋白质免疫印迹检测VDR在胞质和胞核里的分布,并结合免疫荧光观察确定其预测突变点对VDR入核的影响,最后采用实时荧光定量链式聚合酶反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测VDR下游基因的表达,以判断VDR核定位突变体的活性。结果:确定VDR核定位信号序列为49RRSMKRKALFLT61,构建的VDR一系列核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)点突变体在细胞内的表达主要分布在胞质里,维生素D(vitamin D,VD)既不能诱导这些点突变体入核,也不能促进VD下游基因表达。结论:VDR核定位确定信号能有效控制VDR进入细胞核发挥转录因子作用,进而影响其下游基因的表达,为探索VD及VDR相关疾病的治疗提供新平台和思路。展开更多
文摘采用Cre/loxP条件性基因敲除技术构建肠上皮敲除VDR(Vitamin D receptor)基因小鼠.利用Casp9方法构建的VDR^(flox/flox)小鼠与Villin-Cre转基因小鼠进行繁殖杂交获得VDR肠上皮特异敲除小鼠,其基因型鉴定为VDR^(flox/flox)Villin-Cre^+.通过建立小鼠TNBS诱导的炎症性肠病模型,比较肠上皮特异敲除VDR基因的小鼠与野生型小鼠的发病程度,结果显示VDR基因条件敲除小鼠,体重下降更加明显,肠损伤和病理评分更加严重,说明了肠上皮中的VDR缺失促进肠炎发生,预示其对肠上皮具有保护作用.本研究为进一步探讨肠上皮VDR的表达对炎症性肠病的作用机制提供坚实基础和强有力的研究平台.
