为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细...为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细胞株,命名为4G 5。抗体亚类鉴定重链类型为IgG 1,轻链类型为κ。该M A b细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶256和1∶1 280。IFA结果显示,MAb4G5能够识别CH-1R、JXA1-R、HP-PRRSVHuN4株及其疫苗株HuN4-F112,而不识别RespPRRS M LV病毒株。Western blot结果显示,4G5与HP-PRRSVHuN4株及原核表达的GP3蛋白均可以反应,表明其针对的抗原表位为线性表位,中和试验结果显示该M A b无中和活性。通过截短表达GP3蛋白鉴定该M A b抗原表位识别序列为74W CRIGHD RCS83。本研究获得的M A b为进一步研究HP-PRRSV GP3蛋白的结构及功能奠定了基础。展开更多
基金国家863计划(2011A A 10A 208)中央科研院所公益性基础科研业务费项目(ZBK J201218)
文摘为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细胞株,命名为4G 5。抗体亚类鉴定重链类型为IgG 1,轻链类型为κ。该M A b细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶256和1∶1 280。IFA结果显示,MAb4G5能够识别CH-1R、JXA1-R、HP-PRRSVHuN4株及其疫苗株HuN4-F112,而不识别RespPRRS M LV病毒株。Western blot结果显示,4G5与HP-PRRSVHuN4株及原核表达的GP3蛋白均可以反应,表明其针对的抗原表位为线性表位,中和试验结果显示该M A b无中和活性。通过截短表达GP3蛋白鉴定该M A b抗原表位识别序列为74W CRIGHD RCS83。本研究获得的M A b为进一步研究HP-PRRSV GP3蛋白的结构及功能奠定了基础。
文摘为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特点,本研究在PRRSV流行病学调查中分离到一株PRRSV,该分离株在高致病性PRRSV(HP-PRRSV)NSP2区1 aa+29 aa缺失的基础上,突变为49 aa+29 aa的缺失株,将其命名为Henan-A14(NCBI序列号:KJ819936)。此外,该分离株在MARC-145细胞中的复制能力减弱,即其细胞嗜性有所改变。血清中和试验结果显示5份HP-PRRSV疫苗抗血清均不能中和该分离株,推测其抗原发生了较大变异。为鉴定该缺失是否影响病毒的复制,本研究以HP-PRRSV p Hu N4-F112株的感染性克隆为骨架,拯救出一株在NSP2区相应位置连续缺失48 aa的重组病毒,而该重组病毒在MARC-145细胞中的复制及血清中和试验结果表明,NSP2基因区48 aa缺失既不影响PRRSV的复制效率,也不影响病毒对HP-PRRSV制备的阳性血清中和效率。本研究的结果证明Henan-A14分离株在MARC-145细胞中复制能力的降低,以及病毒抗原中和表位与NSP2中相关的氨基酸缺失无直接关系。该分离株的鉴定为进一步研究HP-PRRSV的变异具有重要的参考价值。
