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单纯疱疹病毒疫苗研究进展 被引量:2
1
作者 陈斯勇 吴克 《微生物学免疫学进展》 2003年第3期79-82,共4页
人类单纯疱疹病毒 (Herpessimplexvirus,HSV)感染非常普遍 ,除原发感染外 ,还有潜伏感染和复发性感染。因此 ,HSV疫苗的研制目的也不同于其他的疫苗。现已研制出多种不同的HSV疫苗。本文将讨论这些疫苗的研究进展、特点和存在的问题。
关键词 单纯疱疹病毒 疫苗 研究
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我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究 被引量:1
2
作者 郭瑜 刘晓燕 +3 位作者 陈斯勇 伊瑶 陈向伟 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期436-439,共4页
收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差... 收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P>0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBV DNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P<0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBV DNA含量无显著性差异。 展开更多
关键词 嗜肝DNA病毒科 乙型肝炎病毒 基因型 BCP T1762/A1764 前C区基因 突变 HBeAg
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鼻腔感染重组百日咳杆菌诱导的破伤风毒素C片段特异性抗体
3
作者 陈斯勇 《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》 2003年第2期81-81,共1页
关键词 鼻腔感染 重组百日咳杆菌 诱导 破伤风毒素C片段特异性抗体
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程序死亡蛋白1基因的克隆及原核表达 被引量:1
4
作者 陈斯勇 关坤萍 +5 位作者 郭敏卓 伊瑶 贾志远 余陶 郭瑜 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期33-35,共3页
目的克隆人程序死亡蛋白(PD-1)基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒,在大肠埃希菌中进行表达。方法用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的eDNA,构建PD-1基因的原核表达质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3... 目的克隆人程序死亡蛋白(PD-1)基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒,在大肠埃希菌中进行表达。方法用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的eDNA,构建PD-1基因的原核表达质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达并纯化。用SDS-PAGE、DNA测序、氨基酸测序等方法对表达蛋白进行鉴定。结果克隆到PD-1基因编码区全长序列eDNA,经DNA测序与已报道的序列同源性达99.8%。构建得到PD-1的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达,纯化获得纯度较高的PD-1蛋白。氨基酸测序证明表达蛋白的正确性。结论成功克隆人PD-1基因,在大肠埃希菌中获得表达,得到纯化的PD-1蛋白,为进一步研究PD-1蛋白的功能及应用打下基础。 展开更多
关键词 程序死亡蛋白1 逆转录聚合酶链反应 基因 克隆 分子
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肝病毒表面抗原“a”决定簇病毒样颗粒的构建和鉴定 被引量:1
5
作者 陈斯勇 郭敏卓 +6 位作者 邱丰 费永亮 伊瑶 郭瑜 贾志远 余陶 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期30-32,共3页
目的 构建一个以乙肝核心抗原为骨架的病毒样颗粒,乙肝表面抗原"a"决定簇呈现在该病毒样颗粒的表面.方法 乙肝adr血清型的HBsAg蛋白"a"抗原决定簇(aa139~148,CSKPTDGNCT)插入到HBcAg的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间,密码子... 目的 构建一个以乙肝核心抗原为骨架的病毒样颗粒,乙肝表面抗原"a"决定簇呈现在该病毒样颗粒的表面.方法 乙肝adr血清型的HBsAg蛋白"a"抗原决定簇(aa139~148,CSKPTDGNCT)插入到HBcAg的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间,密码子优化之后基因合成,酶切后连接到表达载体上,在大肠埃希菌中进行表达,纯化后对蛋白进行电镜观察、ELISA检测抗原性、免疫兔后检测免疫原性.结果 构建得到预期的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达,纯化后电镜观察为病毒样颗粒,ELISA检测证实具有良好的抗原性和免疫原性.结论 成功获得预期的带乙肝表面抗原"a"决定簇的病毒样颗粒,为其应用奠定基础. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 表位 病毒粒子
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透皮免疫佐剂LTB及LTK63的表达与鉴定 被引量:1
6
作者 陈斯勇 伊瑶 +1 位作者 郭瑜 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期8-11,共4页
目的研究新型的透皮免疫佐剂。方法从大肠埃希菌E.coliH10407中扩增出大肠埃希菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)全长基因,并用基因工程的方法表达出了无毒性的A亚单位蛋白LTKA及B亚单位蛋白LTB。将表达产物纯化后用SDS-PAGE... 目的研究新型的透皮免疫佐剂。方法从大肠埃希菌E.coliH10407中扩增出大肠埃希菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)全长基因,并用基因工程的方法表达出了无毒性的A亚单位蛋白LTKA及B亚单位蛋白LTB。将表达产物纯化后用SDS-PAGE、GM1-ELISA等方法进行鉴定。结果表达的LTB亚单位仍具有和神经节苷脂GM1特异结合的生物学活性,LTK63已经不具有毒素活性。结论LTB和LTK63有希望成为候选的透皮免疫佐剂。 展开更多
关键词 免疫 黏膜 免疫 皮肤 佐剂 免疫
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慢性HCV感染者外周血中髓样和浆样树突状细胞频数和表型研究
7
作者 陈斯勇 梁华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期448-451,共4页
目的探讨慢性HCV感染者外周血中髓样树突状细胞(mDC)和浆样树突状细胞(pDC)频数和表型的变化,并分析其与丙型肝炎临床指标间的相关性。方法采用流式细胞术检测HCV感染者及健康对照外周血中mDC和pDC的频数及细胞表面共刺激分子HLA-D... 目的探讨慢性HCV感染者外周血中髓样树突状细胞(mDC)和浆样树突状细胞(pDC)频数和表型的变化,并分析其与丙型肝炎临床指标间的相关性。方法采用流式细胞术检测HCV感染者及健康对照外周血中mDC和pDC的频数及细胞表面共刺激分子HLA-DR、CD83、CD86、CD40和共抑制分子PD-L1的表达水平,并分析DC频数与HCV感染者血浆病毒载量、谷丙转氨酶(ALT)的相关性。结果与健康对照组相比,HCV感染者外周血中mDC和pDC的频数明显降低(患者组分别为0.37±0.19和0.19±0.12,对照组为0.51±0.18和0.29±0.13,P〈0.05),且mDC频数与血浆HCV载量和血清AIJT水平呈负相关(r=-0.5878,P〈0.0001;r=-0.4628,P=0.003)。患者mDC和pDC表面共刺激分子HLA-DR、CD83、CD86、CD40以及共抑制分子PD-L1的表达均有不同程度升高,差别有统计学意义(共刺激分子P〈0.01,共抑制分子P〈0.05或0.01)。结论慢性HCV感染者外周血mDC和pDC频数下降,但DC表面共刺激分子和共抑制分子的表达均明显升高。该结果提示mDC数量的减少可能与HCV的慢性持续性感染有关。 展开更多
关键词 丙型肝炎 髓样树突状细胞 浆样树突状细胞 流式细胞术
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丙型肝炎病毒的病毒学检测方法 被引量:10
8
作者 王晓艳 伊瑶 +2 位作者 陈斯勇 沈丽萍 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期158-161,共4页
丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染引起的丙型病毒性肝炎呈全球分布,世界人口的3%即大约1.7亿人为丙肝感染者,且发展中国家高于发达国家。1992-1995年全国病毒性肝炎血清流行病学调查显示,我国人群丙肝感染率为3.2%。... 丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染引起的丙型病毒性肝炎呈全球分布,世界人口的3%即大约1.7亿人为丙肝感染者,且发展中国家高于发达国家。1992-1995年全国病毒性肝炎血清流行病学调查显示,我国人群丙肝感染率为3.2%。HCV感染自然转阴率低,极易慢性化,治疗效果差,且与肝硬化肝癌的发生及发展密切相关。丙型病毒性肝炎不仅严重危害人民健康,而且给社会带来了巨大的经济损失。因此,丙肝感染仍是我国重要的公共卫生问题之一。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 病毒学检测 丙型病毒性肝炎 血清流行病学调查 公共卫生问题 肝感染者 丙肝感染 发展中国家
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山西省乙型肝炎病毒基因型别的初步研究 被引量:6
9
作者 郭瑜 刘晓燕 +4 位作者 胡惠梅 陈斯勇 伊瑶 陈向伟 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期361-363,共3页
目的初步确定流行于山西地区的乙肝病毒的基因型的基本情况。方法采集山西地区乙型肝炎表面抗原阳性的血清,利用PCR扩增得到HBV的S基因和C基因;用MEGA3软件对其进行核苷酸序列分析,构建系统发生树,分析基因型。结果约93%样本的HBVS基因... 目的初步确定流行于山西地区的乙肝病毒的基因型的基本情况。方法采集山西地区乙型肝炎表面抗原阳性的血清,利用PCR扩增得到HBV的S基因和C基因;用MEGA3软件对其进行核苷酸序列分析,构建系统发生树,分析基因型。结果约93%样本的HBVS基因和C基因序列均位于HBV系统发生树的基因型C,近7%的样本其S基因和C基因序列位于系统发生树的基因型B。结论流行于山西地区的乙肝病毒多数为基因型C,少数为基因型B,未发现基因重组现象。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 基因型
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抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:3
10
作者 伊瑶 郭敏卓 +5 位作者 沈心亮 余陶 贾志远 毕胜利 李秀玲 陈斯勇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期62-64,共3页
目的制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体。方法人工合成SP55和SP70(分别包含VP1的第163~177,208—222位氨基酸)两段VP1的多肽,分别免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验... 目的制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体。方法人工合成SP55和SP70(分别包含VP1的第163~177,208—222位氨基酸)两段VP1的多肽,分别免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价。用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性。结果得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,2株单抗的中和效价分别为1:8和1:16。结论成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体,为其下一步应用打下基础。 展开更多
关键词 肠道病毒属 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定
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乙型肝炎病毒表面抗原基因点突变对HBsAg抗原性的影响 被引量:1
11
作者 郭敏卓 伊瑶 +3 位作者 陈斯勇 白玉 贾志远 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期48-50,共3页
目的研究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)常见基因点突变对HBsAg抗原性的影响,了解我国目前常用的HBsAg检测试剂对HBVS基因突变株的检测灵敏性,减少漏检,有效控制乙肝病毒(HBV)感染的传播。方法构建HBsAg重组野毒株和重组变异株表... 目的研究乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)常见基因点突变对HBsAg抗原性的影响,了解我国目前常用的HBsAg检测试剂对HBVS基因突变株的检测灵敏性,减少漏检,有效控制乙肝病毒(HBV)感染的传播。方法构建HBsAg重组野毒株和重组变异株表达质粒,分别将重组野毒株HBsAg表达质粒pSS1adw2及pSS1adr和重组变异株HBsAg表达质粒pSS1adw2-145Arg、pSS1ad-126Ser和pSS1adr-126Asn转染COS-7细胞,进行瞬时转染。采用市售HBsAg ELISA检测试剂盒对细胞上清进行抗原性检测。结果野毒株HBsAg和两种126位变异株HBsAg具有较好的抗原性;145位点突变后导致HBsAg的抗原性下降。结论推测是由于145位点变异影响了“a”抗原决定簇的空间结构,从而降低了其与抗-HBs的结合能力。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎表面抗原 乙型 变异(遗传学) 抗原
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两种嵌合乙型肝炎病毒preSl中和表位的乙肝核心病毒样颗粒的制备与抗原性分析 被引量:1
12
作者 苏秋东 郭敏卓 +5 位作者 伊瑶 陈斯勇 贾志远 卢学新 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期336-339,共4页
目的构建嵌合preSl2147位氨基酸(aa)、以全长乙肝病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preSlaa37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3,并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preSl中和表位aa2147和aa37-45分别插... 目的构建嵌合preSl2147位氨基酸(aa)、以全长乙肝病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preSlaa37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3,并对比其抗原性。方法将HBVadr血清型preSl中和表位aa2147和aa37-45分别插入到全长HBc(aa1—183)和截断HBc(8a1—144)的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间,密码子优化之后全基因合成,目的片段经双酶切(NdeI和XhoI)回收后连接到同样处理的pET43.1a载体上,在大肠埃希菌E.coliBL21(DE3)中表达,精细纯化后通过电镜观察蛋白形态、ELISA以及WesternBlott检测其抗原性。结果成功构建表达质粒H2和H3,并在BL21(DE3)中高效表达和自发组装成病毒样颗粒。纯化后电镜观察H2和H3形态为二十面体立体对称样病毒样颗粒,H2为实心颗粒,直径为(31.61±1.27)nm,H3为空心颗粒,直径为(28.46±1.16)nm。统计分析可得H2直径要比H3直径大(P〈0.01)。ELISA和WesternBlott检测结果证实其插入表位preSl以及载体蛋白HBc的抗原性。结论成功获得两种嵌合HBVpreSl中和表位的病毒样颗粒,为其在疫苗研究中的应用探索奠定基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 表位 病毒核心蛋白质类 病毒样颗粒
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PD—L1重组蛋白的表达及生物学活性分析 被引量:1
13
作者 沈立萍 陈斯勇 +4 位作者 边涛 伊瑶 王锋 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期5-7,共3页
目的构建细胞程序死亡因子1配体1(PD—L1)的重组表达质粒,在原核系统中表达并分析其生物学活性。方法经密码子优化后合成PD—L1全基因序列,构建硫氧还原蛋白.pET43b/(PD.L1)重组表达质粒并在大肠埃希菌中表达;用ELISA验证表... 目的构建细胞程序死亡因子1配体1(PD—L1)的重组表达质粒,在原核系统中表达并分析其生物学活性。方法经密码子优化后合成PD—L1全基因序列,构建硫氧还原蛋白.pET43b/(PD.L1)重组表达质粒并在大肠埃希菌中表达;用ELISA验证表达产物与其受体结合的生物学活性。结果正确构建了PD—L1重组表达质粒及其大肠埃菌基因工程菌,能稳定、高效地表达目的蛋白,相对分子质量为47×10^3,目的蛋白能与其受体特异性结合。结论成功获得有生物学活性的PD-L1重组蛋白,为研制单克隆抗体及其与病毒感染慢性化的关系提供基础条件。 展开更多
关键词 密码子 细胞死亡 重组蛋白质类 硫氧还蛋白
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重组风疹病毒外膜蛋白E1的表达及其在血清学中的初步应用 被引量:1
14
作者 伊瑶 郭敏卓 +3 位作者 余陶 许文波 杨进业 陈斯勇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期382-384,共3页
目的在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法。方法通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的... 目的在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法。方法通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的方法检测世界卫生组织(WHO)的风疹检测质控血清以及来自广西桂林的未知血清样本。结果采用WHO用于风疹检测的质控血清对所表达的重组抗原的抗原性进行鉴定,通过试验,特异性、敏感性均为100%。用表达的抗原对来自我国广西的200份未知血清样本进行风疹病毒外膜蛋白抗体的检测,阳性率为93%,与文献报道的我国其他地区风疹病毒抗体阳性率基本一致。结论通过实验我们表达了具有良好抗原性的风疹病毒外膜蛋白E1,为进一步研究风疹病毒感染的实验室诊断技术奠定了基础。 展开更多
关键词 风疹病毒 基因表达 酶联免疫吸附测定 流行病学
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新疆地区居民乙肝病毒基因型的初步研究 被引量:2
15
作者 费永亮 岳城 +4 位作者 李蕾 伊瑶 陈斯勇 贾志远 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期346-348,共3页
目的初步确定新疆地区乙肝患者乙肝病毒基因型的基本情况。方法对在新疆地区采集的2000余份血清中检测得到200份HBsAg阳性的血清,利用巢氏PCR法扩增其S基因并测序,用MEGA3软件将测序结果与GenBank中的HBV标准序列进行分析,构建并绘... 目的初步确定新疆地区乙肝患者乙肝病毒基因型的基本情况。方法对在新疆地区采集的2000余份血清中检测得到200份HBsAg阳性的血清,利用巢氏PCR法扩增其S基因并测序,用MEGA3软件将测序结果与GenBank中的HBV标准序列进行分析,构建并绘制系统发生树,分析基因型。结果在200份样本中,127例(63.5%)成功检出基因型,其中B基因型10例(7.8%),C基因型58例(45.7%),D基因型59例(46.5%)。结论新疆地区HBV基因型以C、D型为主,少量为B型。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 基因型
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原核表达的PD-1与PD-L1融合蛋白相互作用分析
16
作者 沈立萍 许龙 +4 位作者 李建东 陈斯勇 郭瑜 邱丰 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期424-426,共3页
目的分析经原核表达纯化的PD-1和PD-L1融合蛋白分子间相互作用力及其生物学活性。方法PD-1蛋白经过预浓缩后,用氨耦联的原理固定于CM5芯片表面,用HBS-EP缓冲液梯度稀释PD-L1蛋白,以20μl/min流速注射到耦联PD-1的传感芯片通道上,结... 目的分析经原核表达纯化的PD-1和PD-L1融合蛋白分子间相互作用力及其生物学活性。方法PD-1蛋白经过预浓缩后,用氨耦联的原理固定于CM5芯片表面,用HBS-EP缓冲液梯度稀释PD-L1蛋白,以20μl/min流速注射到耦联PD-1的传感芯片通道上,结合3min,解离15min;观察两者结合情况并用BIA Evaluation软件4进行分析。结果PD-1在缓冲液的pH值为4.5、浓度为40μg/ml的状态下能稳定耦联于CM5芯片表面,Ru值约为3300;稀释度为200mmol/ml的PD-Ll与PD-1能较好地结合,RU值为150,亲和常数为KD=3.5×10^-6。结论经原核表达纯化的PD-1与PD-L1融合蛋白具有较强的特异性亲和力及良好的生物学活性,为下一步研究的开展打下基础。 展开更多
关键词 病毒融合蛋白质类 膜蛋白质类 受体 免疫 基因表达调控 病毒 生物学鉴定法
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乙酰胆碱酯酶抑制剂对乙型肝炎细胞凋亡的抑制作用
17
作者 黄晶 伊瑶 +2 位作者 毕胜利 陈斯勇 王传跃 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期458-460,共3页
目的为了抑制乙型肝炎时大量细胞凋亡,以内毒素诱导Vero细胞损伤建立凋亡模型,探讨乙酰胆碱酯酶抑制剂他克林、多奈哌齐对内毒素诱导Vero细胞凋亡的作用。方法用光学显微镜观察细胞形态学改变,CCK-8检测分析细胞损伤状况,DNA Ladde... 目的为了抑制乙型肝炎时大量细胞凋亡,以内毒素诱导Vero细胞损伤建立凋亡模型,探讨乙酰胆碱酯酶抑制剂他克林、多奈哌齐对内毒素诱导Vero细胞凋亡的作用。方法用光学显微镜观察细胞形态学改变,CCK-8检测分析细胞损伤状况,DNA Ladder检测细胞凋亡DNA断裂特征性条带。结果光学显微镜观察、CCK-8检测和DNA Ladder检测显示内毒素400、500μg/ml能够诱导Vero细胞凋亡;他克林和多奈哌齐与内毒素同时处理Vero细胞后,他克林10μmol/L能够抑制由内毒素500μg/ml诱导的Vero细胞凋亡,而多奈哌齐则无此抑制作用。结论内毒素能够诱导Vero细胞凋亡,用于建立Vero细胞凋亡模型;他克林对内毒素诱导的Vero细胞凋亡具有一定的抑制作用,多奈哌齐则无此作用。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 细胞凋亡 内毒素 他克林 多奈哌齐
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鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制和生物学活性鉴定
18
作者 沈立萍 陈斯勇 +3 位作者 郭瑜 张爽 边涛 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期380-382,共3页
目的 研制鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体,并对其生物学活性进行鉴定.方法 以前期原核表达的人硫氧还原蛋白-(PD-L1)融合蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,Western-Blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性杂交... 目的 研制鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体,并对其生物学活性进行鉴定.方法 以前期原核表达的人硫氧还原蛋白-(PD-L1)融合蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,Western-Blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞,竞争抑制法ELISA实验鉴定抗体的特异性亲和力,小鼠腹水法作大量抗体制备.结果 获得4株能够稳定分泌特异性抗PD-L1抗体的杂交瘤细胞,经验证所分泌的抗体具有较强的特异性亲和力,经过大量抗体制备和纯化获得效价大于1∶32000的纯化抗体;同时获得1株能稳定分泌抗硫氧还原蛋白抗体的杂交瘤.结论 成功制备了鼠抗人PD-L1单克隆抗体,为下一步应用研究奠定了基础. 展开更多
关键词 硫氧还原蛋白 抗体 单克隆 抗体亲和力 受体 细胞表面
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丙型肝炎病毒亚单位融合蛋白的表达及免疫原性测定
19
作者 邱丰 贾志远 +7 位作者 郭敏卓 陈斯勇 伊瑶 沈立萍 余陶 费永亮 郭瑜 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期113-115,共3页
目的获得高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白并评价其免疫原性。方法利用原核表达系统,以pET—11d作为载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达获得融合蛋白,之后采用DEAE阴离子交换和镍离子柱亲和层析进行纯化。通过Western Blo... 目的获得高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白并评价其免疫原性。方法利用原核表达系统,以pET—11d作为载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达获得融合蛋白,之后采用DEAE阴离子交换和镍离子柱亲和层析进行纯化。通过Western Blot验证融合蛋白的抗原活性。同时以该蛋白免疫实验动物后测定血清中的抗体滴度。结果成功获得很高纯度的丙型肝炎亚单位融合蛋白,EIA显示融合蛋白能够诱生出高滴度的抗体。结论原核表达系统表达的丙型肝炎病毒亚单位融合蛋白具有较强的免疫原性,为丙型肝炎病毒治疗性和预防性疫苗的研制提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 肝炎病毒 病毒融合蛋白质类 疫苗 免疫测定
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新疆居民HBV基因型的分布及其与临床表现关系的初步研究
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作者 李蕾 费永亮 +2 位作者 伊瑶 陈斯勇 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期257-259,共3页
目的 了解新疆地区乙肝患者HBV基因型的分布及其与临床表现的关系.方法 从2000余份血清中筛选出HBsAg阳性血清200份.利用巢式PCR法扩增血清中HBV DNA S基因进行测序并分型;统计分析基因型分布及与临床表现的关系.结果 新疆HBV有B、C、D... 目的 了解新疆地区乙肝患者HBV基因型的分布及其与临床表现的关系.方法 从2000余份血清中筛选出HBsAg阳性血清200份.利用巢式PCR法扩增血清中HBV DNA S基因进行测序并分型;统计分析基因型分布及与临床表现的关系.结果 新疆HBV有B、C、D三个基因型,其中B基因型10例(7.8%),C基因型58例(45.7%),D基因型59例(46.5%).C基因型中汉族51例(87.9%),D型中汉族27例(45.7%),维吾尔族24例(40.7%).结论 新疆地区HBV基因型以C、D型为主,少量为B型.C型以汉族为主,D型中汉族和维吾尔族占多数.C型与更严重的疾病及转归有关. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 基因型 人种群 临床医学
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