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肿瘤新抗原疫苗的设计与优化策略 被引量:1
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作者 涂辉阳 韩为东 张斌 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第2期254-266,共13页
随着免疫检查点抑制剂和嵌合抗原受体T细胞疗法在不同适应证中的研究和临床应用,免疫治疗已经彻底改变了多种肿瘤的治疗方式。肿瘤新抗原疫苗作为一种前景广阔的免疫治疗方法,旨在激发针对新抗原的特异性T细胞反应。新抗原具有高度特异... 随着免疫检查点抑制剂和嵌合抗原受体T细胞疗法在不同适应证中的研究和临床应用,免疫治疗已经彻底改变了多种肿瘤的治疗方式。肿瘤新抗原疫苗作为一种前景广阔的免疫治疗方法,旨在激发针对新抗原的特异性T细胞反应。新抗原具有高度特异性,能够诱导和扩展肿瘤特异性T细胞库,即表位扩展。初步临床研究表明,通过快速、经济、高效的合成生物学技术,新抗原肿瘤疫苗已经展现出强大的肿瘤特异性免疫原性和抗肿瘤活性的初步证据。本文详细探讨了肿瘤新抗原的来源、发现与鉴定,以及新抗原疫苗的分类和免疫接种方案。还总结了肿瘤新抗原疫苗的优化策略,包括对预测算法、疫苗结构、免疫原性、给药方式和递送系统等方面的优化,以及联合佐剂、放化疗、免疫检查点抑制剂等方式,为个性化免疫疗法的发展提供了新的思路。 展开更多
关键词 新抗原 肿瘤疫苗 免疫治疗 合成生物学 个体化治疗
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一个新的白血病相关基因LRP16全长cDNA的克隆、序列分析及表达特征 被引量:60
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作者 韩为东 于力 +5 位作者 楼方定 王全顺 赵瑜 史子江 焦宏远 周建军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期209-214,共6页
克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,... 克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,再设计引物进行 c DNA末端快速扩增(RACE技术 ) .采用 Northern印迹方法进行组织表达分析 .以高通量基因组序列 (HTGS)数据库为基础进行染色体定位 .对构建的克隆菌用 IPTG诱导重组蛋白表达后进行 SDS- PAGE,同时对重组体测序确证 .钓取了该基因全长 c DNA、推导所编码的氨基酸序列 ,并将该基因定位于染色体1 1 q1 2 .2 .原核表达筛选获得了该基因重组子的一个缺失体 .对 LRP1 6基因全长 c DNA的序列分析提示 ,该基因可能编码两种 N端不同的蛋白质 ,且该基因的转录本可能存在一种丰度较低的剪接体 . 展开更多
关键词 白血病 相关基因 LRP16 重组蛋白 原核表达 CDNA 克隆 序列分析
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小干扰RNA抑制LRP16基因表达限制了MCF-7乳腺癌细胞增殖 被引量:22
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作者 韩为东 李琦 +4 位作者 赵亚力 母义明 李雪 宋海静 陆祖谦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期113-119,共7页
雌激素雌二醇上调人乳腺癌细胞MCF 7中LRP16基因表达 ,该基因过表达促进MCF 7细胞增殖 .为进一步探讨LRP16基因不同表达水平对MCF 7细胞增殖的影响以及对雌激素的反应性增殖能力 ,采用针对LRP16基因特异的小干扰RNA策略 ,通过逆转录病... 雌激素雌二醇上调人乳腺癌细胞MCF 7中LRP16基因表达 ,该基因过表达促进MCF 7细胞增殖 .为进一步探讨LRP16基因不同表达水平对MCF 7细胞增殖的影响以及对雌激素的反应性增殖能力 ,采用针对LRP16基因特异的小干扰RNA策略 ,通过逆转录病毒介导及抗性筛选构建了LRP16基因被稳定抑制的 2个MCF 7细胞系 ,针对绿色荧光蛋白的干扰序列作为阴性对照 .Northern印迹实验检测了LRP16基因在各个细胞株中mNRA的水平 ,与对照组细胞比较 ,针对LRP16基因不同位置的 2个小干扰RNA可分别将该基因抑制 90 %和 6 0 % .细胞增殖试验结果显示 ,MCF 7细胞中LRP16基因表达抑制率越高 ,细胞增殖速率减慢越显著 (P <0 0 5 ) ;软琼脂集落形成试验结果显示 ,抑制LRP16基因在MCF 7细胞中表达 ,限制了细胞锚定非依赖性生长 ;细胞周期分析结果表明 ,LRP16基因抑表达使MCF 7细胞G1 S周期转换受抑 ;Western印迹结果表明 ,LRP16基因表达抑制的细胞中细胞周期蛋白E及细胞周期蛋白D1蛋白水平显著下调 ,但未检测到P5 3及Rb蛋白表达水平的影响 .雌二醇刺激的增殖实验结果显示 ,抑制LRP16基因表达没有消除MCF 7细胞的反应性增殖特征 .上述结果表明 ,LRP16基因表达量与MCF 7细胞增殖能力密切相关 ,抑制其表达可有效限制MCF 7细胞的增殖能力 ,提? 展开更多
关键词 LRP16 小干扰RNA MCF-7 增殖 软琼脂集落形成试验 G1/S期调控 雌二醇
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RACE技术在钓取白血病相关基因LRP16全长cDNA中的应用 被引量:26
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作者 韩为东 于力 +4 位作者 楼方定 王全顺 赵瑜 史子江 靳海杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第1期18-21,共4页
LRP16是我们应用甲基化敏感的限制性界标基因组扫描 (restrictionlandmarkgenomicscanning ,RLGS)技术时发现的一个与白血病复发相关的新基因。为钓取这一新基因的全长cDNA ,本实验采用了cDNA末端快速扩增法 (rapidamplificationofcDNAe... LRP16是我们应用甲基化敏感的限制性界标基因组扫描 (restrictionlandmarkgenomicscanning ,RLGS)技术时发现的一个与白血病复发相关的新基因。为钓取这一新基因的全长cDNA ,本实验采用了cDNA末端快速扩增法 (rapidamplificationofcDNAend ,RACE)。通过对RACE法若干步骤进行优化 ,克隆得到了LRP16基因cDNA的 5′ 与 3′ 非翻译区 ,进而获得其全长及完整的开放阅读框架 ,并作为新基因被GenBank收录。上述结果表明 ,RACE技术是钓取未知基因全长cDNA敏感而快速的方法 ,尤其是对 5′ 及 3′ 展开更多
关键词 白血病相关基因 LRP16基因 CDNA RACE技术
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LRP16通过调控E-钙黏着蛋白的表达促进MCF-7细胞的侵袭生长 被引量:17
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作者 韩为东 孟元光 +6 位作者 廖代祥 李琦 伍志强 司艺玲 郝好杰 母义明 赵亚力 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期724-732,共9页
LRP16在原代乳腺癌组织中表达水平与雌激素受体α(ERα)表达状态以及腋窝淋巴结侵袭数目密切相关.为研究LRP16基因对乳腺癌MCF7细胞侵袭生长的影响,并探讨涉及的分子机制,采用基质胶黏附实验与Transwell方法,检测内源性LRP16表达抑制MCF... LRP16在原代乳腺癌组织中表达水平与雌激素受体α(ERα)表达状态以及腋窝淋巴结侵袭数目密切相关.为研究LRP16基因对乳腺癌MCF7细胞侵袭生长的影响,并探讨涉及的分子机制,采用基质胶黏附实验与Transwell方法,检测内源性LRP16表达抑制MCF7细胞的体外黏附、侵袭生长与迁移特征.结果表明,抑制LRP16在MCF7细胞中的表达,降低了细胞的体外黏附、侵袭与迁移能力;采用FVB小鼠进行的实验性转移试验结果显示,抑制LRP16显著降低了MCF7细胞的肺转移结节数目;为探索可能的分子机制,采用Western印迹方法,检测了LRP16对乳腺癌转移相关分子MMP2,MMP9,CD44和E钙黏着蛋白表达的影响,结果在LRP16抑制的MCF7细胞中只有E钙黏着蛋白蛋白表达上调.进一步的Northern印迹与免疫组化实验结果表明,抑制LRP16可上调MCF7细胞中E钙黏着蛋白基因的mRNA与蛋白表达水平;共转染与双荧光素酶方法检测LRP16对E钙黏着蛋白基因启动子的表达调控效应,结果显示,LRP16抑制E钙黏着蛋白基因基因5′近端启动子的转录激活,该抑制效应选择性存在于内源性ERα阳性细胞,并且依赖于雌激素的存在;染色质免疫共沉淀方法(ChIP)检测ERα与E钙黏着蛋白基因启动子的相互作用,结果显示,在LRP16基因表达缺陷的MCF7细胞中,ERα抗体沉淀到E钙黏着蛋白基因启动子的DNA序列;上述研究结果表明,抑制LRP16基因表达,削弱了激素依赖型乳腺癌细胞的侵袭生长能力,其分子机制涉及了LRP16通过ERα介导对E钙黏着蛋白基因基因转录激活的调控. 展开更多
关键词 LRP16 E-钙黏着蛋白 雌激素受体Α MCF-7 侵袭生长
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LRP16对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响 被引量:18
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作者 韩为东 李雪岭 +4 位作者 卢学春 徐周敏 于力 李明 母义明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期672-676,共5页
用Northern印迹方法检测雌二醇 (17β E2 )对LRP16mRNA表达的时间及剂量依赖性调控作用 .构建LRP16基因启动子序列调控的萤光素酶报告子 (pS0 ) ,并与雌激素受体α和 β(ERα和ERβ)表达载体共转染COS 7和MCF 7细胞后测定萤光素酶活性 .... 用Northern印迹方法检测雌二醇 (17β E2 )对LRP16mRNA表达的时间及剂量依赖性调控作用 .构建LRP16基因启动子序列调控的萤光素酶报告子 (pS0 ) ,并与雌激素受体α和 β(ERα和ERβ)表达载体共转染COS 7和MCF 7细胞后测定萤光素酶活性 .将LRP16基因的表达载体转染MCF 7细胞 ,测定过表达LRP16对细胞的生长特性的影响 .17β E2 使MCF 7细胞中LRP16mRNA表达水平增加 ,增加幅度未显示出 17β E2 培养时间和剂量的依赖性 .pS0 与ERα表达载体共转染细胞的相对萤光素酶活性较非共转染组 (对照组 )及pS0 ERβ表载体共转染组升高 5~ 10倍 .LRP16基因过表达促进MCF 7细胞的增殖 .研究表明 ,雌激素可能通过ERα上调乳腺癌MCF 展开更多
关键词 LRP16 乳腺癌 细胞增殖 雌二醇
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抑制LRP16基因表达增加了肿瘤细胞辐射敏感性 被引量:17
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作者 韩为东 杨东 +4 位作者 李琦 张晓亮 赵亚力 马林 母义明 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2005年第3期183-185,共3页
目的:探索抑制LRP16基因表达对肿瘤细胞辐射治疗敏感性的影响。方法:采用逆转录病毒介导的小干扰RNA策略,建立了LRP16基因表达被稳定抑制的MCF7及HeLa细胞系,采用电离辐射及紫外线(UV)分别照射LRP16基因被稳定抑制表达的MCF7和HeLa细胞... 目的:探索抑制LRP16基因表达对肿瘤细胞辐射治疗敏感性的影响。方法:采用逆转录病毒介导的小干扰RNA策略,建立了LRP16基因表达被稳定抑制的MCF7及HeLa细胞系,采用电离辐射及紫外线(UV)分别照射LRP16基因被稳定抑制表达的MCF7和HeLa细胞,于照射后不同的时间点进行Hoechst33342染色以检测细胞凋亡率,并进行DNA片段化分析;胎盘蓝染色检测不同时间点的细胞死亡率。结果:照射后2~10h之间,LRP16基因表达抑制组细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05);照射后10h胎盘蓝方法计数死活细胞,发现LRP16基因抑制组细胞的死亡率>40%,而对照组的死亡率在15%~20%之间;24h计数细胞死亡率发现LRP16基因抑制组细胞与对照组细胞差别不明显(P>0.05)。结论:抑制LRP16基因在肿瘤细胞中的表达增加了瘤细胞的辐射治疗敏感性,其机制可能是通过抑制LRP16基因表达干预了辐射诱导DNA损伤反应的早期信号途径。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 LRP16基因 辐射耐受性 抑制作用 基因表达 辐射敏感性 基因编码
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LRP16基因的SAGE谱及其在正常血细胞、白血病细胞中的表达状况 被引量:33
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作者 韩为东 楼方定 +3 位作者 于力 王全顺 韩小平 李续建 《军医进修学院学报》 CAS 2002年第3期161-163,共3页
目的 :通过信息学和实验学的方法检测LRP1 6基因在肿瘤细胞以及在造血发育不同阶段的表达状况 ,探讨其在肿瘤发生、发展以及在血细胞成熟过程中可能的作用。方法 :以NCBI提供的高通量CGAP SAGEmap数据库为实验对象 ,“VirtualNorthern... 目的 :通过信息学和实验学的方法检测LRP1 6基因在肿瘤细胞以及在造血发育不同阶段的表达状况 ,探讨其在肿瘤发生、发展以及在血细胞成熟过程中可能的作用。方法 :以NCBI提供的高通量CGAP SAGEmap数据库为实验对象 ,“VirtualNorthern”程序为实验工具 ,分析比较了LRP1 6基因在多种肿瘤组织、细胞系和相应正常组织中的表达谱 ;采用半定量RT PCR方法检测了该基因在多种正常血细胞及白血病细胞中的表达量。结果 :SAGE结果显示LRP1 6在人类多种肿瘤细胞中的表达量明显高于其正常对应组织。脐血中未检测到LRP1 6表达 ,正常骨髓及经G CSF动员的PBSC(peripheralbloodstemcells)中的表达量明显低于正常人外周血、原代白血病细胞及白血病细胞系 (P <0 0 0 1 )。结论 :LRP1 6在不同的血细胞中表达量不同。同时表明LRP1 6与急性白血病等多种肿瘤的发生、发展存在相关性 ;在初诊与复发白血病中 ,LRP1 展开更多
关键词 LRP16基因 SAGE谱 血细胞 白血病 基因表达 基因文库
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LRP16编码蛋白的信息学分析及亚细胞定位研究 被引量:25
9
作者 韩为东 楼方定 +4 位作者 于力 韩小平 王全顺 李楠 周春喜 《军医进修学院学报》 CAS 2002年第4期277-279,共3页
目的 :探讨LRP16基因编码蛋白的基本生物学特征及其在真核细胞中的分布。方法 :以Internet为操作平台、以国际公共生物数据库为实验材料、应用生物学软件为研究工具对LRP16编码蛋白进行了全方位的生物信息学分析。在此基础上 ,将该基因... 目的 :探讨LRP16基因编码蛋白的基本生物学特征及其在真核细胞中的分布。方法 :以Internet为操作平台、以国际公共生物数据库为实验材料、应用生物学软件为研究工具对LRP16编码蛋白进行了全方位的生物信息学分析。在此基础上 ,将该基因的编码序列重组到pEGFP N1真核表达中 ,融合在绿色荧光蛋白 (GFP)的N端转染HeLa细胞 ,激光共聚焦显微镜观察荧光分布。结果 :LRP16编码产物主要与一些RNA病毒产生的与核酸结合的非结构蛋白有较高相似性 ,含有与功能未知的Motif:Hismacro、DUF2 7、A1pp相似的结构域。激光共聚焦显微镜扫描发现GFP分布于细胞核内。结论 :LRP16基因编码一种起源古老、进化缓慢的核蛋白因子 。 展开更多
关键词 亚细胞定位 LRP16蛋白 NF-ΚΒ 医学信息学 蛋白质公共数据库
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雌激素上调LRP16基因表达的研究 被引量:14
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作者 韩为东 母义明 +4 位作者 宋海静 卢学春 徐周敏 李续建 于力 《军医进修学院学报》 CAS 2003年第3期196-198,共3页
目的 :鉴定LRP16基因的表达调控途径并探讨其可能机制。方法 :对LRP16基因进行启动子序列顺式作用元件和信息学角度的SAGE(serialanalysisofgeneexpression)谱分析 ,提示雌激素对其可能具有转录调控作用。为证实这一作用 ,构建了LRP16... 目的 :鉴定LRP16基因的表达调控途径并探讨其可能机制。方法 :对LRP16基因进行启动子序列顺式作用元件和信息学角度的SAGE(serialanalysisofgeneexpression)谱分析 ,提示雌激素对其可能具有转录调控作用。为证实这一作用 ,构建了LRP16基因启动子序列 (2 6kb)调控的荧光素酶报告子 (pS0 ) ,并与雌激素受体α和β(ERα ,ERβ)真核表达载体共转染COS 7和MCF 7细胞 ,加入雌二醇 (β E2 )培养 ,luciferaseassay方法测定相对荧光素酶活性。结果 :报告子 pS0 与ERα真核表达载体共转染细胞的相对荧光素酶活性较非共转染组及 pS0 /ERβ表达载体共转染组显著升高 ,并且在两种细胞中的升高幅度接近。结论 :LRP16是受雌激素调控的一个新识别的靶基因 ,具体调控途径由雌激素变构激活的ERα直接介导 ,其临床意义有待进一步研究。 展开更多
关键词 雌激素 LRP16 基因表达调控 雌二醇 荧光素酶 活性
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逆转录病毒介导的小干扰RNA稳定抑制了LRP16基因表达 被引量:5
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作者 韩为东 李琦 +4 位作者 赵亚力 母义明 李雪 宋海静 郝好杰 《生物技术通讯》 CAS 2004年第4期326-329,共4页
RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19~21nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究。通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略。首先选择了LRP16基因mRN... RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19~21nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究。通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略。首先选择了LRP16基因mRNA翻译起始位点下游+374nt和+668nt位置分别作为小干扰RNA作用靶位点,通过设计21nt的反义序列,构建了pL374和pL6682个以pLPC为骨架的逆转录病毒载体,针对绿色荧光蛋白序列构建pGFPi载体做阴性对照,茎环样结构小RNA由U6启动子驱动转录生成。3个载体分别与VSVG共转染293GP2细胞,包装假病毒,再分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定生成小干扰RNA的细胞。Northernblot实验表明pL374和pL668可分别将LRP16基因抑制90%和60%,为进一步研究LRP16基因功能奠定了基础。另外,首次将mU6启动子序列插入pLPC逆转录病毒载体骨架,将其改造为可介导发夹环样小干扰RNA产生的质粒载体。 展开更多
关键词 逆转录病毒 小干扰RNA MCF-7细胞 LRP16基因 表达 抑制
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LRP16与ERα相互作用增强ERα介导的转录活性 被引量:2
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作者 韩为东 伍志强 +6 位作者 臧丽 赵亚力 孟元光 李琦 司艺龄 郝好杰 母义明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期566-573,共8页
LRP16是一个雌激素(E2)通过受体α(ERα)诱导表达的靶基因,LRP16不仅促进人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,而且促进细胞的侵袭生长,但对LRP16作用的分子机制尚不清楚.首先,检测到LRP16表达缺陷明显削弱了MCF-7细胞对E2的反应性增殖能力;采用Nor... LRP16是一个雌激素(E2)通过受体α(ERα)诱导表达的靶基因,LRP16不仅促进人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,而且促进细胞的侵袭生长,但对LRP16作用的分子机制尚不清楚.首先,检测到LRP16表达缺陷明显削弱了MCF-7细胞对E2的反应性增殖能力;采用Northern印迹与Western印迹法,进一步检测到抑制LRP16表达,明显损害了ERα靶基因对E2诱导上调的反应性,这些基因包括了cyclinD1,c-myc,c-fos,MTA3,pS2和维甲酸受体α基因(RARα)等;以上结果提示,LRP16参与了ERα介导的信号途径.将ERα模式启动子报告基因3×ERE-TATA-Luc,ERα以及LRP16表达载体共转染MCF-7与HeLa细胞.结果发现,LRP16增强了ERα对报告基因的转录激活,并呈现对LRP16的剂量依赖性;进而采用GST-pulldown以及免疫共沉淀方法证实了LRP16与ERα之间的直接相互作用,该作用不依赖于E2的存在,但可被E2增强;采用哺乳动物双杂交方法进一步证实了ERα与LRP16相互作用位点存在于A/B区的激活功能域-1(AF-1).以上结果表明,LRP16是ERα的一个共激活因子,通过相互作用,LRP16增强了ERα介导转录活性.该研究为LRP16促进ERα阳性乳腺癌细胞增殖与侵袭生长提供了合理的分子解释. 展开更多
关键词 雌激素受体Α LRP16 相互作用 共激活因子
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FHL2通过相互作用抑制Id2的功能活性 被引量:2
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作者 韩为东 赵亚力 +4 位作者 伍志强 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期810-817,共8页
分化抑制蛋白2(Id2)通过抑制碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)类转录因子的功能活性调控多种组织细胞的分化发育,并参与人类多种肿瘤的发生与进展.Id2相互作用蛋白可能调控其翻译后的功能活性.本研究以HLH结构域缺失的Id2作为诱饵蛋白,采用酵母... 分化抑制蛋白2(Id2)通过抑制碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)类转录因子的功能活性调控多种组织细胞的分化发育,并参与人类多种肿瘤的发生与进展.Id2相互作用蛋白可能调控其翻译后的功能活性.本研究以HLH结构域缺失的Id2作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法对MCF-7 cDNA文库进行筛选,识别了1个新的Id2相互作用蛋白FHL2(属于LIM蛋白家族的一员),哺乳动物双杂交实验系统验证了Id2与FHL2之间的相互作用,同时证实,该作用不依赖于Id2中的HLH结构域;GST-pulldown、免疫共沉淀方法,进一步证实FHL2/Id2之间的相互作用;免疫荧光共定位实验结果证实,FHL2/Id2相互作用主要发生在细胞核内;共转染实验结果发现,FHL2通过相互作用阻抑了Id2对bHLH类转录因子E47的功能抑制活性.总之,本研究识别了1个新的Id2相互作用蛋白FHL2,通过直接的相互作用,FHL2抑制了Id2的功能活性,FHL2可能参与调控Id2介导的细胞分化与发育过程,并可能参与肿瘤的发生与进展. 展开更多
关键词 FHL2 分化抑制蛋白2(Id2) 相互作用 抑制子
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抑制雌激素调控的靶基因LRP16表达能削弱ERα介导的转录激活活性 被引量:1
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作者 韩为东 臧丽 +6 位作者 伍志强 李琦 赵亚力 巴建明 陆菊明 潘长玉 母义明 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期186-189,共4页
目的:探讨抑制雌激素(E2)调控的靶基因LRP16表达对雌激素受体α(ERα)介导转录激活活性的影响。方法:将针对LRP16合成的小于扰RNA,与ERα表达载体、雌激素反应性元件荧光素酶报道载体(pGL-3-S10或3×ERE-Luc)共转染乳腺癌细胞MCF-7... 目的:探讨抑制雌激素(E2)调控的靶基因LRP16表达对雌激素受体α(ERα)介导转录激活活性的影响。方法:将针对LRP16合成的小于扰RNA,与ERα表达载体、雌激素反应性元件荧光素酶报道载体(pGL-3-S10或3×ERE-Luc)共转染乳腺癌细胞MCF-7,双荧光素酶检测方法测定pGL-3-S10或3×ERE-Luc报道子的相对荧光素酶活性;E2刺激培养已建立的稳定抑制LRP16表达的MCF-7细胞,Northern blot方法检测比较具有不同LRP16表达水平的MCF-7细胞中ERα下游靶基因对E2的反应性变化。结果:抑制LRP16表达降低了ERα对其反应性报道子(pGL-3-S10和3×ERE-Luc)的激活活性;同时也降低了ERα下游靶基因对E2的反应性上调效应,其中包括E2F1、维甲酸受体α(RARα)、c-fos、cyclin D1和MTA3,但对cathepsin D的表达无影响。结论:抑制ERα靶基因LRP16的表达可以下调ERα介导的转录激活活性,表明LRP16对ERα信号转导通路具有反馈增强效应,提示LRP16在ERα阳性的乳腺癌发生与进展中应有重要作用。 展开更多
关键词 雌激素受体Α 基因表达调控 反式激活(遗传学) 基因 LRP16
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诱导性多潜能干细胞(iPS)研究:现状与展望 被引量:3
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作者 韩为东 赵亚力 付小兵 《中国工程科学》 2009年第5期81-87,共7页
通过特定的基因组合与转染可以将已分化的体细胞诱导重编程为多潜能干细胞(iPS),是近年来干细胞研究领域最令人瞩目的一项新的干细胞制造技术。与胚胎干细胞(ES)不同,iPS细胞的制造不需要毁损胚胎,因而不会涉及更多的伦理学问题。iPS的... 通过特定的基因组合与转染可以将已分化的体细胞诱导重编程为多潜能干细胞(iPS),是近年来干细胞研究领域最令人瞩目的一项新的干细胞制造技术。与胚胎干细胞(ES)不同,iPS细胞的制造不需要毁损胚胎,因而不会涉及更多的伦理学问题。iPS的出现不仅为体细胞重编程去分化机制的研究注入了新的活力,而且为疾病发生发展相关机制研究与特异的细胞治疗,特别是再生医学带来新的曙光。目前,iPS的研究尚处于初级阶段,文章就iPS的研究现状与应用前景进行综述和展望。 展开更多
关键词 体细胞 重编程 IPS细胞
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雌激素受体α与其靶基因LRP16相互作用的研究 被引量:1
16
作者 韩为东 伍志强 +5 位作者 赵亚力 孟元光 李琦 司艺龄 郝好杰 母义明 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第5期345-347,共3页
目的:既往研究表明LRP16是雌激素受体α(ERα)诱导表达的一个靶基因,但可以反馈激活ERα介导的转录活性,本研究目的在于探讨该反馈效应的分子机制。方法:GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测LRP16与ERα体内外的相互作用。结果:GST-... 目的:既往研究表明LRP16是雌激素受体α(ERα)诱导表达的一个靶基因,但可以反馈激活ERα介导的转录活性,本研究目的在于探讨该反馈效应的分子机制。方法:GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测LRP16与ERα体内外的相互作用。结果:GST-pulldown与CoIP实验结果均表明LRP16与ERα可以直接结合,并且表明该相互作用不依赖于雌激素的存在,但雌激素可以增强二者的结合。结论:LRP16不仅是ERα的一个下游靶基因,而且是ERα的一个共激活因子。 展开更多
关键词 雌激素受体Α LRP16 基因打靶 反式激活因子类
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FHL2通过相互作用抑制分化抑制蛋白家族成员的转录抑制活性 被引量:1
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作者 韩为东 赵亚力 +4 位作者 伍志强 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期791-794,共4页
目的:探讨FHL2与Id(分化抑制蛋白)家族蛋白之间的相互作用及FHL2对Id蛋白功能的调控效应。方法:用GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测FHL2与Id家族蛋白成员之间在体内外的相互作用;用共转染与报告基因驱动的萤光素酶方法检测FHL2... 目的:探讨FHL2与Id(分化抑制蛋白)家族蛋白之间的相互作用及FHL2对Id蛋白功能的调控效应。方法:用GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测FHL2与Id家族蛋白成员之间在体内外的相互作用;用共转染与报告基因驱动的萤光素酶方法检测FHL2对Id蛋白介导转录抑制效应的调控作用。结果:FHL2与Id家族的4个蛋白均存在直接的相互作用关系,表位分析结果显示FHL2蛋白中的第2个LIM结构域在FHL2/Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构域在介导FHL2/Id相互作用中是必需的,FHL2/Id相互作用不依赖于Id蛋白中的螺旋-环-螺旋结构;通过相互作用,FHL2阻止了Id蛋白对碱性螺旋-环-螺旋转录因子E47转录活性的抑制作用。结论:FHL2是一个新识别的Id蛋白广谱的相互作用因子,通过对Id蛋白功能活性的抑制效应,FHL2可能参与Id介导的多种生物学效应以及肿瘤发生与进展。 展开更多
关键词 FHL2 分化抑制蛋白 相互作用 抑制子
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小鼠LRP16基因同源重组ES细胞克隆的鉴定
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作者 韩为东 伍志强 +4 位作者 赵亚力 司艺玲 母义明 孟元光 Masatoshi Nomura 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2006年第6期406-408,共3页
目的:为深入研究LRP16基因的生理功能,本研究将小鼠LRP16基因特异打靶载体pBΔ16转染小鼠胚胎干细胞(embryon ic stem cell),并筛选同源重组克隆。方法:通过电转染方法将LRP16插入失活型打靶载体导入ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Sou... 目的:为深入研究LRP16基因的生理功能,本研究将小鼠LRP16基因特异打靶载体pBΔ16转染小鼠胚胎干细胞(embryon ic stem cell),并筛选同源重组克隆。方法:通过电转染方法将LRP16插入失活型打靶载体导入ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern b lot方法鉴定同源重组ES细胞克隆。结果:打靶载体成功转染ES细胞,Southern b lot筛选100个抗性克隆,结果显示有一个打靶序列同源重组型插入的ES细胞克隆。结论:筛选到同源重组型ES细胞,为下一步建立LRP16缺失型小鼠并为从整体水平研究LRP16基因的生理功能奠定基础。 展开更多
关键词 LRP16 基因打靶 ES细胞
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FHL2与Id蛋白相互作用的表位分析
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作者 韩为东 赵亚力 +4 位作者 伍志强 司艺玲 杨洁 田丽媛 孟元光 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第2期206-208,共3页
目的:鉴定FHL2与Id家族蛋白成员之间的相互作用及分子表位。方法:GST-pulldown方法检测。结果:FHL2与Id家族的4个成员蛋白均存在直接的相互作用关系,FHL2蛋白中的第二个LIM结构域在FHL2/Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构区域在介导FH... 目的:鉴定FHL2与Id家族蛋白成员之间的相互作用及分子表位。方法:GST-pulldown方法检测。结果:FHL2与Id家族的4个成员蛋白均存在直接的相互作用关系,FHL2蛋白中的第二个LIM结构域在FHL2/Id相互作用中是必需的,Id蛋白N端结构区域在介导FHL2/Id相互作用中是必需的。结论:FHL2是一个新识别的Id蛋白广谱相互作用因子,FHL2可能参与Id介导的多种生物学效应以及肿瘤发生与进展。 展开更多
关键词 FHL2 ID 基因表达调控 蛋白质相互作用图
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表达有淋系分化抗原的急性髓性白血病的临床意义
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作者 韩为东 王椿 +3 位作者 刘秀娥 乔振华 杨林花 杨波 《军医进修学院学报》 CAS 2000年第1期29-31,共3页
目的 :进一步探索淋系分化抗原在急性髓性白血病 ( AML )中的表达特征及其对 AML患者预后的影响。方法 :采用间接免疫荧光法对 84例初诊 AML 患者进行了免疫表型检测 ,并用流式细胞仪对淋、髓两系分化抗原共表者做双标记分析。结果 :84... 目的 :进一步探索淋系分化抗原在急性髓性白血病 ( AML )中的表达特征及其对 AML患者预后的影响。方法 :采用间接免疫荧光法对 84例初诊 AML 患者进行了免疫表型检测 ,并用流式细胞仪对淋、髓两系分化抗原共表者做双标记分析。结果 :84例 AML 中 ,3 0例 ( 3 5 .72 % )有淋系抗原表达 ( ly+ )。对于双表型患者 ,流式细胞仪分析显示其白血病细胞表型不均一。在同等化疗强度基础上 ,ly+ 者较 ly- 者完全缓解 ( CR1 )率低 ,获 CR1 所需时间长 ,CR1 后无病生存期短 ( DFS期 ,P值匀 <0 .0 5 )。多因素分析表明 ly+是影响 AML 患者 DFS期的一个主要危险因素 ( P<0 .0 5 )。结论 :淋系分化抗原在 AML 中的表达具有复杂性 ,ly+的 AML 属于预后不良的临床亚型 。 展开更多
关键词 淋系分化抗原 急性髓性白血病 预后 双表型
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