犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：11

1

作者 孙文超 解长占 +12 位作者 赵冠宇 曹亮 郑敏 曹慧慧 张红云 韦显凯 韩继成 温树波 肖朋朋 靖杰 张萍 鲁会军 金宁一 《动物医学进展》 北大核心 2017年第5期6-10,共5页

犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体... 犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明,所建立的方法 Ct值与标准品在4.67×10~9 copies/μL^4.67×10~3 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445。该方法检测灵敏度为4.67×10~1copies/μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50%(4/32)。 展开更多

关键词 犬圆环病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR

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猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：9

2

作者 孙文超 韩继成 +12 位作者 解长占 张萍 张金勇 曹亮 崔卓栋 靖杰 温树波 肖朋朋 南福龙 张赫 庄忻雨 鲁会军 金宁一 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期641-644,共4页

为建立猪细小病毒7型(PPV7)的快速定量检测方法,本研究根据PPV7(KU563733.1)基因序列设计一对特异性引物,扩增155 bp的PPV7衣壳蛋白基因,构建重组质粒pClon007-PPV7,以其作为标准品建立了PPV7的SYBR GteenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显... 为建立猪细小病毒7型(PPV7)的快速定量检测方法,本研究根据PPV7(KU563733.1)基因序列设计一对特异性引物,扩增155 bp的PPV7衣壳蛋白基因,构建重组质粒pClon007-PPV7,以其作为标准品建立了PPV7的SYBR GteenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在5.00×10~9拷贝/μL^5.00×10~3拷贝/μL范围内呈良好的线性关系。该方法对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、乙脑病毒、口蹄疫病毒常见病原的检测均无特异性扩增,仅PPV7出现特异性扩增;该方法检测灵敏度可达5.00×10~1拷贝/μL;批内和批间变异系数均低于1%,具有较高的重复性和稳定性。对临床样品的检测结果显示,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为71.88%,比普通PCR法检测的阳性率提高了约4.55%。该研究方法的建立为PPV7提供了一种新的快速定量检测技术。 展开更多

关键词 猪细小病毒7型 荧光定量PCR 检测方法

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猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二联RT-PCR检测方法的建立 被引量：15

3

作者 赵雯雯 李敬双 +3 位作者 赵晓岚 靖杰 赵禹冬 智诗文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期109-110,共2页

为了研究出一种快速、敏感、特异的诊断猪传染性胃肠炎和猪流行腹泻的方法,试验参照国内外已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因序列及其相关的RT-PCR检测方法,根据猪传染性胃肠炎病毒S蛋白基因和猪流行性腹... 为了研究出一种快速、敏感、特异的诊断猪传染性胃肠炎和猪流行腹泻的方法,试验参照国内外已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因序列及其相关的RT-PCR检测方法,根据猪传染性胃肠炎病毒S蛋白基因和猪流行性腹泻病毒S蛋白基因各设计1套特异性通用引物,扩增目的带分别为426bp和584bp。结果表明:建立的猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二联RT-PCR检测方法具有快速、敏感、特异等优点,可为猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒的检测、流行病学调查及疫苗使用等奠定基础。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 猪流行性腹泻病毒 反转录聚合酶链式反应

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Quil A与PICKCa的免疫调节作用研究 被引量：1

4

作者 刘燕瑜 任静强 +4 位作者 刘存霞 靖杰 鲁会军 金扩世 金宁一 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期148-150,共3页

为了探讨Quil A、PICKCa及二者联合使用对实验动物的免疫调节作用,试验分别给小鼠和猪注射Quil A、PICKCa及两者混合物,于注射后不同时间采血,检测细胞因子水平;注射后第7天检测猪T淋巴细胞的体外增殖反应。结果表明:小鼠和猪在注射药... 为了探讨Quil A、PICKCa及二者联合使用对实验动物的免疫调节作用,试验分别给小鼠和猪注射Quil A、PICKCa及两者混合物,于注射后不同时间采血,检测细胞因子水平;注射后第7天检测猪T淋巴细胞的体外增殖反应。结果表明:小鼠和猪在注射药物之后均未出现任何不良反应;试验组动物的细胞因子水平均显著高于对照组;猪T淋巴细胞体外增殖能力也显著高于对照组。说明Quil A、PICKCa对小鼠和猪具有良好的免疫调节作用。 展开更多

关键词 Quil A PICKCa 佐剂 免疫 细胞因子 淋巴细胞增殖

原文传递

光突发交换网络中TCP Reno的性能分析 被引量：1

5

作者 刘建平 文爱军 +1 位作者 刘增基 靖杰 《电子与信息学报》 EI CSCD 北大核心 2007年第8期1951-1955,共5页

该文在分析光突发交换(OBS)网络对TCP性能影响的基础上,研究了单个突发所包含的属于同一TCP/IP连接的分组数对TCP Reno吞吐量性能的影响,得到了一个吞吐量与突发丢失率、单个突发所包含分组数以及往返时延(RTT)的闭合表达式;并通过仿真... 该文在分析光突发交换(OBS)网络对TCP性能影响的基础上,研究了单个突发所包含的属于同一TCP/IP连接的分组数对TCP Reno吞吐量性能的影响,得到了一个吞吐量与突发丢失率、单个突发所包含分组数以及往返时延(RTT)的闭合表达式;并通过仿真验证了分析的正确性;分析和仿真结果表明,在接入链路带宽较大时,突发所包含的分组数存在一个最佳值,使TCP吞吐量达到最大。 展开更多

关键词 光突发交换 TCP协议 突发汇聚 吞吐量模型

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探讨脑梗死患者血小板相关参数的检测意义 被引量：1

6

作者 史玉水 刘桅 +1 位作者 星曼 靖杰 《实用检验医师杂志》 2011年第1期43-45,共3页

目的探讨脑梗死患者血小板（platelet，PLT）及其相关参数的变化及临床意义。方法选择脑梗死急性期患者43例，脑梗死恢复期患者63例和正常对照者85例，采用库尔特HMX五分类血细胞分析仪检测受检者PLT、平均血小板体积（mean platelet vo... 目的探讨脑梗死患者血小板（platelet，PLT）及其相关参数的变化及临床意义。方法选择脑梗死急性期患者43例，脑梗死恢复期患者63例和正常对照者85例，采用库尔特HMX五分类血细胞分析仪检测受检者PLT、平均血小板体积（mean platelet volume，MPV）和血小板分布宽度（platelet distribution width，PDW）并进行统计学分析。结果脑梗死急性期与恢复期及对照组比较，MPV、PDW水平均升高，PLT水平降低，且差异均有统计学意义（P均〈0．05）。梗死面积越大，PLT、MPV、PDW水平越高，且组间比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论PLT参数的检测对脑梗死患者病情的判断有重要意义。 展开更多

关键词 脑梗死 血小板计数 平均血小板体积 血小板分布宽度

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光突发交换网络中TCP短流的分析模型

7

作者 刘建平 刘增基 +1 位作者 文爱军 靖杰 《华中科技大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期4-7,共4页

分析了光突发交换(OBS)网络中突发传送方式对TCP短流的影响,以平均发送完成时间为主要性能指标,提出了一种OBS网络中TCP短流的分析模型,导出了一个平均发送完成时间与TCP短流长度、突发丢失率、突发组装时间以及往返时间等之间的递推表... 分析了光突发交换(OBS)网络中突发传送方式对TCP短流的影响,以平均发送完成时间为主要性能指标,提出了一种OBS网络中TCP短流的分析模型,导出了一个平均发送完成时间与TCP短流长度、突发丢失率、突发组装时间以及往返时间等之间的递推表达式.仿真验证了分析的正确性,结果表明,当突发丢失率小于0.01且突发组装时间与往返时间之比小于0.1时,突发传送方式对TCP短流的性能没有影响. 展开更多

关键词 光突发交换 传输控制协议 突发汇聚 短流

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光突发交换网络特性对TCP性能的影响

8

作者 文爱军 靖杰 +1 位作者 刘建平 张卫东 《西安电子科技大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期748-753,共6页

TCP/IP分组在光突发交换(OBS)网络的边缘汇聚成突发,突发通过OBS网络交换.为了定量研究TCP性能与汇聚时间的关系,从汇聚时间的角度仿真TCP性能,发现汇聚时间对TCP性能的影响存在门限值,在该门限值以上TCP吞吐量快速下降;同时发现,当丢... TCP/IP分组在光突发交换(OBS)网络的边缘汇聚成突发,突发通过OBS网络交换.为了定量研究TCP性能与汇聚时间的关系,从汇聚时间的角度仿真TCP性能,发现汇聚时间对TCP性能的影响存在门限值,在该门限值以上TCP吞吐量快速下降;同时发现,当丢失的突发中含有3个以上连续传输段时,TCP发端将超时.理论分析了上述过程,验证了仿真结果的准确性. 展开更多

关键词 光突发交换 汇聚算法 TCP吞吐量

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重组H8N4亚型禽流感病毒的拯救

9

作者 崔鹤馨 李沂 +7 位作者 田宇飞 袁森 凡敏 靖杰 齐延新 郭欢欢 田明尧 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第1期77-81,共5页

将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内... 将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。 展开更多

关键词 病毒拯救 禽流感病毒 重组病毒

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铜绿假单胞菌医院感染的现状及耐药性 被引量：6

10

作者 徐晶 靖杰 《武警医学院学报》 CAS 2010年第1期53-54,共2页

铜绿假单胞菌广泛分布于自然界，是一种常见的条件致病菌。近年来，由于广谱抗菌药物、激素及免疫抑制剂的广泛应用，各种侵入性治疗操作的不断普及，该菌的检出率不断增高，并呈现多重耐药，已成为医院感染的重要病原菌之一，给临床治... 铜绿假单胞菌广泛分布于自然界，是一种常见的条件致病菌。近年来，由于广谱抗菌药物、激素及免疫抑制剂的广泛应用，各种侵入性治疗操作的不断普及，该菌的检出率不断增高，并呈现多重耐药，已成为医院感染的重要病原菌之一，给临床治疗带来了极大的困难。因此，为提高我院感染性疾病的临床治愈率，降低死亡率，为临床提供诊断和治疗依据，我们对我院2006年1月-2008年12月临床分离的428株铜绿假单胞菌的耐药性进行统计分析，现报道如下。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 医院感染 耐药性 监测

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多巴胺受体激动剂治疗小儿多动症的临床疗效及安全性分析 被引量：3

11

作者 靖杰 《中国现代药物应用》 2022年第15期153-155,共3页

目的分析多巴胺受体激动剂治疗小儿多动症的临床疗效和安全性。方法130例多动症患儿,随机分为对照组和观察组,每组65例。对照组患儿给予常规多动症药物治疗,观察组患儿给予多巴胺受体激动剂治疗。比较两组患儿Conners儿童行为量表评分... 目的分析多巴胺受体激动剂治疗小儿多动症的临床疗效和安全性。方法130例多动症患儿,随机分为对照组和观察组,每组65例。对照组患儿给予常规多动症药物治疗,观察组患儿给予多巴胺受体激动剂治疗。比较两组患儿Conners儿童行为量表评分、临床疗效及不良反应发生情况。结果观察组患儿学习行为、心身行为、冲动行为、品行行为评分和多动指数分别为(1.08±0.42)、(0.23±0.20)、(0.82±0.39)、(0.83±0.27)、(1.04±0.39)分,均显著低于对照组的(1.71±0.60)、(0.72±0.51)、(1.81±0.86)、(1.42±0.53)、(2.03±0.75)分,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗总有效率92.31%高于对照组的76.92%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率6.15%显著低于对照组的18.46%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对小儿多动症应用多巴胺受体激动剂治疗可以明显提升临床疗效,且总体安全性较好,是一种比较理想的治疗药物,值得临床推广应用。 展开更多

关键词 小儿多动症 多巴胺受体激动剂 盐酸哌甲酯缓释片 吡贝地尔缓释片

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复方嗜酸乳杆菌片联合醒脾养儿颗粒治疗小儿肠炎的临床价值研究 被引量：1

12

作者 靖杰 《中国现代药物应用》 2022年第17期128-130,共3页

目的探析小儿肠炎治疗中应用复方嗜酸乳杆菌片联合醒脾养儿颗粒的临床价值。方法92例小儿肠炎患儿,根据治疗方法不同分为对照组与观察组,各46例。对照组采用复方嗜酸乳杆菌片治疗,观察组采用复方嗜酸乳杆菌片联合醒脾养儿颗粒治疗。对... 目的探析小儿肠炎治疗中应用复方嗜酸乳杆菌片联合醒脾养儿颗粒的临床价值。方法92例小儿肠炎患儿,根据治疗方法不同分为对照组与观察组,各46例。对照组采用复方嗜酸乳杆菌片治疗,观察组采用复方嗜酸乳杆菌片联合醒脾养儿颗粒治疗。对比两组治疗效果、症状改善时间及治疗前后炎症因子[超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、电解质[钠(Na)、氯(Cl)]水平。结果观察组治疗总有效率95.65%高于对照组的78.26%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组脱水、食欲、腹泻改善时间分别为(1.57±0.53)h、(1.35±0.75)d、(2.65±1.22)h,均短于对照组的(2.67±0.74)h、(2.57±0.95)d、(3.93±1.83)h,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组hs-CRP、IL-6、TNF-α水平低于本组治疗前,IL-10水平高于本组治疗前,且观察组hs-CRP、IL-6、TNF-α水平低于对照组,IL-10水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组Na、Cl水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论复方嗜酸乳杆菌片联合醒脾养儿颗粒治疗小儿肠炎效果明确,可快速缓解临床症状,降低机体炎性反应,纠正电解质紊乱情况,值得广泛推广及应用。 展开更多

关键词 小儿肠炎 复方嗜酸乳杆菌片 醒脾养儿颗粒 疗效

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大学综合英语教学中实用性英语教学策略研究 被引量：3

13

作者 靖杰 《福建广播电视大学学报》 2021年第3期72-75,共4页

在大学综合英语教学中应用实用性英语教学,有利于丰富学生学习的知识面,提升学生自身知识储备和认知能力,还能给予学生良好的学习帮助。基于此,现分析大学综合英语教学中实用性英语教学的价值,结合实用性英语教学的目的性、适应性、指... 在大学综合英语教学中应用实用性英语教学,有利于丰富学生学习的知识面,提升学生自身知识储备和认知能力,还能给予学生良好的学习帮助。基于此,现分析大学综合英语教学中实用性英语教学的价值,结合实用性英语教学的目的性、适应性、指导性特点,提出当前大学综合英语教学中实用性英语教学存在的问题,并提出教学策略,以期促进实用性英语教学改革工作的发展。 展开更多

关键词 大学综合英语 实用性英语 教学 分析

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喜炎平注射液治疗小儿秋季腹泻的疗效和安全性观察

14

作者 靖杰 《中国现代药物应用》 2022年第19期132-134,共3页

目的 分析喜炎平注射液治疗小儿秋季腹泻的临床价值。方法 82例秋季腹泻患儿,根据均衡原则分为对照组和研究组,每组41例。对照组患儿采用常规治疗,研究组患儿采用喜炎平注射液治疗。对比两组患儿的治疗效果、症状缓解时间、住院时间、... 目的 分析喜炎平注射液治疗小儿秋季腹泻的临床价值。方法 82例秋季腹泻患儿,根据均衡原则分为对照组和研究组,每组41例。对照组患儿采用常规治疗,研究组患儿采用喜炎平注射液治疗。对比两组患儿的治疗效果、症状缓解时间、住院时间、不良反应发生情况。结果 研究组患儿止泻时间、退热时间、呕吐缓解时间、住院时间分别为(2.39±0.62)、(2.18±0.54)、(1.87±0.46)、(5.04±0.93)d,均短于对照组的(3.28±0.74)、(3.42±0.69)、(2.59±0.53)、(6.67±1.04)d,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组患儿不良反应发生率为2.44%(1/41),低于对照组患儿的14.63%(6/41),差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组患儿治疗总有效率为97.56%(40/41),高于对照组的80.49%(33/41),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 采用喜炎平注射液治疗小儿秋季腹泻疗效显著,可快速缓解患儿临床症状,加快康复进程,且药物安全性理想,具有临床推广价值。 展开更多

关键词 喜炎平注射液 不良反应 小儿秋季腹泻 疗效

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浅析英语阅读中的文化教学——以《英语泛读教程》为例

15

作者 靖杰 《江西电力职业技术学院学报》 CAS 2021年第9期63-64,共2页

英语教师应秉承契合性、适合性、人本性、跨文化等原则,对英语阅读进行渗透文化教育,根据英语课程内容设计切实可行的文化教学措施。以《英语泛读教程》为例,探讨英语阅读中的文化教学策略。

关键词 英语阅读 文化教学 《英语泛读教程》

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房建工程造价控制的影响因素及有效措施分析

16

作者 靖杰 《今天》 2020年第7期217-218,共2页

工程造价管理在房建项目中的应用,重点是为了把控好资源、资金的投入使用,健全财务经费的保障机制,促进企业经济效益的提升。当前我国由于城市化建设进程逐渐饱和,房建企业的竞争愈发激烈,利益空间被进一步压缩。为了保证自身生存发展,... 工程造价管理在房建项目中的应用,重点是为了把控好资源、资金的投入使用,健全财务经费的保障机制,促进企业经济效益的提升。当前我国由于城市化建设进程逐渐饱和,房建企业的竞争愈发激烈,利益空间被进一步压缩。为了保证自身生存发展,还需要重视工程造价的管理,通过合理的造价成本管控来提升经济效益。在阐述房建项目工造造价管理意义和相关因素的基础上,探究了优化工程造价管理的相关对策。 展开更多

关键词 房建工程 工程造价 影响因素 管理 对策

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QuilA为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫评价 被引量：5

17

作者 靖杰 鲁会军 +5 位作者 刘昊 刘存霞 刘燕瑜 任静强 陆飞 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第1期1-4,共4页

目的选用Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫小鼠,评价免疫效果。方法将pVAX1-H3-EHA-H1HA1new,pVAX1-H3-H1HA new,pVAX1-EHA等3种候选核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,进行细胞免疫和体液免疫水平检测。结果体液免疫检测显示,... 目的选用Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫小鼠,评价免疫效果。方法将pVAX1-H3-EHA-H1HA1new,pVAX1-H3-H1HA new,pVAX1-EHA等3种候选核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,进行细胞免疫和体液免疫水平检测。结果体液免疫检测显示,免疫后35d,pVAX1-H3HA-EHA-H1HA1new免疫组小鼠产生H1亚型流感病毒特异性体液免疫应答,且抗体水平略高于其他免疫组。细胞免疫检测显示,当受到H1亚型流感病毒抗原刺激时,各免疫组T淋巴细胞均表现出特异性增殖反应和CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞增多,各免疫组小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10及脾脏淋巴细胞IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05)。结论以Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感多表位疫苗可诱导免疫小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。 展开更多

关键词 流感病毒 Quil A DNA疫苗 免疫

原文传递

3种常见呼吸道病毒检测基因芯片的制备 被引量：6

18

作者 崔鹤馨 田明尧 +8 位作者 姜庆利 袁森 田宇飞 李沂 刘昊 靖杰 阎富龙 金宁一 朱光泽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第2期115-119,共5页

目的建立一种可同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒的基因芯片方法。方法根据GenBank已发表的鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的基因序列,应用生物学软件设计相应的引物和寡核苷酸探针,构建检测芯片;使用巢式PCR扩增标记目的片段... 目的建立一种可同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒的基因芯片方法。方法根据GenBank已发表的鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的基因序列,应用生物学软件设计相应的引物和寡核苷酸探针,构建检测芯片;使用巢式PCR扩增标记目的片段,将其与检测基因芯片进行杂交和扫描分析;通过特异性、灵敏性和重复性试验评估基因芯片方法。结果设计的全部探针均能与相应的标记样品特异性杂交,其中探针1a和1b可特异检测鼻病毒;探针2a、2b和2c可特异检测呼吸道合胞病毒,探针3a和3b可特异检测腺病毒。基因芯片法检测3种病毒的最低拷贝数分别是2.59×102个/μl、2.21×101个/μl和2.05×102个/μl。结论构建的基因芯片可特异性检测样品中低滴度的鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒,有望为临床提供确诊依据。 展开更多

关键词 鼻病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒 巢式PCR 基因芯片

原文传递

新城疫病毒NP和P基因辅助质粒的构建及鉴定 被引量：6

19

作者 陈兴 阎富龙 +7 位作者 徐一鸣 赵权 肖朋朋 郭海宁 靖杰 辛舒 鲁会军 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第6期500-503,508,共5页

目的构建新城疫病毒JL02/2000株P和NP基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。方法根据新城疫病毒(JL02/2000毒株)的全基因组中的NP、P基因分别设计引物,应用RT-PCR方法扩增NP基因和P基因... 目的构建新城疫病毒JL02/2000株P和NP基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。方法根据新城疫病毒(JL02/2000毒株)的全基因组中的NP、P基因分别设计引物,应用RT-PCR方法扩增NP基因和P基因,将扩增的NP基因和P基因片段连接到pMD18-T载体上,限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ酶切鉴定确认后回收目的条带,分别插入到真核表达载体pCI上,经测序确认pCI-NP、pCI-P辅助质粒的构建。将pCI-NP、pCI-P转染BHK-21细胞,两次换液,72h后回收细胞,经RT-PCR检测NP和P基因片段。结果构建的辅助质粒pCI-NP和pCI-P经双酶切和测序鉴定到目的片段。pCI-NP、pCI-P转染后,RT-PCR检测到NP和P基因片段。结论新城疫病毒pCI-NP、pCI-P辅助质粒构建成功,pCI-NP、pCI-P可在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 NP基因 P基因 辅助质粒 鉴定

原文传递

转瓶培养与生物反应器微载体培养重组腺病毒的比较 被引量：5

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作者 郭海宁 张萍 +12 位作者 韩继成 靖杰 曹亮 肖朋朋 解长占 李一权 马海彬 南福龙 崔卓栋 李霄 田明尧 鲁会军 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第1期1-4,共4页

目的分别用3L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养人胚胎肾细胞（HEK-293细胞）并接种H3型流感重组腺病毒,比较两种方法培养细胞及重组腺病毒的效果。方法分别用3L转瓶和7L生物反应器培养HEK-293细胞。转瓶每24h取样,生物反应器每12h取样... 目的分别用3L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养人胚胎肾细胞（HEK-293细胞）并接种H3型流感重组腺病毒,比较两种方法培养细胞及重组腺病毒的效果。方法分别用3L转瓶和7L生物反应器培养HEK-293细胞。转瓶每24h取样,生物反应器每12h取样,记录细胞总数。待细胞长满表面85%~90%时接种流感重组腺病毒,完全病变后收取病毒液并测定病毒滴度。结果转瓶培养HEK-293细胞3d,细胞增殖增加1.85~2.45倍,为（3.71~4.90）×107个[（2.95~3.90）×104 cells/cm2],生物反应器培养3d,细胞增长4.72~5.00倍,为（132.15~140.09）×107个[（24.88~28.72）×104cells/cm2]。转瓶培养重组腺病毒滴度为6.85TCID50/ml,生物反应器微载体系统培养腺病毒滴度为7.200TCID50/ml。结论生物反应器微载体系统培养流感重组腺病毒数量和滴度均高于转瓶培养,不但提高了疫苗的产量,还减少了细胞分泌物的残留,增强了疫苗接种的安全性。 展开更多

关键词 转瓶 生物反应器 微载体 HEK-293细胞 重组腺病毒

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