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lncRNA锌指蛋白反义链1对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的作用 被引量:2
1
作者 王锦坡 黄月红 +2 位作者 陈运新 陈治新 陈丰霖 《福建医科大学学报》 2023年第2期96-102,共7页
目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)在肝纤维化(LF)中的作用。方法 四氯化碳(CCl4)诱导小鼠LF模型。苏木精-伊红染色(H-E染色)和天狼猩红染色观察肝脏组织学改变,ELISA检测肝组织羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组织化学(I... 目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)在肝纤维化(LF)中的作用。方法 四氯化碳(CCl4)诱导小鼠LF模型。苏木精-伊红染色(H-E染色)和天狼猩红染色观察肝脏组织学改变,ELISA检测肝组织羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组织化学(IHC)检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原α1(Col1α1)的表达,荧光定量PCR检测肝组织ZFAS1的表达水平,通过siRNA技术在NCTC1469细胞中沉默ZFAS1表达并模拟小鼠肝细胞的纤维化模型,免疫印迹法(Western-blot)检测细胞Col1α1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达变化。结果 与对照组比较,CCl4诱导模型组小鼠肝组织内炎性细胞浸润明显,胶原纤维沉积明显增多,肝星状细胞(HSCs)活化增多(P<0.05),肝组织胶原分泌及其代谢产物HYP表达上调,肝组织内lncRNA ZFAS1表达明显升高(P<0.05)。与AML12细胞比较,NCTC1469细胞高表达内源性lncRNA ZFAS1(P<0.05);在NCTC1469细胞转染3种siZFAS1片段均可有效抑制ZFAS1表达(P<0.05),以siRNA-539下降最明显。采用TGF-β1处理NCTC1469细胞构建LF模型,Western-blot结果显示,与对照组比较,模型组的Col1α1、TGF-β1和MMP-2表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,ZFAS1干扰+模型组的Col1α1、TGF-β1和MMP-2表达明显下降(P<0.05)。结论 干扰lncRNA ZFAS1对LF可能具有治疗作用。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 锌指蛋白反义链1 肝纤维化 表达分析
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PDGF-BB对肝星状细胞表达MMP-2及TIMP-1的影响 被引量:6
2
作者 陈治新 陈运新 +3 位作者 翁山耕 黄月红 张莉娟 王小众 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2003年第1期46-48,共3页
目的 探讨血小板衍生生长因子 -BB(PDGF -BB)对体外培养大鼠肝星状细胞 (HSC)表达基质金属蛋白酶 -2 (MMP-2 )及金属蛋白酶组织抑制因子 -1(TIMP -1)的影响。方法 原位灌流分离HSC ,体外培养激活 ,用PDGF -BB干预 ,采用半定量RT -PCR... 目的 探讨血小板衍生生长因子 -BB(PDGF -BB)对体外培养大鼠肝星状细胞 (HSC)表达基质金属蛋白酶 -2 (MMP-2 )及金属蛋白酶组织抑制因子 -1(TIMP -1)的影响。方法 原位灌流分离HSC ,体外培养激活 ,用PDGF -BB干预 ,采用半定量RT -PCR方法检测各组MMP -2、TIMP -1mRNA的表达情况。结果 PDGF -BB干预组TIMP -1mRNA的表达较对照组明显增强(P <0 0 1) ,且随着干预时间的延长其表达逐渐增强 (P <0 0 1) ;而PDGF BB干预组MMP -2表达与对照组无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 PDGF -BB促进肝纤维化与其引起HSC表达TIMP -1增强有关。 展开更多
关键词 血小板衍生生长因子 基质金属蛋白酶-2 金属蛋白酶组织抑制因子 肝纤维化 肝星状细胞
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IL-10对实验性肝纤维化大鼠转化生长因子β-表达的影响 被引量:9
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作者 陈治新 张莉娟 +4 位作者 陈运新 黄月红 李丹 林明曦 王小众 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2002年第2期92-94,共3页
目的:探讨TGFβ_1在实验性肝纤维化过程中的表达状况及IL-10对肝纤维化大鼠转化生长因子β_1(TGFβ_1)表达的影响。方法:建立大鼠肝纤维化模型并行IL-10干预实验。从正常对照组(C组)和CCl_4诱导肝纤维化模型组(M组)及IL-10干预肝纤维化... 目的:探讨TGFβ_1在实验性肝纤维化过程中的表达状况及IL-10对肝纤维化大鼠转化生长因子β_1(TGFβ_1)表达的影响。方法:建立大鼠肝纤维化模型并行IL-10干预实验。从正常对照组(C组)和CCl_4诱导肝纤维化模型组(M组)及IL-10干预肝纤维化组(T组)中取肝脏组织,采用S-P免疫组织化学方法检测分析不同组大鼠在肝纤维化进程的不同阶段肝组织中TGFβ_1表达的情况。结果:成功建立大鼠肝纤维化模型;随着肝纤维化程度的加重,TGFβ_1在肝组织中阳性表达明显增强;经Ridit分析,C组与M组间TGFβ_1阳性表达水平有显著性差异(P<0.01);T组TGFβ_1阳性表达较M组明显减弱,经Ridit分析,组间差异有显著性(P<0.01)。结论:TGFβ_1的阳性表达随着肝纤维化程度的进展升高,外源性IL-10对CCl_4诱导的肝纤维化中TGFβ_1的表达具有明显拮抗作用。 展开更多
关键词 白细胞介素-10 转化生长因子Β1 肝纤维化 大鼠 免疫组织化学
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胰岛素样生长因子-1受体在实验性肝纤维化中的表达及IL-10的干预作用 被引量:8
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作者 陈治新 张莉娟 +4 位作者 陈运新 李丹 陈丰霖 黄月红 王小众 《福建医科大学学报》 2002年第2期134-136,F002,共4页
目的 观察胰岛素样生长因子 - 1受体 (IGF- 1R)在实验性大鼠肝纤维化过程中的表达情况及白细胞介素 - 10 (IL - 10 )对肝纤维化大鼠 IGF- 1R表达的影响。 方法 建立 CCl4 诱导大鼠肝纤维化模型并行 IL - 10干预实验。取对照组、模型... 目的 观察胰岛素样生长因子 - 1受体 (IGF- 1R)在实验性大鼠肝纤维化过程中的表达情况及白细胞介素 - 10 (IL - 10 )对肝纤维化大鼠 IGF- 1R表达的影响。 方法 建立 CCl4 诱导大鼠肝纤维化模型并行 IL - 10干预实验。取对照组、模型组及 IL - 10干预组大鼠肝脏组织 ,采用 SP免疫组织化学方法检测分析在肝纤维化进程不同阶段大鼠肝组织 IGF- 1R的表达情况。 结果 经 CCl4 诱导成功建立大鼠肝纤维化模型。随着肝纤维化程度的加重 ,IGF- 1R在肝组织中阳性表达明显增强 ;经 Ridit分析 ,对照组与模型组 IGF- 1R阳性表达差异有显著性 (P<0 .0 1) ;IL - 10干预组 IGF- 1R阳性表达较模型组明显减弱 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,且随 IL - 10干预时间的延长 ,IGF- 1R在肝组织中阳性表达逐渐减弱。 结论 随着肝纤维化程度的进展 IGF- 1R阳性表达增强 ,外源性 IL - 10可降低 CCl4 诱导大鼠肝纤维化中 IGF- 1R的表达。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子I 肝硬化 白细胞介素-10 免疫组织化学 大鼠
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白介素-10对肝纤维化大鼠星状细胞表达细胞间黏附分子-1的影响 被引量:2
5
作者 陈治新 张莉娟 +2 位作者 郑伟达 史美娜 王小众 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期490-492,共3页
目的:探讨外源性白介素10(IL-10)对肝纤维化大鼠星状细胞(HSC)表达细胞间黏附分子1(ICAM1)的影响。方法:60只♂性SD大鼠随机分为生理盐水对照组8只(N组)、CCl4组28只(C组)和IL-10干预组24只(I组),建立正常对照、CCl4诱导肝纤维化模型及I... 目的:探讨外源性白介素10(IL-10)对肝纤维化大鼠星状细胞(HSC)表达细胞间黏附分子1(ICAM1)的影响。方法:60只♂性SD大鼠随机分为生理盐水对照组8只(N组)、CCl4组28只(C组)和IL-10干预组24只(I组),建立正常对照、CCl4诱导肝纤维化模型及IL-10干预模型。造模第7周和第11周,采用链霉蛋白酶E、IV型胶原酶经门静脉离体灌流消化,11%Nycodenz密度梯度离心分离HSC。半定量RTPCR法检测各组HSC的ICAM1mRNA表达水平。结果:成功构建纤维化大鼠模型并分离肝星状细胞。造模第7周、第11周新分离的HSC中,N组的ICAM1不表达,C组与I组均检出ICAM1表达,C组表达均明显高于I组(P<0.01);造模第11周,I组的ICAM-1表达水平较第7周有明显下降(P<0.01),C组较第7周则明显增多(P<0.01)。结论:ICAM-1随实验性大鼠肝纤维化进展表达升高;IL-10可通过抑制HSCICAM-1表达,在抗纤维化中发挥作用。 展开更多
关键词 大鼠 肝星状细胞 肝纤维化 白细胞介素-10 细胞间黏附分子-1
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白介素-10与血小板衍生生长因子-BB对肝星状细胞表达细胞间黏附分子-1mRNA的影响 被引量:1
6
作者 陈治新 王小众 +3 位作者 陈运新 黄月红 李丹 张莉娟 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2004年第1期16-18,共3页
目的 :探讨白介素 10 (IL 10 )、血小板衍生生长因子 BB (PDGF BB)对体外活化的培养大鼠肝星状细胞(HSC)表达细胞间黏附分子 1(ICAM 1)mRNA的影响。方法 :体外培养激活的HSC (细胞系rHSC 99)随机分为 4组 :对照组 (A组 )、IL 10 2 0n... 目的 :探讨白介素 10 (IL 10 )、血小板衍生生长因子 BB (PDGF BB)对体外活化的培养大鼠肝星状细胞(HSC)表达细胞间黏附分子 1(ICAM 1)mRNA的影响。方法 :体外培养激活的HSC (细胞系rHSC 99)随机分为 4组 :对照组 (A组 )、IL 10 2 0ng/ml干预组 (B组 )、PDGF BB 2 0ng/ml干预组 (C组 )及IL 10 2 0ng/ml +PDGF BB2 0ng/ml共干预组 (D组 )。加药后 2 4小时 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR )方法 ,检测各组ICAM 1mRNA表达情况。结果 :B组ICAM 1mRNA的表达较A组明显降低 (P <0 0 1) ;C组ICAM 1mRNA的表达较A组明显增强 (P <0 0 1) ;D组ICAM 1mRNA的表达较A组与C组均降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,但与B组相比较其ICAM 1mRNA的表达则增强 (P <0 0 1)。结论 :PDGF BB促进肝纤维化与其引起HSC表达ICAM 1增强有关 ,IL 10通过下调HSCICAM 1表达 ,可在抑制肝纤维化中发挥作用。 展开更多
关键词 白细胞介素-10 血小板衍生生长因子-BB 肝星状细胞 细胞问黏附分子-1 MRNA 体外培养 RT-PCR 肝纤维化
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实验性大鼠肝纤维化进程中TNF-α、IL-6与IL-10的作用 被引量:21
7
作者 李丹 张莉娟 +2 位作者 陈治新 黄月红 王小众 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第11期1242-1245,共4页
目的探讨TNF-α,IL-6及IL-10在实验性大鼠肝纤维化进程中的作用。方法清洁级SD大鼠100只,随机分为3组。正常对照组(C组)24只,腹腔内注射生理盐水2mL·kg^(-1),2次·wk^(-1);模型组(M组)40只及治疗组(T组)36只,腹腔内注射500mL&#... 目的探讨TNF-α,IL-6及IL-10在实验性大鼠肝纤维化进程中的作用。方法清洁级SD大鼠100只,随机分为3组。正常对照组(C组)24只,腹腔内注射生理盐水2mL·kg^(-1),2次·wk^(-1);模型组(M组)40只及治疗组(T组)36只,腹腔内注射500mL·kg^(-1)CCl_4,2mL·kg^(-1),2次·wk^(-1);E组从3wk起,注射CCl_4前腹腔内注射IL-10 4ug·kg^(-1).于5wk,7wk,9wk分别随机选取C组动物7只,M,E组动物各10只颈动脉插管取血,留取肝脏,ELISA法测定血清中TNF-α,IL-6及IL-10水平,肝脏常规石蜡切片,银染。结果肝脏病理组织学检查证实成功构建CCl_4诱导的实验性大鼠肝纤维模型,且随注射CCl_4次数增多,肝纤维化程度逐渐加重,同时期动物T组较M组肝纤维化程度减轻.C组血清TNF-α、IL-6及IL-10水平分别为(15.2±3.8)ng·L^(-1),(63.6±33.0)ng·L^(-1)和(132.9±22.1)ng·L^(-1);M组水平分别为(18.9±5.3)ng·L^(-1),(89.1±25.4)ng·L^(-1)和(57.6±18.9)ng·L^(-1);T组水平分别为(14.0±1.9)ng·L^(-1),(74.7±21.2)ng·L^(-1)及(88.2±20.8)ng·L^(-1).wk5,7,9,M组TNF-α动态变化水平分别为(16.5±2.7)ng·L^(-1),(17.1±0.9)ng,L^(-1),(22.6±6.8)ng·L^(-1);T组水平分别为(13.4±1.0)ng·L^(-1),(13.6±1.2)ng·L^(-1),(14.5± 2.9)ng·L^(-1);M组IL-6动态变化水平分别为(63.8±12.2)ng·L^(-1),(71.5±16.1)ng·L^(-1),(112.3±20.2)ng·L^(-1),T组水平分别为(63.1±13.1)ng·L^(-1),(70.1±11.8)ng·L^(-1),(85.8±11.6)ng·L^(-1);M组IL-10动态变化水平分别为(82.1±5.2)ng·L^(-1),(65.7±8.4)ng·L^(-1),(50.0±8.5)ng·L^(-1),M组TNF-α及IL-6水平显著高于C组和T组(P<0.05),且在肝纤维化进程中呈动态上升趋势,经IL-10干预后,二者水平下降与M组有明显差异(P<0.05).M组IL-10水平低于N组(P<0.05),在肝纤维化进程中呈动态下降趋势。结论 TNF-α,IL-6升高及IL-10降低在肝纤维化进程中起重要促进作用,予以外源性IL-10对CCl_4诱导的肝纤维化有明显拮抗作用。 展开更多
关键词 肝硬化 病理生理学 肿瘤坏死因子 白介素6 白介素10
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四氯化碳诱导肝纤维化早期大鼠肝窦内皮细胞及基底膜形态改变的动态研究 被引量:12
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作者 黄月红 郭杞兰 +3 位作者 陈治新 陈运新 张莉娟 王小众 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1501-1505,1531,共6页
目的:探讨四氯化碳诱导肝纤维化早期大鼠肝窦毛细血管化的形成过程。方法:清洁级雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分为2组:正常对照组(N组,6只)和肝纤维化模型组(M组,32只)。M组大鼠腹腔注射50%四氯化碳蓖麻油混合液,N组大鼠腹腔注射生... 目的:探讨四氯化碳诱导肝纤维化早期大鼠肝窦毛细血管化的形成过程。方法:清洁级雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分为2组:正常对照组(N组,6只)和肝纤维化模型组(M组,32只)。M组大鼠腹腔注射50%四氯化碳蓖麻油混合液,N组大鼠腹腔注射生理盐水,剂量为2 mL/kg,每周2次,共4周。分别于造模第3天、1周、2周和4周处死大鼠,HE染色和Masson染色观察肝脏组织炎症及纤维化的改变,透射电镜观察肝窦内皮细胞(LSECs)窗孔与基底膜(BM)的改变,免疫组织化学检测LSECs表面标志物CD31及基底膜成分IV型胶原(Col IV)和层黏连蛋白(LN)的改变。结果:HE及Masson染色显示四氯化碳造模4周早期肝纤维化已形成。肝组织透射电镜显示四氯化碳造模第3天后开始出现LSECs窗孔直径变小及数目减少,随着造模时间的延长,LSECs失窗孔现象逐步严重,至第4周时局部内皮下可见连续的基底膜。免疫组化染色显示LSECs表面标志物CD31表达随着LSECs窗孔数目的减少而逐渐增强;基底膜成分Col IV于造模第2周时表达开始显著增强并随着造模时间延长表达逐渐增强,LN于造模第4周时表达开始显著增强。结论:肝纤维化早期大鼠局部肝组织可见典型的肝窦毛细血管化形成;肝窦壁内LN沉积是肝窦毛细血管化时形成连续基底膜的关键因素。 展开更多
关键词 大鼠 肝纤维化 肝窦毛细血管化 肝窦内皮细胞 基底膜
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外源性rIL-10基因质粒静脉注射及其在大鼠体内表达 被引量:8
9
作者 黄月红 陈运新 +1 位作者 陈治新 王小众 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期834-837,共4页
目的建立大鼠体内质粒DNA尾静脉快速大容量注射法,使外源性rIL-10在肝组织中高表达,为探索肝脏疾病的基因治疗提供动物试验手段。方法以rIL-10为报告基因,将含不同体积及不同质粒浓度的质粒DNA溶液经大鼠尾静脉快速注射,在注射后的不同... 目的建立大鼠体内质粒DNA尾静脉快速大容量注射法,使外源性rIL-10在肝组织中高表达,为探索肝脏疾病的基因治疗提供动物试验手段。方法以rIL-10为报告基因,将含不同体积及不同质粒浓度的质粒DNA溶液经大鼠尾静脉快速注射,在注射后的不同时间内分别收集血浆及肝、肾、肺、脾和心组织,使用RT-PCR、ELISA和免疫组化法检测rIL-10在体内的表达情况。结果尾静脉快速大容量注射rIL-10DNA溶液可使rIL-10基因在大鼠肝脏有较明显转录及表达。血浆中rIL-10浓度可通过质粒的重复注射使其保持在一个稳态。结论尾静脉快速大容量注射法是一种简单、方便和有效的大鼠体内基因转移及基因表达的方法,为进一步探讨rIL-10基因在肝脏疾病的基因治疗打下基础。 展开更多
关键词 白介素10 大鼠 质粒DNA 基因转移 基因表达 尾静脉注射
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肝癌患者HBxAg与Fas/FasL表达的研究 被引量:6
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作者 王小众 陈晓春 +3 位作者 杨映红 陈治新 黄月红 陶其敏 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期41-44,共4页
目的:探讨肝癌患者肝组织中 HBxAg与 Fas/FasL的表达状况及血清中 HBV X基因与 Fas/FasL的水平。方法:用SP法对34例肝癌组织HBxAg、Fas与FasL表达状况进行分析,用ELISA法对30例肝... 目的:探讨肝癌患者肝组织中 HBxAg与 Fas/FasL的表达状况及血清中 HBV X基因与 Fas/FasL的水平。方法:用SP法对34例肝癌组织HBxAg、Fas与FasL表达状况进行分析,用ELISA法对30例肝癌、32例肝硬化及20例正常人血清sFas与 sFasL含量进行分析,并用PCR法对肝癌与肝硬化患者血清HBV X基因表达进行检测。结果:HBxAg、Fas与FasL在肝癌表达的阳性率分别为97.06%、85.29%及100%。阳性信号均主要位于胞浆,且三者可在同一癌组织的相同区域出现阳性染色,Redit分析示三者的阳性程度无统计学差异(P>0.05)。血清sFas在肝癌、肝硬化与正常人中的含量分别为(722.97±321.13)μg/L、(801.90±419.94)μg/L和(224.07±148.23)μg/L,其中肝癌与肝硬化组显著高于正常人(P< 0. 01);血清 sFasL在肝癌、肝硬化与正常人中的含量分别为(152. 27±7. 99)μg/L、( 162. 97±12. 40)μg/L和(154.99± 6.96)μg/L,其中肝硬化组含量高于肝癌与正常人( P<0.01)。 展开更多
关键词 肝肿瘤 HBXAG FAS FASL 基因表达
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肝脏靶向表达大鼠白介素-10基因对猪血清诱导的大鼠肝纤维化的抑制 被引量:6
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作者 黄月红 陈运新 +3 位作者 郑伟达 张莉娟 陈治新 王小众 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期1353-1357,共5页
目的探讨肝脏靶向表达rIL-10基因对猪血清诱导的大鼠肝纤维化的抑制作用。方法 rIL-10基因通过尾静脉快速大容量注射法转移至大鼠体内,RT-PCR法检测大鼠肝、肾、脾和肺组织rIL-10 mRNA的表达及S-P免疫组化法检测rIL-10蛋白在肝脏中表达... 目的探讨肝脏靶向表达rIL-10基因对猪血清诱导的大鼠肝纤维化的抑制作用。方法 rIL-10基因通过尾静脉快速大容量注射法转移至大鼠体内,RT-PCR法检测大鼠肝、肾、脾和肺组织rIL-10 mRNA的表达及S-P免疫组化法检测rIL-10蛋白在肝脏中表达。30只体质量100~120 g清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=6)、纤维化模型对照组(n=8)、rIL-10基因干预组(n=8)和空质粒对照组(n=8)。正常对照组与其余3组大鼠腹腔分别注射生理盐水和猪血清,0.5 ml/只,每周2次。第5周开始造模同时,rIL-10基因干预组和空质粒对照组大鼠分别从尾静脉注射pcDNA3-rIL-10和pcDNA3空质粒,每周1次。第8周末处死全部大鼠收集组织和血清备用。HE、天狼星红染色分别检测各组肝组织病理形态学和Ⅰ、Ⅲ胶原的改变,生化检测血清ALT和AST含量。结果 RT-PCR和免疫组化证实rIL-10基因经尾静脉快速大容量注射转染到大鼠体内后主要在肝组织中转录及表达;纤维化模型和空质粒对照组:HE染色显示大鼠肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润,大量胶原沉积形成粗细不等的纤维隔,部分假小叶形成;天狼星红染色显示肝组织中大量Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维沉积;血清中ALT和AST表达水平较正常对照组明显升高(P<0.01)。与对照组比较,rIL-10基因干预组大鼠HE染色显示肝细胞变性坏死程度减轻、炎细胞的浸润减少,胶原沉积明显减少,天狼星红染色显示Ⅰ、Ⅲ型胶沉积面积显著下降(P<0.01),血清中ALT和AST表达水平显著降低(P<0.01)。结论 尾静脉快速大容量注射法可使rIL-10基因在肝组织靶向表达,靶向表达的rIL-10有效抑制猪血清诱导的大鼠肝纤维化形成。 展开更多
关键词 大鼠白介素-10 裸质粒DNA 尾静脉注射 基因干预 肝纤维化
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TIMP-1表达在实验性大鼠肝纤维化发病中的作用 被引量:7
12
作者 郑伟达 王小众 +4 位作者 张莉娟 史美娜 陈治新 陈运新 黄月红 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第5期475-478,共4页
目的 探讨TIMP 1表达在实验性大鼠肝纤维化发病中的意义及外源性IL 10抗肝纤维化作用的可能机制。方法  60只SD雄性大鼠随机分为生理盐水对照组 (N组 ,8只 )、CCl4组 (C组 ,2 8只 )和IL 10干预组 (Ⅰ组 ,2 4只 ) ,建立下常对照、CCl4... 目的 探讨TIMP 1表达在实验性大鼠肝纤维化发病中的意义及外源性IL 10抗肝纤维化作用的可能机制。方法  60只SD雄性大鼠随机分为生理盐水对照组 (N组 ,8只 )、CCl4组 (C组 ,2 8只 )和IL 10干预组 (Ⅰ组 ,2 4只 ) ,建立下常对照、CCl4诱导肝纤维化模型及IL 10干预模型。造模第 7周和第 11周 ,采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉原位灌流消化 ,11%Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞 (HSC)。半定量RT PCR法检测各组HSC的TIMP 1mRNA表达水平 ;免疫细胞化学法检测培养贴壁后HSC的TIMP 1蛋白表达情况。结果 各组均检出TIMP 1的mRNA表达 ;造模第 7周 ,C组与I组的TIMP 1mRNA表达均高于N组 (P <0 .0 1) ,I组低于C组 (P <0 .0 1) ;造模第 11周 ,I组明显低于C组 (P <0 .0 1) ,C组TIMP 1的表达水平较第 7周进一步增加 (P <0 .0 1) ,而I组有所下降 (P <0 .0 5 )。免疫细胞化学法检测各组TIMP 1的蛋白表达变化与mRNA表达变化一致。结论 TIMP 1随着大鼠肝纤维化进展表达逐渐升高 ,IL 10通过抑制TIMP 1的表达 。 展开更多
关键词 TIMP-1 鼠肝 mRNA表达 IL-10 实验性大鼠 造模 发病 密度梯度离心 表达水平 CCL4
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乙肝病毒X基因真核表达载体的构建及人肝细胞株HL-7702转染 被引量:9
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作者 陈红英 唐南洪 +2 位作者 张生君 陈治新 王小众 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第3期614-617,共4页
目的:构建表达乙肝病毒(HBV)X基因的人肝细胞株. 方法:用PCR法扩增HBVX基因序列,将其添A后连至PUCmT载体上,用EcolⅠ和Hind Ⅲ双酶切PUCmT-X和PcDNA3载体,连接酶切片段PcDNA3及X片段以构建重组质粒PcDNA3-X.用脂质体转染法将PcDNA3-X及... 目的:构建表达乙肝病毒(HBV)X基因的人肝细胞株. 方法:用PCR法扩增HBVX基因序列,将其添A后连至PUCmT载体上,用EcolⅠ和Hind Ⅲ双酶切PUCmT-X和PcDNA3载体,连接酶切片段PcDNA3及X片段以构建重组质粒PcDNA3-X.用脂质体转染法将PcDNA3-X及空质粒PcDNA3导入肝细胞HL-7702中,G418选择培养,RT- PCR鉴定其稳定表达. 结果:已构建的PcDNA3-X经序列测定含有完整的HBV X 基因片段,转入HL-7702细胞后经RT-PCR证实该细胞有稳定表达X蛋白. 结论:成功构建了表达HBV X基因的肝细胞株,为进一步探讨HBV X基因在肝炎与肝癌发生中的作用提供了理想的实验模型. 展开更多
关键词 乙肝病毒 X基因 真核表达载体 HL-7702细胞株 脂质体转染法 肝癌
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IL-10对大鼠肝纤维化的治疗作用及对TNF-α、IGF-1及IGF-1R表达的影响 被引量:5
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作者 黄月红 张莉娟 +3 位作者 郑伟达 史美娜 陈治新 王小众 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第3期249-252,共4页
目的外源性白介素10(IL10)对大鼠肝纤维化的治疗作用及对肿瘤坏死因子α(TNFα)和胰岛素样生长因子1(IGF1)及其受体(IGF1R)表达的影响。方法40只SD大鼠随机分为正常对照组和CCl4诱发肝纤维化模型组。至造模第9周,模型组随机分为3组,S组... 目的外源性白介素10(IL10)对大鼠肝纤维化的治疗作用及对肿瘤坏死因子α(TNFα)和胰岛素样生长因子1(IGF1)及其受体(IGF1R)表达的影响。方法40只SD大鼠随机分为正常对照组和CCl4诱发肝纤维化模型组。至造模第9周,模型组随机分为3组,S组造模结束即处死,I组IL10治疗2周后处死,R组为自然恢复2周后处死。通过HE染色评价各组肝纤维化的程度,SP免疫组化检测各组大鼠肝脏TNFα、IGF1、IGF1R表达情况。结果肝病理组织学显示:I组纤维化程度有明显改善,R组纤维化程度没有明显改善。TNFα、IGF1、IGF1R在S组表达显著升高(P<0.05),在R组及I组表达下降,但I组下降较R组明显,与R组比较差别有显著意义(P<0.05)。结论外源性IL10能明显抑制炎性细胞因子TNFα的表达和IGF1及IGF1R的表达,这可能是IL10对大鼠肝纤维化治疗作用的机制之一。 展开更多
关键词 IGF-1R 治疗作用 肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 胰岛素样生长因子 外源性IL-10 纤维化程度 肝纤维化模型 免疫组化检测 炎性细胞因子 正常对照组 病理组织学 CCL4 SD大鼠 自然恢复 HE染色 大鼠肝脏 表达情况 白介素 随机 造模
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白介素-10对肝纤维化大鼠星状细胞EGF及HGF表达的影响 被引量:5
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作者 史美娜 王小众 +2 位作者 郑伟达 张莉娟 陈治新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期327-331,共5页
目的探讨IL10干预对实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞EGF、HGF表达的影响及其抗纤维化作用的可能机制。方法60只♂SD大鼠随机分为正常对照组(N组,8只)、肝纤维化模型组(C组,28只)和IL10干预组(I组,24只),分别于CCl4造模第7周及11周采用链... 目的探讨IL10干预对实验性肝纤维化大鼠肝星状细胞EGF、HGF表达的影响及其抗纤维化作用的可能机制。方法60只♂SD大鼠随机分为正常对照组(N组,8只)、肝纤维化模型组(C组,28只)和IL10干预组(I组,24只),分别于CCl4造模第7周及11周采用链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注分离肝星状细胞。半定量RTPCR法检测各组新分离肝星状细胞中EGF、HGFmRNA表达水平;SP免疫细胞化学法检测各组原代培养3天后肝星状细胞EGF的表达。并于上述两个时间段分别将各组肝组织行HE染色判断炎症和肝纤维化程度。结果成功建立大鼠肝纤维化模型和分离大鼠肝星状细胞。与正常组相比,纤维化模型组EGF、HGF的mRNA水平显著升高(P<001),经IL10干预后则明显降低(P<001)。对EGF而言,IL10组表达量高于正常组(P<005);对HGF而言,IL10组皆低于正常组(P<005)。肝纤维化模型组EGFmRNA水平在第11周较第7周有进一步的升高(P<005)。SP免疫细胞化法检测各组EGF的蛋白表达情况与上述mRNA结果相平行。结论EGF、HGF随肝纤维化进程逐渐升高,IL10可抑制纤维化大鼠肝星状细胞EGF、HGF的表达,具有抗纤维化作用。 展开更多
关键词 肝星状细胞 肝纤维化 白介素-10 表皮生长因子 肝细胞生长因子
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大鼠IL-10基因真核表达质粒的构建及其在BRL细胞中的表达 被引量:5
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作者 陈运新 黄月红 +2 位作者 陈治新 郑伟达 王小众 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期332-334,共3页
目的:构建大鼠IL-10基因的真核表达载体,观察其在大鼠肝细胞系BRL中的表达,比较有无受体介导的脂质体的转染效率。方法:抽提外周血单个核细胞的总RNA,通过RT-巢式PCR方法获得大鼠IL-10的全长编码序列,定向克隆到真核表达载体pcDNA3·... 目的:构建大鼠IL-10基因的真核表达载体,观察其在大鼠肝细胞系BRL中的表达,比较有无受体介导的脂质体的转染效率。方法:抽提外周血单个核细胞的总RNA,通过RT-巢式PCR方法获得大鼠IL-10的全长编码序列,定向克隆到真核表达载体pcDNA3·0,并进行限制性内切酶酶切及测序鉴定。将重组质粒分别通过脂质体TransfastTM与去唾液酸糖蛋白受体介导的脂质体PEIjet-gal转入大鼠肝细胞系BRL,通过RT-PCR方法检测IL-10mRNA的表达,比较二者的转染效率,用ELISA法检测后者分泌型IL-10的表达。结果:经酶切及测序鉴定证实,重组质粒插入片段与大鼠IL-10的全长编码序列完全相符。发现受体介导的脂质体PEIjet-gal转染效率明显高于非受体介导的脂质体TransfastTM。通过受体介导的脂质体转染,BRL细胞获得高水平的IL-10表达。结论:成功地构建pcDNA3·0-IL-10重组质粒。受体介导的脂质体对肝细胞有较高的转染活性,可能成为IL-10基因治疗肝纤维化的有效转染载体。 展开更多
关键词 白细胞介素-10 基因治疗 去唾液酸糖蛋白受体 肝细胞
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外源性转化生长因子β_1对大鼠原代肝星状细胞活化的影响 被引量:9
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作者 陈达凡 李建英 +2 位作者 郑伟达 陈治新 王小众 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第3期211-215,共5页
目的:探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法:分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7d时予TGF-β15mg/L处理24h,倒置显微镜下... 目的:探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法:分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7d时予TGF-β15mg/L处理24h,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用Western blot法检测处理前后细胞a-肌动蛋白(a-SMA)的变化,及活化过程中TGF-β1Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的表达.结果:HSC在体外培养过程中,不同培养时间对TGF-β1的刺激活化作用反应不同.TGF-β1处理后,对培养2,3,4,5dHSC的活化有促进作用,以对培养第3天的细胞作用最明显,其a-SMA表达增加78.05%,而培养6,7d的HSC的形态和a-SMA变化不明显.培养第7天的HSC比培养第3天的细胞TβR-Ⅱ表达增高(3.30±0.83 vs 1.55±0.38,P<0.05).结论:TGF-β1对处部分活化状态中某阶段细胞的活化具有促进作用.完全活化的细胞对TGF-β1的刺激活化作用不敏感,原因与TβR-Ⅱ的表达量无关. 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 肝纤维化 肝星状细胞 Α肌动蛋白
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IGF-1在肝纤维化大鼠中的表达及IL-10的干预作用 被引量:7
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作者 蒋向荣 陈治新 +5 位作者 张莉娟 陈运新 李丹 陈丰霖 黄月红 王小众 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2003年第3期154-157,共4页
目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGR-1)在实验性大鼠肝纤维化过程中的表达状况及白细胞介素-10(IL-10)对肝纤维化大鼠IGF-1表达的影响。方法:建立大鼠肝纤维化模型并行IL-10干预实验。分批从肝纤维化进程中不同阶段的对照组、CCl_4诱导肝... 目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGR-1)在实验性大鼠肝纤维化过程中的表达状况及白细胞介素-10(IL-10)对肝纤维化大鼠IGF-1表达的影响。方法:建立大鼠肝纤维化模型并行IL-10干预实验。分批从肝纤维化进程中不同阶段的对照组、CCl_4诱导肝纤维化模型组及IL-10干预肝纤维化组的大鼠中取肝脏组织,采用S-P免疫组织化学方法分别检测分析不同组及同组不同阶段大鼠肝组织中IGF-1的表达状况。结果:经CCl_4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型。随着肝纤维化程度的进展,IGF-1在肝组织中阳性表达明显增强;经Ridit分析,对照组(38.1%)与肝硬化模型组(92.0%)组间比较IGF-1阳性表达均有显著性差异(P<0.01);IL-10干预肝纤维化组IGF-1阳性表达(71.4%)较肝纤维化模型组均明显减弱,经Ridit分析组间均有显著性差异(P<0.05),且随IL-10干预时间的延长,IGF-1在肝组织中阳性表达均逐渐减弱。结论:IGF-1随着肝纤维化程度的进展阳性表达增强,外源性IL-10可降低CCl_4诱导大鼠肝纤维化中IGF-1的表达。 展开更多
关键词 IGF-l 肝纤维化 大鼠 IL-10 干预 实验 白细胞介素-10 胰岛素样生长因子-l
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IL-10对大鼠原代肝细胞增殖的影响 被引量:4
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作者 林羡屏 黄月红 +3 位作者 郑伟达 陈运新 陈治新 王小众 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1150-1153,共4页
目的:探讨IL-10对体外培养大鼠原代肝细胞增殖的影响。方法:胶原蛋白酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,RT-PCR法检测肝内不同细胞标志基因的表达情况,对比原代肝细胞与大鼠正常肝组织的检测结果,进行细胞纯度鉴定;RT-PCR法检测原代肝细胞IL-1... 目的:探讨IL-10对体外培养大鼠原代肝细胞增殖的影响。方法:胶原蛋白酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,RT-PCR法检测肝内不同细胞标志基因的表达情况,对比原代肝细胞与大鼠正常肝组织的检测结果,进行细胞纯度鉴定;RT-PCR法检测原代肝细胞IL-10和IL-10受体α(IL10Rα)的表达情况;原代肝细胞分3组培养:正常组(N组)、对照组(C组)和IL-10干预组(I组);通过MTT分析、台盼兰细胞计数以及流式细胞术检测DNA含量等方法,了解外源性IL-10对肝细胞增殖的影响。结果:细胞鉴定结果显示,所有的标志基因在肝组织都可检测到有较高的表达,原代肝细胞虽高表达肝细胞标志基因,而肝内其他细胞的标志基因则不表达或低表达。RT-PCR检测显示原代肝细胞可表达IL-10和IL10Rα。台盼兰细胞计数提示IL-10干预48h,I组平均细胞数仅为C组的71.96%(P<0.05);MTT检测亦显示IL-10干预24、48h,I组吸光度值分别为C组的88.41%与90.24%(P<0.05);流式细胞术检测结果表明IL-10干预24h,I组肝细胞峰DNA含量是C组的59.06%,I组较C组降低(P<0.01),甚至低于N组(P<0.01)。结论:分离的原代肝细胞纯度较高,大鼠原代肝细胞表达IL-10/IL10R mRNA,IL-10抑制大鼠原代肝细胞增殖。 展开更多
关键词 原代肝细胞 IL-10 IL10R 细胞增殖
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降钙素基因相关肽,血管紧张素Ⅱ和内皮素在大鼠纤维化中的作用 被引量:6
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作者 张莉娟 王小众 +1 位作者 黄月红 陈治新 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第4期457-459,共3页
肝纤维化发病的机制是肝病研究的一个热点课题[1].近年来国内外在肝纤维化的细胞学与细胞外基质的研究[2-4],细胞因子在肝纤维化中的作用,以及肝纤维化时肝的再生与调节等方面均取得长足进展[5,6],而液递物质在肝纤维化发病中的作用却... 肝纤维化发病的机制是肝病研究的一个热点课题[1].近年来国内外在肝纤维化的细胞学与细胞外基质的研究[2-4],细胞因子在肝纤维化中的作用,以及肝纤维化时肝的再生与调节等方面均取得长足进展[5,6],而液递物质在肝纤维化发病中的作用却知之甚少.由于肝纤维化的进展伴随着门脉高压的形成与发展,而在门脉高压形成过程中有着多种递质参与,其作用已被许多研究者所证实[7].因此,递质在肝纤维化发病及治疗中的作用值得探讨.我们选择内皮素、降钙素基因相关肽及血管紧张素Ⅱ等与门脉高压发病相关的递质进行研究,观察这些递质在大鼠肝纤维化过程中含量的变化,以期了解它们与肝纤维化的关系。 展开更多
关键词 肝硬化 病理生理学 血液 内皮缩血管肽类 血液 降钙素基因相关肽 血管紧张素Ⅱ
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