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人骨诱导因子和绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体的构建和鉴定及在HT-29细胞中的表达
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作者 霍永旭 李宇 +3 位作者 刘雁军 郭元彪 杨春蕾 赵聪 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期1332-1334,共3页
目的构建和鉴定人骨诱导因子基因(hOGN)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人大肠癌细胞株HT-29中的表达水平。方法采用PCR方法克隆hOGN基因;将hOGN基因连接到带有GFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的... 目的构建和鉴定人骨诱导因子基因(hOGN)和绿色荧光蛋白(GFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人大肠癌细胞株HT-29中的表达水平。方法采用PCR方法克隆hOGN基因;将hOGN基因连接到带有GFP的慢病毒表达载体pEZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒pEZ-hOGN-SV40-eGFP-IRES-Puro(pEZ-hOGN)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-PacHIVmix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的pEZ-hOGN感染HT-29细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后HT-29细胞中GFP表达情况和目的基因hOGN的表达情况。结果基因测序分析证实克隆的hOGN基因与GenBank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实OGN正确插入pEZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×10~9~1×10~9TU/ml。在HT-29细胞中重组病毒感染96h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在HT-29细胞中hOGN蛋白过表达。结论成功构建携带hOGN基因的重组慢病毒载体,在HT-29细胞中有效表达。 展开更多
关键词 骨诱导因子 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 HT-29细胞
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MTHF对C57BL/6鼠Lewis肺癌细胞生长的影响 被引量:1
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作者 李小雪 邵鑫 +3 位作者 霍永旭 苏小娟 王思洋 杨春蕾 《四川动物》 北大核心 2015年第5期729-733,共5页
通过观察MTHF纯体对C57BL/6鼠移植瘤细胞生长的影响,初步探讨MTHF抗肿瘤作用的机理。将42只接种Lewis肺癌LL2细胞的C57BL/6鼠随机分成对照组、MTHF组和顺铂组。分别处理后观察各组肿瘤生长情况,于接种22 d后处死荷瘤鼠,收集肿瘤标本后... 通过观察MTHF纯体对C57BL/6鼠移植瘤细胞生长的影响,初步探讨MTHF抗肿瘤作用的机理。将42只接种Lewis肺癌LL2细胞的C57BL/6鼠随机分成对照组、MTHF组和顺铂组。分别处理后观察各组肿瘤生长情况,于接种22 d后处死荷瘤鼠,收集肿瘤标本后测量瘤体质量,并进行电镜以及组织学分析,通过免疫组化检测肿瘤组织PCNA、Bcl-2及Bax的表达。结果表明MTHF组、顺铂组抑瘤率分别为46.2%、54.5%。电镜显示MTHF组出现细胞凋亡。MTHF处理Lewis肺癌细胞后,PCNA和Bcl-2基因下调,Bax基因上调。MTHF可显著抑制C57BL/6鼠移植瘤肺癌细胞的生长,其机制可能与诱导Lewis肺癌细胞凋亡并抑制其增殖有关,是一种有前景的抗肿瘤药物。 展开更多
关键词 MTHF C57BL/6鼠 细胞增殖 肺癌
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Arp2/3复合体在细胞运动以及肿瘤转移中机制的研究进展 被引量:1
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作者 苏小娟 王思洋 +3 位作者 霍永旭 李小雪 邵鑫 杨春蕾 《四川生理科学杂志》 2015年第1期31-34,共4页
Arp2/3复合体是一个主要的肌动蛋白组装成核剂,能够促进微丝的核化,从而促进细胞内肌动蛋白单体装配形成微丝,这在细胞运动等多种与肌动蛋白细胞骨架相关生理活动中具有重要作用,最近研究发现,Arp亚基基因在肿瘤内异常表达,研究其与肿... Arp2/3复合体是一个主要的肌动蛋白组装成核剂,能够促进微丝的核化,从而促进细胞内肌动蛋白单体装配形成微丝,这在细胞运动等多种与肌动蛋白细胞骨架相关生理活动中具有重要作用,最近研究发现,Arp亚基基因在肿瘤内异常表达,研究其与肿瘤之间的关系在肿瘤早期诊断和基因治疗方面有重要的理论指导意义。本文综述了近年来有关Arp2/3复合体的分子结构,功能特点以及在肿瘤中作用等相关的研究,为Arp2/3复合体的进一步研究提供一定的参考。 展开更多
关键词 Arp2/3复合体 细胞骨架 微丝成核 迁移 肿瘤
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Plastin在肿瘤中的研究进展 被引量:1
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作者 霍永旭 张彤彤 +2 位作者 苏小娟 王思洋 杨春蕾 《生命的化学》 CAS CSCD 2015年第3期413-417,共5页
Plastin是一种肌动蛋白结合蛋白,可与纤维状肌动蛋白结合,使纤维状肌动蛋白相互交联形成紧密的束状结构,起到稳定细胞肌动蛋白骨架以及调节细胞运动的作用。Plastin家族有三种亚型,组织特异性地在哺乳动物体内不同组织细胞中表达,并且... Plastin是一种肌动蛋白结合蛋白,可与纤维状肌动蛋白结合,使纤维状肌动蛋白相互交联形成紧密的束状结构,起到稳定细胞肌动蛋白骨架以及调节细胞运动的作用。Plastin家族有三种亚型,组织特异性地在哺乳动物体内不同组织细胞中表达,并且在肿瘤内异常表达。研究Plastin家族蛋白与肿瘤之间的关系在肿瘤早期诊断和基因治疗方面都有重要的理论指导意义。本文综述了近年来关于Plastin家族蛋白分子结构、功能特点以及在肿瘤中作用等的相关研究,为该领域的研究提供一定的参考。 展开更多
关键词 Plastin 肌动蛋白 肿瘤细胞 迁移 侵袭
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