基于高通量测序对大鼠骨髓干细胞及诱导后成骨细胞的环状RNA表达差异分析研究

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作者 周琦琪 魏薇 +3 位作者 崔杰 韩祥祯 何惠宇 孙皓 《口腔颌面修复学杂志》 2024年第2期88-96,共9页

目的:对环状RNA调控大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及成骨分化的差异表达进行研究,构建大鼠BMSCs全转组录基因数据库,获得特异性基因表达谱,进行功能注释和信号通路等生物信息学分析。方法:采用高通... 目的:对环状RNA调控大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及成骨分化的差异表达进行研究,构建大鼠BMSCs全转组录基因数据库,获得特异性基因表达谱,进行功能注释和信号通路等生物信息学分析。方法:采用高通量测序技术检测大鼠BMSCs的成骨分化过程中环状RNA(circular RNA,circRNA)部分的差异性表达。通过基因本体(gene ontology,GO)注释分析以及京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)进行通路富集分析,对具有差异性表达的环状RNA进行功能注释。结果:在大鼠BMSCs成骨分化过程中,每个样本中预测到的circRNA数量为4230个,每个样本中预测到的特异的circRNA为1820个。高通量测序结果显示,在大鼠BMSCs成骨分化过程中共检测到2822个circRNA;总共检测到29个具有差异性表达的circRNA。结论:发现许多差异表达的circRNA与细胞的成骨分化密切相关。这些差异表达circRNA为潜在调控大鼠BMSCs及成骨分化的分子机制提供线索与依据。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 全转录测序 成骨细胞 基因分析 环状RNA

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数字化技术在口腔种植规培教学中的应用

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作者 韩祥祯 裴培 周琦琪 《中文科技期刊数据库（全文版）教育科学》 2024年第1期0016-0019,共4页

通过对数字化技术展开研究,分析其在口腔种植规培教学中的应用。方法 研究时间为2022年4月—2023年4月,研究对象为我院70例口腔种植科学生。使用随机数表法分组,研究组(n=35)在带教过程中应用数字化技术;对比组(n=35)进行传统规培带教... 通过对数字化技术展开研究,分析其在口腔种植规培教学中的应用。方法 研究时间为2022年4月—2023年4月,研究对象为我院70例口腔种植科学生。使用随机数表法分组,研究组(n=35)在带教过程中应用数字化技术;对比组(n=35)进行传统规培带教。比较两组学生的理论知识和操作技能成绩、Mini-CEX成绩以及满意度评分。结果 研究组35例学生在数字化技术的影响下,理论知识评分为(85.59土5.42)、操作技能评分为(76.68土6.37),高于对比组;医疗面谈为(7.66±0.35)、体格检查为(7.42±1.05)、沟通能力为(7.88±0.57)、临床判断为(7.81±0.44)、人文关怀为(7.94±0.36),高于对比组;满意度评分为(92.48±2.61),高于对比组。两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在口腔种植规培教学中,相较于传统规培带教方式,应用数字化技术的教学效果更加显著,能够提高学生的理论知识和操作技能水平,同时学生在临床中更具沟通能力、判断能力,学生的满意度更高,值得推广应用。 展开更多

关键词 口腔种植 规培教学 数字化技术 方法

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过表达miR-378a促进巨噬细胞向M2极化且抑制巨噬细胞向M1极化

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作者 杨泉 何惠宇 +3 位作者 王思凡 吕尚毅 周琦琪 韩祥祯 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第13期2036-2041,共6页

背景:M2型巨噬细胞具有降低炎症因子及促进组织愈合的功能,因此,如何调节巨噬细胞M2极化是近年来研究的热点,研究发现部分miRNAs具有此功能。目的:探讨miR-378a对Raw264.7巨噬细胞系极化的影响。方法:首先使用脂多糖和干扰素γ协同诱导... 背景:M2型巨噬细胞具有降低炎症因子及促进组织愈合的功能,因此,如何调节巨噬细胞M2极化是近年来研究的热点,研究发现部分miRNAs具有此功能。目的:探讨miR-378a对Raw264.7巨噬细胞系极化的影响。方法:首先使用脂多糖和干扰素γ协同诱导巨噬细胞M1极化,使用白细胞介素4诱导巨噬细胞M2极化,qRT-PCR检测各型细胞中内源性miR-378a的表达,验证miR-378a是否参与巨噬细胞的极化。通过慢病毒载体将miR-378a转染至巨噬细胞,筛选出miR-378a稳定表达的细胞系,使用脂多糖和干扰素γ协同诱导巨噬细胞M1极化,使用白细胞介素4诱导巨噬细胞M2极化,ELISA检测巨噬细胞培养基上清液中M1/M2极化相关细胞因子水平,qRT-PCR检测M1/M2型巨噬细胞极化特征及相关细胞因子的mRNA表达。结果与结论:①诱导巨噬细胞极化后,各组Raw264.7细胞中内源性miR-378a的表达量均升高;②与未转染组比较,转染miR-378a组诱导巨噬细胞M1极化后促炎性细胞因子诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素1β表达显著降低(P<0.05),细胞上清液中诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平也明显降低(P<0.05);③与未转染组比较,转染miR-378a组诱导巨噬细胞M2极化后CD206、白细胞介素10、精氨酸酶Ⅰ的表达显著升高(P<0.05),细胞上清液中CD206、白细胞介素10水平也明显升高(P<0.05);④结果表明:过表达miR-378a促进巨噬细胞向M2极化且抑制巨噬细胞向M1极化。 展开更多

关键词 miR-378a 巨噬细胞 极化 慢病毒 炎症因子

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氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层材料的理化性质及生物相容性

4

作者 吕尚毅 何惠宇 +3 位作者 吾凡别克·巴合提 杨泉 马丽莎 韩祥祯 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第10期1477-1483,共7页

背景:医用钛及钛合金种植体在临床应用中已经取得较好的治疗效果,但是仍存在种植体周围炎、松动、脱落等现象。目的:探究氧化石墨烯涂层材料的理化性能及其对骨髓间充质干细胞的影响。方法:①采用电化学沉积方法在钛片表面分别制备羟基... 背景:医用钛及钛合金种植体在临床应用中已经取得较好的治疗效果,但是仍存在种植体周围炎、松动、脱落等现象。目的:探究氧化石墨烯涂层材料的理化性能及其对骨髓间充质干细胞的影响。方法:①采用电化学沉积方法在钛片表面分别制备羟基磷灰石涂层和氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层,通过扫描电镜、X射线能量色散谱、X射线光电子能谱、X射线衍射仪、拉曼光谱仪、接触角测量仪分析涂层的表面形貌、物相结构、官能团、元素成分及表面亲水性能;②分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,分别接种于纯钛、羟基磷灰石涂层和氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层表面,利用CCK-8法和扫描电镜对材料表面细胞的增殖、形态和生长状态进行评价。结果与结论:①扫描电镜、X射线能量色散谱显示,氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层表面较羟基磷灰石涂层、纯钛更平展、致密及均匀;X射线光电子能谱、X射线衍射、拉曼光谱显示,在钛片表面成功制备了羟基磷灰石涂层、氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层;氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层的亲水性能较羟基磷灰石涂层、纯钛更优;②CCK-8检测显示,随着共培养时间的延长,3组材料表面的骨髓间充质干细胞数量增加,共培养1,4,7 d,氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层表面的细胞增殖吸光度值均高于羟基磷灰石涂层、纯钛(P<0.0001);共培养4 d后的扫描电镜显示,3组材料表面的骨髓间充质干细胞均呈纺锤形,其中氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层表面的细胞具有较好的拉伸性能,呈多边形,细胞边缘可见多个触角黏附于涂层表面,且表面的丝状足伸长量较纯钛和羟基磷灰石涂层多;③结果显示,氧化石墨烯-羟基磷灰石复合涂层材料是一种理化性能及生物学性能良好的涂层材料。 展开更多

关键词 氧化石墨烯 羟基磷灰石 电化学沉积 骨髓间充质干细胞 生物相容性

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数字化模拟教学在口腔种植学实验课教学中的应用

5

作者 裴培 韩祥祯 周琦琪 《中国科技经济新闻数据库 教育》 2024年第1期0143-0146,共4页

在诸多口腔种植学实验课教学模式中,本研究将对数字化模拟教学模式的教学效果进行重点分析探讨。方法 在确定教学学员时,选择一定数量实施研究分析,总人数共确定为50名,在对所有学员进行选取的过程中,将2023年7月-2023年10月为研究设定... 在诸多口腔种植学实验课教学模式中,本研究将对数字化模拟教学模式的教学效果进行重点分析探讨。方法 在确定教学学员时,选择一定数量实施研究分析,总人数共确定为50名,在对所有学员进行选取的过程中,将2023年7月-2023年10月为研究设定的选取时间,对照组患者的人数完全与试验组保持相同,为更明确的论述传统教学模式与数字模拟教学模式的优势与不足,分别将上述两种护理模式作为两组学员需要接受的教学模式。结果 对比理论考试成绩、操作考核成绩、教学满意度等指标中,除两组的颊舌向宽度、颊舌向轴向、种植体深度评分无显著差异外,试验组其他各指标均显著更优,P<0.05。结论 在诸多口腔种植学实验课教学模式中,数字化模拟教学模式具有更佳的教学效果。 展开更多

关键词 口腔种植学 实验课教学 数字化模拟教学 教学效果

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数字化技术在口腔种植规培教学中的应用探索

6

作者 周琦琪 裴培 韩祥祯 《中国科技经济新闻数据库 教育》 2024年第2期0173-0176,共4页

在众多的口腔种植规范化教学模式中,着重分析了数字化技术在口腔种植教学中的作用。方法 在确定了种植科规培医学生后,选取一定的人数开展研究分析,最终确定了60名学生,在选择所有学生时,以2022年7月-2023年10月为研究设置的时间段,种... 在众多的口腔种植规范化教学模式中,着重分析了数字化技术在口腔种植教学中的作用。方法 在确定了种植科规培医学生后,选取一定的人数开展研究分析,最终确定了60名学生,在选择所有学生时,以2022年7月-2023年10月为研究设置的时间段,种植科的学生数量与试验组保持一致,为了更加清楚地了解传统教学模式和数字化技术教学模式的优缺点,将以上两种护理模式分别作为两组所需接受的教学模式。结果 在理论知识和操作技能、DOPS和Mini-CEX成绩、教学满意度评分等进行对比,试验组比对照组均优秀,P<0.05。结论 在大部分口腔种植规培教学模式中,数字化技术模式有更好的教学效果。 展开更多

关键词 口腔种植规培教学 数字化技术 教学效果

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过表达miR-378a修饰骨髓间充质干细胞复合胶原蛋白海绵支架对大鼠股骨缺损的修复作用

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作者 孙皓 蒲胤瑄 +4 位作者 刘佳林 吾凡别克・巴合提 都曼别克・阿曼台 韩祥祯 何惠宇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期175-182,共8页

目的 探究过表达miR-378a修饰骨髓间充质干细胞(BMMSCs)复合胶原蛋白海绵(CS)支架修复大鼠股骨缺损的效果。方法 分离培养BMMSCs并采用流式细胞术鉴定细胞表型。使用过表达miR-378a的慢病毒及阴性空载慢病毒转染BMMSCs,将转染细胞分为3... 目的 探究过表达miR-378a修饰骨髓间充质干细胞(BMMSCs)复合胶原蛋白海绵(CS)支架修复大鼠股骨缺损的效果。方法 分离培养BMMSCs并采用流式细胞术鉴定细胞表型。使用过表达miR-378a的慢病毒及阴性空载慢病毒转染BMMSCs,将转染细胞分为3组:过表达miR-378a转染BMMSCs组(LV-miR-378a组)、阴性对照慢病毒转染BMMSCs组(LV-miR-NC组)、未转染BMMSCs组(对照组),并采用流式细胞术检测转染效率。制备转染细胞与CS支架的复合物,使用扫描电镜观察细胞与支架的相容性。建立SD大鼠股骨缺损回植模型,将15只SD大鼠随机分为3组(n=5):LV-miR-378a+CS组(植入过表达miR-378a慢病毒的BMMSCs复合CS支架)、LV-miR-NC+CS组(植入阴性空载慢病毒转染的BMMSCs复合CS支架)、CS组(只植入CS支架)。术后第8周,使用CO_(2)吸入法处死SD大鼠,取手术侧股骨样本进行大体观察、微型CT扫描重建,定量分析骨密度(BMD)及骨体积分数(BV/TV),并采用HE、Masson及骨桥蛋白(OPN)免疫组化染色观察骨修复情况。结果 流式细胞术检测BMMSCs细胞表型显示,细胞表面抗原CD44阳性表达率95.5%,CD29阳性表达率94.7%,而CD45阳性表达率0.8%,CD34阳性表达率0.7%。流式细胞术检测各组转染效率显示,与对照组比较,LV-miR-378a组和LV-miR-NC组转染效率明显增高(P<0.05),而LV-miR-378a组与LV-miR-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察显示,CS支架材料具有良好的三维空洞结构,两组细胞与CS支架共培养7 d后,LV-miR-378a组较LV-miR-NC组细胞在支架材料表面铺展区域更大,细胞呈团簇状生长,伸出的伪足更多。大体观察结果显示,术后8周,LV-miR-378a+CS组骨缺损区修复较为完全,LV-miR-NC+CS组及CS组骨缺损中心均可观察到未完全矿化的新生骨质,且CS组仍可见缺损区大致轮廓。微型CT三维重建及定量分析结果显示,术后8周,LV-miR-378a+CS组骨缺损区修复效果优于其余两组,新骨沉积量较多,BMD及BV/TV值均明显高于其余两组(P<0.05),而LVmiR-NC+CS组及CS组缺损区均未完全修复,且CS组新骨沉积量较少,密度不均一。HE、Masson染色结果显示,术后8周,LV-miR-378a+CS组支架材料完全降解,可见较多成熟骨小梁,新生骨与宿主骨交界区连续性较好,骨小梁彼此连接且形态规则;LV-miR-NC+CS组成熟骨小梁相对较少,新生骨与宿主骨交界区未完全相连;CS组支架材料未完全降解,处于改建重塑中的骨小梁仍较多且形态不规则。免疫组化染色结果显示,术后8周LV-miR-378a+CS组骨桥蛋白表达率明显低于其余两组(P<0.05),且LV-miR-NC+CS组骨桥蛋白表达率低于CS组(P<0.05)。结论 过表达miR-378a修饰BMMSCs复合CS支架可促进新骨形成。 展开更多

关键词 微小RNA miR-378 骨髓间充质干细胞 成骨分化

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超顺磁性氧化铁纳米粒子标记羊骨髓间充质干细胞的体外实验研究 被引量：3

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作者 米雪 王俭 +5 位作者 何惠宇 胡杨 张嘉宇 韩祥祯 张德清 姜春晖 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2014年第7期595-599,共5页

目的:探究超顺磁性氧化铁纳米粒子体外标记羊骨髓间充质干细胞的最佳方案,进行磁共振扫描,观察与三维打印组织工程骨支架复合培养的效果。方法:取超顺磁性氧化铁纳米粒子与多聚左旋赖氨酸的复合物标记第3代羊骨髓间充干细胞,将两者(各mg... 目的:探究超顺磁性氧化铁纳米粒子体外标记羊骨髓间充质干细胞的最佳方案,进行磁共振扫描,观察与三维打印组织工程骨支架复合培养的效果。方法:取超顺磁性氧化铁纳米粒子与多聚左旋赖氨酸的复合物标记第3代羊骨髓间充干细胞,将两者(各mg/L)按配比分为4组,A组:25:0.75、B组:50:1.5、C组:100:3和D组:200:6,分别在4h、24h和48h检测细胞标记阳性率、存活率和增殖活力,选最佳方案组进行磁共振成像、观察细胞内外粒子分布并与支架复合培养。结果:A组、B组细胞标记24h和48h普鲁士蓝染色阳性率最高,均达100%,细胞外未见纳米粒子聚集块形成;A组细胞标记4h、24h细胞存活率最高,与对照组差异无统计学意义;4组纳米粒子标记不同时间均未影响细胞增殖活力;在3.0T磁共振成像下至少可检测到A组5×103个细胞;纳米粒子分布于胞浆内、可与支架有效粘附。结论:超顺磁性氧化铁纳米粒子与多聚左旋赖氨酸配比为25:0.75(mg/L)时,标记第3代羊骨髓间充质干细胞24h为最佳方案,可粘附于三维打印组织工程骨支架表面。 展开更多

关键词 超顺磁性氧化铁纳米粒子 骨髓间充质干细胞 磁共振成像 三维打印组织工程骨支架

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巨噬细胞集落刺激因子过表达对信号通路中破骨相关因子的影响 被引量：4

9

作者 王佳 张文静 +2 位作者 韩祥祯 周琦琪 何惠宇 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2019年第11期1089-1093,共5页

目的:探讨巨噬细胞集落刺激因子(monocyte colony-stimulating factor,M-CSF)在SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中过表达对破骨细胞分化形成相关细胞因子在信号通路中表达的影响。方法:构建过表达质... 目的:探讨巨噬细胞集落刺激因子(monocyte colony-stimulating factor,M-CSF)在SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中过表达对破骨细胞分化形成相关细胞因子在信号通路中表达的影响。方法:构建过表达质粒载体上调M-CSF基因表达,使用增强型绿色荧光蛋白确定最佳转染剂量,并将质粒转染至BMSCs。采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测破骨分化特异标志物M-CSF、核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-24(interleukin-24,IL-24)的mRNA表达水平。结果:流式鉴定BMSCs表面标记物CD29、CD44阳性率为91.4%、85.7%;CD45阳性率为2%;每孔5μL LTX为最佳转染效率;RT-PCR检测结果显示,实验组BMSCs中M-CSF mRNA表达显著升高(P<0.001);BMSCs破骨分化特异标志物RANKL、TNF-α、IL-1、IL-24 mRNA表达均显著增高(P<0.001),IL-6 mRNA表达降低(P<0.001),实验组与对照组比较差异有统计学意义。结论:M-CSF过表达增强BMSCs向破骨细胞分化的能力,对破骨细胞形成分化的早中晚期均存在影响。此外,M-CSF高表达质粒将外源基因导入BMSCs,是一种强有力的骨再生的基因治疗工具。 展开更多

关键词 巨噬细胞集落刺激因子 破骨细胞相关因子 破骨信号通路 骨髓间充质干细胞 骨组织工程

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bFGF重组慢病毒对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的研究 被引量：1

10

作者 韩祥祯 魏薇 +3 位作者 何惠宇 胡杨 王欢欢 邬薇薇 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期649-652,共4页

目的:探讨碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)基因转染对体外培养的骨髓间充质干细胞(Bone Marrow mesenchymal Stem Cells,BMSCs)的增殖和骨向分化的影响,为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。方法:构建携带... 目的:探讨碱性成纤维生长因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)基因转染对体外培养的骨髓间充质干细胞(Bone Marrow mesenchymal Stem Cells,BMSCs)的增殖和骨向分化的影响,为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。方法:构建携带人bFGF基因的慢病毒载体,转染诱导后羊的BMSCs,得到bFGF转染组,选择未转染的BMSCs为对照组。两组细胞采用实时定量PCR技术和蛋白质印迹法技术检测Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相关基因的mRNA水平及蛋白水平相对表达量的变化情况。结果:bFGF组OPN和Collagen-Ⅰ基因mRNA水平表达量较对照组增高,差异有统计学意义(P<0.05),两组细胞在OC基因mRNA水平表达量上差异无统计学意义;bFGF组细胞在OPN、OC和Collagen-Ⅰ基因蛋白水平上表达量均高于对照组,且差异有统计学意义。结论:bFGF基因转染能增强羊BMSCs增殖和骨向分化的能力,可作为组织工程骨的种子细胞。 展开更多

关键词 碱性成纤维因子 慢病毒载体 种子细胞 实时荧光定量 PCR 蛋白质印迹法

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骨形态发生蛋白4慢病毒载体构建及对鼠骨髓间充质干细胞成牙功能影响 被引量：1

11

作者 王欢欢 胡杨 +2 位作者 韩祥祯 邬薇薇 何惠宇 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期7-10,14,共5页

目的:构建骨形态发生蛋白4(BMP4)慢病毒载体,检测其对鼠骨髓间充质干细胞成牙功能的影响,以期为组织工程牙筛选种子细胞。方法:以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP4基因的全长cDNA,转克隆至plenti6/v5-D-TOPO表达载体,构建出BMP4-ple... 目的:构建骨形态发生蛋白4(BMP4)慢病毒载体,检测其对鼠骨髓间充质干细胞成牙功能的影响,以期为组织工程牙筛选种子细胞。方法:以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP4基因的全长cDNA,转克隆至plenti6/v5-D-TOPO表达载体,构建出BMP4-plenti6/v5-D-TOPO重组慢病毒表达载体;转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,用MTT法检测转染前后细胞的增殖活性,实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1成牙相关基因的mRNA水平相对表达量的变化。结果:BMP4基因转染后,细胞体外增殖活性增强,成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1mRNA水平表达量增多,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA水平差异无显著性意义。结论:BMP4可提高骨髓间充质干细胞体外增殖活性和牙向分化能力。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白4 慢病毒载体 骨髓间充质干细胞 组织工程牙 实时荧光定量PCR

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激光共聚焦显微镜观测体内回植的GFP标记的3D打印组织工程颌骨 被引量：1

12

作者 韩祥祯 周琦琪 +2 位作者 胡杨 宋艳艳 何惠宇 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1020-1023,共4页

目的:激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protins,GFP)标记的3D打印组织工程颌骨回植后体内移植情况,为筛选组织工程颌骨并为其后续功能研究提供技术基础。方法:采用羊椎骨煅烧制备陶瓷化骨粉,结合聚乙烯醇制备组织... 目的:激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protins,GFP)标记的3D打印组织工程颌骨回植后体内移植情况,为筛选组织工程颌骨并为其后续功能研究提供技术基础。方法:采用羊椎骨煅烧制备陶瓷化骨粉,结合聚乙烯醇制备组织工程颌骨支架,复合GFP慢病毒转染的羊骨髓间充质干细胞(Bone Marrow mesenchymal Stem Cells,BMSCs),回植羊颌骨缺损动物模型,使用激光共聚焦显微镜观察不同时间点其体内分布及存活情况。结果:GFP慢病毒转染的BMSCs,流式细胞仪检测转染率为95.4%,基因测序结果与GFP基因一致。回植后使用激光共聚焦显微镜三维立体成像技术观察到GFP标记的BMSCs在组织工程骨支架上存活3个月以上。结论:激光共聚焦显微镜三维重建技术可很好地观察GFP标记的3D打印组织工程颌骨支架上的细胞移植情况,为组织工程骨的动物实验研究提供了很好的观察方法。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 慢病毒 组织工程颌骨 激光共聚焦显微镜

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3D打印丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石支架体内降解的研究 被引量：1

13

作者 李蕾 刘小元 +3 位作者 张凯 韩祥祯 周琦琪 何惠宇 《口腔医学》 CAS 2021年第11期966-971,共6页

目的使用3D打印技术打印出丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石(SF/PVA/n-HA)支架与聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石(PVA/n-HA)支架并用细胞膜片包裹后回植到动物体内,研究并探讨SF/PVA/n-HA与PVA/n-HA支架的降解性能。方法将SF/PVA/n-HA支架与PV... 目的使用3D打印技术打印出丝素蛋白/聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石(SF/PVA/n-HA)支架与聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石(PVA/n-HA)支架并用细胞膜片包裹后回植到动物体内,研究并探讨SF/PVA/n-HA与PVA/n-HA支架的降解性能。方法将SF/PVA/n-HA支架与PVA/n-HA支架分别植入羊下颌骨内,在术后1、2、3个月处死实验动物,取出支架所在部位下颌骨,行影像学观察、HE染色观察、实时定量PCR(RT-PCR),探讨两种支架在体内降解情况的区别以及降解相关因子之间的关系。结果(1)影像学结果:SF/PVA/n-HA支架组与PVA/n-HA支架组可见骨缺损处低密度影均减小,而二者相比,SF/PVA/n-HA支架组低密度影范围较小,高密度影部位也较PVA/n-HA支架明显。(2)HE染色结果:SF/PVA/n-HA支架组在前两个月仍可见部分支架残余,支架周围前两个月可见炎性细胞,3个月末炎性逐渐消退,可见明显骨陷窝。(3)RT-PCR:同一时间不同材料比较,SF/PVA/n-HA支架组与PVA/n-HA支架组相比,IL-1、IL-6、M-CSF、NFATc1四种因子表达趋势相近。在术后1、2个月,SF/PVA/n-HA支架组四种因子的mRNA表达量均高于PVA/n-HA支架组;术后3个月,四种因子mRNA表达量SF/PVA/n-HA支架组均低于PVA/n-HA支架组(P<0.05)。结论SF/PVA/n-HA支架具有一定的降解性能,且在降解过程中,能促进破骨相关因子IL-1、IL-6、M-CSF、NFATc1的表达。 展开更多

关键词 支架 体内降解 破骨 极限骨缺损

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牙胚细胞与骨形态发生蛋白4转染的骨髓间充质干细胞相互诱导的体外实验研究

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作者 王欢欢 沈玉凤 +3 位作者 胡杨 韩祥祯 董红宾 何惠宇 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期237-241,共5页

目的:探讨牙胚细胞和骨形态发生蛋白4(BMP4)转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)相互间的成牙诱导作用。方法:构建骨形态发生蛋白4慢病毒载体,转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,并将骨髓间充质干细胞和BMP4转染的骨髓间充质干细胞分别与SD大鼠牙... 目的:探讨牙胚细胞和骨形态发生蛋白4(BMP4)转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)相互间的成牙诱导作用。方法:构建骨形态发生蛋白4慢病毒载体,转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,并将骨髓间充质干细胞和BMP4转染的骨髓间充质干细胞分别与SD大鼠牙胚细胞按1∶1比例混合培养,同时将细胞分为5组,BMSCs组、BMP4/BMSCs组、牙胚细胞组、BMSCs/牙胚细胞组(混合组1)、BMP4/BMSCs/牙胚细胞组(混合组2),分别采用实时荧光定量PCR和western-blotting检测五组细胞Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1成牙相关基因mRNA水平和蛋白水平相对表达量的变化。结果:与混合组1相比,混合组2Ⅰ型胶原蛋白、成釉蛋白、牙本质基质蛋白1、同源异型盒基因1mRNA水平和蛋白水平表达量增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:牙胚细胞与BMP4转染的骨髓间充质干细胞共培养,促进了成牙相关基因的表达,可作为组织工程牙的备选种子细胞。 展开更多

关键词 牙胚细胞 骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白4 实时荧光定量PCR western-blotting

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超短波对鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨能力的影响

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作者 宋艳艳 刘玲 +4 位作者 周琦琪 韩祥祯 赵小琦 葛树鹏 何惠宇 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第4期367-370,共4页

目的:探讨超短波对鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:体外分离培养rBMSCs,取第2~4代rBMSCs置于超短波理疗仪上进行处理,1次/d,15min/次,于1、4、7d检测细胞增殖能力,3... 目的:探讨超短波对鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:体外分离培养rBMSCs,取第2~4代rBMSCs置于超短波理疗仪上进行处理,1次/d,15min/次,于1、4、7d检测细胞增殖能力,3d后检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)分泌量,7d后检测成骨基因Runx2表达量。结果:每日给予超短波处理的实验组细胞经连续培养7d后,与不经超短波处理的对照组相比,其增殖能力明显提升(P<0.05),Runx2表达明显上调(P<0.05),ALP分泌量增多;结论:超短波能促进SD大鼠rBMSCs增殖和成骨分化。 展开更多

关键词 超短波 骨髓间充质干细胞 增殖 成骨分化

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3D打印羊椎骨粉/聚乙烯醇支架、纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架、羊椎骨粉/聚乙烯醇无孔骨板的性能比较 被引量：6

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作者 周琦琪 韩祥祯 +3 位作者 宋艳艳 吕明凡 胡杨 何惠宇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第52期7851-7857,共7页

背景:随着3D打印技术的推广,3D打印组织工程骨支架成为颌骨缺损修复的新方向。目的:对比3D打印羊椎骨粉/聚乙烯醇支架、纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架、羊椎骨粉/聚乙烯醇无孔骨板的理化与生物性能。方法:利用3D打印技术,分别打印出羊... 背景:随着3D打印技术的推广,3D打印组织工程骨支架成为颌骨缺损修复的新方向。目的:对比3D打印羊椎骨粉/聚乙烯醇支架、纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架、羊椎骨粉/聚乙烯醇无孔骨板的理化与生物性能。方法:利用3D打印技术,分别打印出羊椎骨粉/聚乙烯醇支架、纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架、羊椎骨粉/聚乙烯醇无孔骨板,进行孔隙率、扫描电镜、吸水率及压缩力学性能测定;将3种支架分别与骨髓间充质干细胞共培养1,4,7 d,采用CCK-8法检测细胞增殖。结果与结论:(1)扫描电镜观察:纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架、羊椎骨粉/聚乙烯醇支架孔隙规则,网状结构清晰,孔隙间存在广泛交通,连续性好;羊椎骨粉/聚乙烯醇无孔骨板没有明显孔隙,但表面有大小不一微孔,材料致密,分布均匀;(2)孔隙率:纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架孔隙率低于羊椎骨粉/聚乙烯醇支架(P<0.05);(3)吸水率:在不同时间点,纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架>羊椎骨粉/聚乙烯醇支架>羊椎骨粉/聚乙烯醇无孔骨板(P<0.05);(4)压缩力学性能:羊椎骨粉/聚乙烯醇支架的韧性高于纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架,低于羊椎骨粉/聚乙烯醇无孔骨板;(5)细胞毒性:羊椎骨粉/聚乙烯醇支架的细胞增殖活性高于其余两组支架(P<0.05);(6)结果表明:3D打印羊椎骨粉/聚乙烯醇支架具有良好的物理及化学性能。 展开更多

关键词 羟基磷灰石类 细胞毒性试验 免疫 组织工程 生物材料 骨生物材料 组织工程骨 3D打印 羟基磷灰石 羊椎骨粉 聚乙烯醇

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牙胚细胞体外培养过程中成牙基因的表达 被引量：9

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作者 巴娇娇 何惠宇 +2 位作者 胡杨 马嵋 韩祥祯 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第2期193-198,共6页

背景:多项实验表明牙胚组织在不同的时间点有不同的基因发挥作用,共同促进牙胚发育。目的:观察牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1在大鼠牙胚细胞体外培养的不同时间的表达。方法:对体外培养后第1,3,6天的牙胚... 背景:多项实验表明牙胚组织在不同的时间点有不同的基因发挥作用,共同促进牙胚发育。目的:观察牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1在大鼠牙胚细胞体外培养的不同时间的表达。方法:对体外培养后第1,3,6天的牙胚细胞提取RNA,反转录后采用实时定量PCR的方法检测牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和同源异型盒基因1mRNA相对表达水平的变化。结果与结论:牙胚细胞中牙本质基质蛋白1、成釉蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达随培养时间的延长而增加,在培养3 d时达到峰值(P<0.05),而同源异型盒基因1 mRNA的表达随培养时间的延长而下降(P<0.05)。 展开更多

关键词 组织构建 组织工程 口腔组织工程 牙胚细胞 培养 牙本质基质蛋白1 成釉蛋白 Ⅰ型胶原蛋白 同源异型盒基因1

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BMP-2、bFGF基因转染的大鼠骨髓干细胞与牙胚细胞在体外混合培养对成牙基因的影响 被引量：7

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作者 邬薇薇 胡杨 +2 位作者 何惠宇 韩祥祯 王欢欢 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期18-22,共5页

目的:观察骨形态发生蛋白-2和(或)碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和牙胚细胞在体外混合培养对牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、同源异型盒基因1的影响。方法:采用实时定量PCR和Western blot的方法,检测BM... 目的:观察骨形态发生蛋白-2和(或)碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和牙胚细胞在体外混合培养对牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、同源异型盒基因1的影响。方法:采用实时定量PCR和Western blot的方法,检测BMP-2和(或)bFGF对成牙基因的影响。结果:对照组、bFGF组、BMP-2组、bFGF/BMP-2组四组间,AMBN、COLLAGEN-Ⅰ、DLX1、DMP1基因在mRNA和蛋白水平表达量上存在明显差异(P<0.05)。结论:BMP2和bFGF有一定的协同交互作用,BMP2/bFGF/BMSCs/牙胚细胞可以作为构建组织工程牙的种子细胞。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 牙本质基质蛋白1 成釉蛋白 Ⅰ型胶原蛋白同源异型盒基因1

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3D打印鹿角粉/聚乙烯醇支架与纳米级羟基磷灰石/聚乙烯醇支架的性能比较 被引量：8

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作者 赵小琦 丁刘闯 +4 位作者 韩祥祯 李俊杰 周琦琪 宋艳艳 何惠宇 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2018年第9期1011-1015,共5页

目的:构建一种新型支架材料(鹿角粉/PVA支架),并与n-HA/PVA支架对比,通过检测其理化、生物性能,评价并探讨其作为骨组织工程支架的可行性。方法:利用3D打印技术,分别制备出鹿角粉/PVA支架、n-HA/PVA支架,进行孔隙率、孔径、吸水率、压... 目的:构建一种新型支架材料(鹿角粉/PVA支架),并与n-HA/PVA支架对比,通过检测其理化、生物性能,评价并探讨其作为骨组织工程支架的可行性。方法:利用3D打印技术,分别制备出鹿角粉/PVA支架、n-HA/PVA支架,进行孔隙率、孔径、吸水率、压缩力学性能及生物相容性的检测。结果:两组支架孔隙率比较无差别,鹿角粉/PVA孔径大于n-HA/PVA支架(P=0.004);在不同时间点上,n-HA/PVA支架的吸水率大于鹿角粉/PVA支架,但鹿角粉/PVA支架持续吸水的时间较长;两组支架的抗压缩性能无差别(P=0.243),但韧性较n-HA/PVA支架好;鹿角粉/PVA支架细胞相容性优于n-HA/PVA支架。结论:鹿角粉/PVA支架具有良好的机械力学性能及细胞相容性,可作为异种骨支架材料研究的新方向。 展开更多

关键词 3D打印 鹿角粉 纳米级羟基磷灰石 聚乙烯醇 支架材料

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氢氟酸酸蚀后不同方法清洁两种陶瓷嵌体对其表面及粘接强度的影响 被引量：3

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作者 田梦婷 张蕾 +3 位作者 何惠宇 刘宁宁 韩祥祯 杜丽娟 《口腔疾病防治》 2018年第8期519-525,共7页

目的研究氢氟酸(Hydrofluoric acid,HF)酸蚀后清洁处理对IPS e-max与Vita MarkⅡ陶瓷嵌体表面及粘接强度的影响。方法用CAD/CAM分别制作IPS e-max和Vita MarkⅡ陶瓷嵌体试件各50个,统一使用9%HF酸蚀粘接表面后,随机平均分配成1个对照组(... 目的研究氢氟酸(Hydrofluoric acid,HF)酸蚀后清洁处理对IPS e-max与Vita MarkⅡ陶瓷嵌体表面及粘接强度的影响。方法用CAD/CAM分别制作IPS e-max和Vita MarkⅡ陶瓷嵌体试件各50个,统一使用9%HF酸蚀粘接表面后,随机平均分配成1个对照组(A组)和4个实验组,分别采用中和粉(B组),37%磷酸(C组),超声波荡洗(D组)及中和粉+37%磷酸+超声波荡洗联合处理(E组),对实验组进行处理,对照组不进行清洁处理。每组8个试件在标准条件下与Variolink N树脂粘接剂粘接,经37℃恒温水浴24 h后测试剪切粘接强度,记录断裂的位置和粘接破坏的类型,分析剪切粘接强度的平均值。其余2个试件用扫描电子显微镜观察其表面微观形态,包括晶体结构、孔隙图、残余物。结果 IPS e-max组和Vita MarkⅡ组结果相似,两组最大粘接强度均在E处理,其中,IPse-max瓷嵌体组粘接强度均数较对照组增加11.96 MPa,Vita MarkⅡ瓷嵌体组,粘接强度均数较对照组增加9.74 MPa。IPS e-max和Vita MarkⅡ瓷嵌体两组中统计学分析结果相似,其中C、D及E处理组与对照组A处理组的粘接强度之间的差异有统计学意义(P<0.05),B处理组与对照组A的粘接强度之间的差异无统计学意义,同时发现处理组B、C、D、E组的粘接强度各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。电镜扫描观察发现,实验组酸蚀清洁处理后陶瓷表面孔隙增宽且均匀,残留物少于对照组,D、E组效果最佳。结论 HF酸蚀后清洁处理可增强IPS e-max与Vita MarkⅡ陶瓷嵌体的粘接强度,联合处理时粘接强度最高,同时电镜下表面残留物较少。 展开更多

关键词 CAD/CAM IPSe-max陶瓷 VITA MarkⅡ陶瓷 嵌体 酸蚀

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