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基于Gateway^(TM)系统Dec1慢病毒表达载体的构建 被引量：2
1
作者 李晓明 林伟 +5 位作者 章翔 王江 张璟 张健 韩腾龙 药立波 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2013年第2期126-129,共4页
目的利用GatewayTM技术构建分化型胚胎软骨发育基因1(Dec1)的慢病毒表达载体并建立稳定表达该目的基因的人胶质瘤U87细胞株。方法从人脑胶质瘤组织中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA。设计含有特异性酶切位点的引物,通过逆转录酶-多聚... 目的利用GatewayTM技术构建分化型胚胎软骨发育基因1(Dec1)的慢病毒表达载体并建立稳定表达该目的基因的人胶质瘤U87细胞株。方法从人脑胶质瘤组织中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA。设计含有特异性酶切位点的引物,通过逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR),获得用于重组的Dec1目的基因全长。将目的片段克隆至入门载体(pENTRTM3C)中产生入门克隆。利用GatewayTM技术,将入门克隆中的目的片段转接于目的载体(pLenti6.3/V5-DEST)中产生表达克隆pLenti6.3-Dec1。在293T细胞中包装慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1并转染U87细胞,通过灭瘟素筛选、Western blot鉴定,获得稳定表达Dec1的U87细胞株。结果 Dec1基因全长的获取与慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1的构建经PCR和测序得到证实。用pLenti6.3-Dec1转染U87细胞后,通过灭瘟素筛选,获得稳定表达Dec1的U87细胞株。结论成功构建了pLenti6.3-Dec1慢病毒表达载体并建立稳定表达Dec1的人胶质瘤U87细胞株,为深入研究Dec1分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 分化型胚胎软骨发育基因1 GatewayTM系统 慢病毒表达载体 神经胶质瘤
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雌激素受体ERbeta的克隆及重组慢病毒表达载体的构建
2
作者 李江鹏 赵华栋 +3 位作者 张健 李燕 韩腾龙 何显力 《现代肿瘤医学》 CAS 2012年第5期875-878,共4页
目的:构建含人雌激素受体ERbeta基因的重组慢病毒表达载体,为以ERbeta为干预靶点的乳腺癌相关研究奠定基础。方法:经RT-PCR扩增ERbeta基因片段,并将其连接到入门载体pENTRTM3C,然后经LR重组转入到慢病毒表达载体pLenti/V5-DEST中,进而... 目的:构建含人雌激素受体ERbeta基因的重组慢病毒表达载体,为以ERbeta为干预靶点的乳腺癌相关研究奠定基础。方法:经RT-PCR扩增ERbeta基因片段,并将其连接到入门载体pENTRTM3C,然后经LR重组转入到慢病毒表达载体pLenti/V5-DEST中,进而构建含ERbeta基因的慢病毒载体,并进行基因测序鉴定和PCR鉴定。结果:pLenti-ERbeta表达载体测序结果与GenBank中ERbeta基因序列一致,并且其经PCR可扩增出ERbeta基因片段。结论:成功构建携带人ERbeta基因的重组慢病毒表达载体。 展开更多
关键词 雌激素受体beta 克隆 慢病毒 LR反应 构建
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血小板参数及活化标志物与2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度的相关性 被引量：13
3
作者 曲云霄 蒋知新 +2 位作者 韩腾龙 王丽丽 高德禄 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期1250-1253,共4页
目的:探讨血小板参数及活化标志物与2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度(CIMT)的相关性。方法:收集2型糖尿病住院患者共195例,根据颈动脉内膜中层厚度分为无病变组60例,增厚组50例,斑块组85例,测定3组患者血小板数量(PLT)、平均血小板体积... 目的:探讨血小板参数及活化标志物与2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度(CIMT)的相关性。方法:收集2型糖尿病住院患者共195例,根据颈动脉内膜中层厚度分为无病变组60例,增厚组50例,斑块组85例,测定3组患者血小板数量(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板容积(PCT)、空腹血糖(GLU)、总胆固醇(TC)等指标及尿液11-DH-TXB2的含量,并进行统计学分析。结果:(1)斑块组患者病程、LDL-C、MPV、PDW、11-DH-TXB2水平高于无病变组及CIMT增厚组(P<0.05);(2)CIMT增厚组患者病程、LDL-C、MPV、PDW、11-DH-TXB2水平高于无病变组(P<0.05);(3)Spearman相关分析显示CIMT与年龄、病程、BMI、GLU、GHb A1C、LDL-C、MPV、PDW及11-DH-TXB2水平呈正相关,与HDL-C、PLT水平呈负相关(P<0.05);(4)Logistic回归分析显示MPV、PDW和11-DH-TXB2是2型糖尿病患者CIMT异常的危险因素。结论:血小板参数(MPV、PDW)及活化标志物(尿11-DH-TXB2)与2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度具有相关性。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 血小板参数 尿液11-脱氢血栓素B2 颈动脉内膜中层厚度
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hHO-1联合GATA-4修饰大鼠骨髓间充质干细胞抗凋亡及向心肌分化的实验研究 被引量：6
4
作者 邓宁波 曾元清 +1 位作者 韩腾龙 蒋知新 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期314-319,共6页
目的探讨经人血红素加氧酶1(hHO-1)基因和GATA-4基因联合修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧环境中抗凋亡及体外分化为心肌细胞样细胞的能力是否优于hHO-1或GATA-4单基因修饰的BMSCs。方法采用全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs并... 目的探讨经人血红素加氧酶1(hHO-1)基因和GATA-4基因联合修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧环境中抗凋亡及体外分化为心肌细胞样细胞的能力是否优于hHO-1或GATA-4单基因修饰的BMSCs。方法采用全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs并进行鉴定,重组腺病毒转染BMSCs,Western blotting法确定基因表达的最佳时间;以缺氧无血清条件模拟体内缺血缺氧微环境培养基因修饰的BMSCs,采用CCK-8试剂盒和台盼蓝染色法分别检测缺血缺氧培养12、24、48、72h细胞存活率,流式细胞术检测缺血缺氧培养24h细胞凋亡情况,Western blotting及细胞免疫荧光法检测特异性心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达情况。结果缺血缺氧培养12、24、48、72h的hHO-1+GATA-4组细胞生存率均高于hHO-1组(P<0.05)和GATA-4组(P<0.05)。缺血缺氧培养24h的hHO-1+GATA-4组细胞凋亡率低于hHO-1组(P<0.05)和GATA-4组(P<0.05);GATA-4组与hHO-1+GATA-组的c Tn I表达差异无统计学意义。结论 hHO-1与GATA-4联合修饰可明显增强缺血缺氧BMSCs的存活;与GATA-4单基因修饰相比,联合修饰并没有增强BMSCs向心肌细胞分化的能力。 展开更多
关键词 间质干细胞 基因 GATA4 血红素加氧酶-1 心肌分化
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人血红素加氧酶1过表达大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力 被引量：2
5
作者 邓宁波 韩腾龙 +1 位作者 曾元清 蒋知新 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第29期4617-4622,共6页
背景:骨髓间充质干细胞移植后在宿主恶劣的缺血缺氧微环境中生存率过低,限制了其治疗急性心肌梗死的疗效。目的:探讨人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力。方法:人血红素加氧酶1重组腺病毒转染... 背景:骨髓间充质干细胞移植后在宿主恶劣的缺血缺氧微环境中生存率过低,限制了其治疗急性心肌梗死的疗效。目的:探讨人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力。方法:人血红素加氧酶1重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,Western blot法确定人血红素加氧酶1蛋白表达的最佳时间;以缺氧无血清条件模拟体内缺血缺氧微环境培养人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞,采用CCK-8试剂盒和锥虫蓝染色法检测缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞存活率,流式细胞术检测缺血缺氧培养24 h的细胞凋亡情况。结果与结论:①在转染后第4天人血红素加氧酶1蛋白表达量最多;②锥虫蓝染色法和CCK-8法检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞生存率均高于对照组(P<0.05);③流式细胞术检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养24 h的生存率高于对照组(P<0.05);④结果表明,人血红素加氧酶1修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力明显增强。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 血红素加氧酶-1 腺病毒科感染 组织工程
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惠普网络打造示范高中的数字先锋 北京第171中学数字校园网络建设案例
6
作者 韩腾龙 陈广胜 《网络与信息》 2005年第9期38-39,共2页
关键词 校园网络建设 中学校园 校园信息化建设 案例 北京 高中 示范 惠普 教学水平
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pWPT-GFP慢病毒载体的改构及鉴定 被引量：3
7
作者 韩腾龙 王立峰 +2 位作者 张璟 刘新平 药立波 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第3期447-449,共3页
目的:为实现慢病毒感染后可用抗生素筛选外源基因稳定整合的细胞,我们对慢病毒载体质粒(pWPT-GFP)进行了改构。方法:将三种抗生素抗性基因(puro、hygro、neo)连同其启动子分别克隆入慢病毒载体(pWPT-GFP)。酶切鉴定载体构建正确后,将这... 目的:为实现慢病毒感染后可用抗生素筛选外源基因稳定整合的细胞,我们对慢病毒载体质粒(pWPT-GFP)进行了改构。方法:将三种抗生素抗性基因(puro、hygro、neo)连同其启动子分别克隆入慢病毒载体(pWPT-GFP)。酶切鉴定载体构建正确后,将这三种改构载体分别与辅助质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T包装细胞,收获病毒上清并感染靶细胞,使用相应抗生素筛选细胞验证抗性基因的插入。结果:成功构建了重组慢病毒载体pWPT-GFP-puro、pWPT-GFP-hygro、pWPT-GFP-neo,通过调整病毒上清的用量可以达到靶细胞100%的感染效率;用相应抗生素筛选细胞证明了抗性基因的表达。结论:我们成功改构了慢病毒载体(pWPT-GFP),从而使病毒感染后用抗生素筛选稳定整合的细胞成为可能。 展开更多
关键词 慢病毒载体 改构 抗生素筛选
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多药耐药基因MDR1慢病毒表达载体的构建、病毒包装及功能验证
8
作者 张媛 韩腾龙 +3 位作者 赖晓凤 张健 刘文超 药立波 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期252-256,共5页
目的构建MDR1基因的过表达慢病毒载体并进行病毒的包装，为进一步深入的研究MDR1基因在乳腺癌耐药中的作用提供基础工具。方法用PCR技术获得MDR1基因片段，将其连接入酶切后的慢病毒载体，转化感受态进行PCR及测序鉴定，脂质体转染293T... 目的构建MDR1基因的过表达慢病毒载体并进行病毒的包装，为进一步深入的研究MDR1基因在乳腺癌耐药中的作用提供基础工具。方法用PCR技术获得MDR1基因片段，将其连接入酶切后的慢病毒载体，转化感受态进行PCR及测序鉴定，脂质体转染293T细胞，包装成慢病毒再分别感染靶细胞MDA—MB-231和MCF-7细胞验证其生物学功能。结果成功构建MDR1慢病毒表达载体，测序证实所获取基因序列完全正确，Western印迹验证在乳腺癌MDA—MB-231和MCF-7稳转MDR1细胞系中MDR1基因高表达。通过药物杀伤实验验证稳转MDR1细胞组较对照组耐药性显著增高。结论MDR1慢病毒表达载体的成功构建及病毒包装完成为进一步深入研究MDR1基因在乳腺癌多药耐药过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 MDR1 慢病毒表达载体 MDA—MB-23 MCF-7
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用Gateway系统构建携带Grb2-SH2基因重组慢病毒载体
9
作者 蔡忠良 阴继凯 +2 位作者 韩腾龙 张健 鲁建国 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第4期616-618,共3页
目的:构建携带Grb2-SH2基因重组慢病毒载体。方法:把Grb2-SH2基因从合成的工程载体PUC-57中导到入门载体pentr-3C中,再利用LR反应重组到目的载体plenti,通过酶切和测序分析对比验证Grb2-SH2基因后,将plenti-Grb2-SH2质粒利用慢病毒转染... 目的:构建携带Grb2-SH2基因重组慢病毒载体。方法:把Grb2-SH2基因从合成的工程载体PUC-57中导到入门载体pentr-3C中,再利用LR反应重组到目的载体plenti,通过酶切和测序分析对比验证Grb2-SH2基因后,将plenti-Grb2-SH2质粒利用慢病毒转染系统转染人胚胎肾上皮细胞株293T细胞获得携带Grb2-SH2慢病毒载体。结果:构建的重组质粒经酶切及测序和分析比对鉴定正确,目的基因片段大小约为500bp;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒,转染效率约为90%。结论:成功构建转载质粒plenti-Grb2-SH2及携带Grb2-SH2基因慢病毒载体。 展开更多
关键词 生长因子受体连接蛋白 重组慢病毒载体 表皮生长因子受体
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