目的探讨及早鉴别用免疫学方法筛选cDNA文库得到的阳性克隆是否真实可靠的方法.方法将阳性噬菌体克隆与宿主菌按一定的比例诱导培养后,取沉淀做SDS-PAGE后行W estern b lot;同时取出一个阳性克隆进行亚克隆,直至3次亚克隆均为全部阳性....目的探讨及早鉴别用免疫学方法筛选cDNA文库得到的阳性克隆是否真实可靠的方法.方法将阳性噬菌体克隆与宿主菌按一定的比例诱导培养后,取沉淀做SDS-PAGE后行W estern b lot;同时取出一个阳性克隆进行亚克隆,直至3次亚克隆均为全部阳性.结果3次亚克隆均为全部阳性的噬菌体克隆,在W estern b lot鉴定中也呈阳性反应.结论可用W estern b lot方法来鉴别用免疫学方法筛选cDNA文库得到的阳性克隆是否真实可靠.展开更多
乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）是乙型病毒性肝炎的特征性标志物。酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）二步法极大地提高了HBsAg的检出率，但对于低水平表达尤其是突变型HBsAg的检...乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）是乙型病毒性肝炎的特征性标志物。酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）二步法极大地提高了HBsAg的检出率，但对于低水平表达尤其是突变型HBsAg的检测能力仍然有限。有研究显示，单独乙型肝炎核心抗体（hepatitis B core antibody，HBcAb）阳性患者的乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA检出率达8.1%[1]，提示临床工作中对HBcAb阳性者的进一步检测不容忽视。本研究分别采用ELISA和化学发光微粒子免疫法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）检测HBcAb阳性的不同模式患者血清中的HBsAg，比较2种方法对HBsAg的检出情况。展开更多
目的:本研究旨在探讨第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(second mitochondria-derived activator of Caspase,Smac)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cysteinyl asparate specific proteinase9,Caspase9)蛋白表达水平与直肠癌术前放化疗后病理...目的:本研究旨在探讨第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(second mitochondria-derived activator of Caspase,Smac)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cysteinyl asparate specific proteinase9,Caspase9)蛋白表达水平与直肠癌术前放化疗后病理反应程度的关系,单独评价及两者联合后评价其表达水平对预测直肠癌术前放化疗敏感性的价值.方法:收集昆明医科大学第一附属医院肿瘤放疗科2008-07/2013-06接受术前放化疗并行手术的直肠腺癌患者43例,免疫组织化学方法检测放化疗前活检标本及手术后切除标本中Smac及Caspase9蛋白的表达水平,分析其放化疗前、后表达水平的变化,以及活检组织中Smac及Caspase9蛋白表达水平与术后病理反应程度的关系.结果:直肠癌术前放化疗后病理反应良好,有效率达72.1%,其中,病理完全缓解率达30.2%.放化疗前、后直肠癌组织中Smac及Caspase9蛋白表达均有差异,放化疗后Smac及Caspase9蛋白的染色得分均下降(P<0.001).放化疗前Caspase9表达阳性的患者(染色得分1-8分)放化疗有效的比例显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).当Smac及Caspase9均为阳性时,放化疗有效的比例显著提高(P=0.0002).生存分析显示,放化疗反应结果与患者总生存相关,放化疗有效组的生存时间较放化疗无效组明显延长(P=0.0193).结论:放化疗前活检组织中Caspase9的阳性表达是直肠癌患者对放化疗敏感的标志,联合检测放化疗前Smac及Caspase9的表达可更好地预测直肠癌细胞对放化疗的敏感性.在诸多因素中,直肠癌患者对放化疗的有效性是决定患者预后的重要因素,联合检测活检组织中Smac及Caspase9的表达有可能筛选出对放化疗敏感的患者,从而使其获得更好的预后.展开更多
目的研究托瑞米芬(TOR)对人肺腺癌细胞株GLC-82的抑制作用及其与顺铂(DDP)联用的协同效应,为肺癌的综合治疗提供新思路。方法用MTT显色法检测TOR及与DDP联用后对GLC-82细胞的抑制作用,测定其吸光度(absorbance,A)值。采用real time RT-...目的研究托瑞米芬(TOR)对人肺腺癌细胞株GLC-82的抑制作用及其与顺铂(DDP)联用的协同效应,为肺癌的综合治疗提供新思路。方法用MTT显色法检测TOR及与DDP联用后对GLC-82细胞的抑制作用,测定其吸光度(absorbance,A)值。采用real time RT-PCR法检测细胞p53、p21基因的表达,Western Blotting法检测p53、p21蛋白表达,探讨其可能的机制。结果TOR能直接抑制GLC-82细胞的生长,浓度大于5μmol/L的TOR可明显增强DDP的细胞毒副反应,DDP可协同TOR提高p53和p21基因mRNA的表达水平,且DDP联合TOR后使p53及p21蛋白表达增加。结论TOR与DDP联用对GLC-82细胞具有显著的协同抗肿瘤效应。TOR可能与p53蛋白依赖机制以及P21蛋白诱导表达有关。展开更多
文摘目的探讨及早鉴别用免疫学方法筛选cDNA文库得到的阳性克隆是否真实可靠的方法.方法将阳性噬菌体克隆与宿主菌按一定的比例诱导培养后,取沉淀做SDS-PAGE后行W estern b lot;同时取出一个阳性克隆进行亚克隆,直至3次亚克隆均为全部阳性.结果3次亚克隆均为全部阳性的噬菌体克隆,在W estern b lot鉴定中也呈阳性反应.结论可用W estern b lot方法来鉴别用免疫学方法筛选cDNA文库得到的阳性克隆是否真实可靠.
文摘乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）是乙型病毒性肝炎的特征性标志物。酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）二步法极大地提高了HBsAg的检出率，但对于低水平表达尤其是突变型HBsAg的检测能力仍然有限。有研究显示，单独乙型肝炎核心抗体（hepatitis B core antibody，HBcAb）阳性患者的乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA检出率达8.1%[1]，提示临床工作中对HBcAb阳性者的进一步检测不容忽视。本研究分别采用ELISA和化学发光微粒子免疫法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）检测HBcAb阳性的不同模式患者血清中的HBsAg，比较2种方法对HBsAg的检出情况。
文摘目的:本研究旨在探讨第二线粒体源的半胱天冬酶激活物(second mitochondria-derived activator of Caspase,Smac)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cysteinyl asparate specific proteinase9,Caspase9)蛋白表达水平与直肠癌术前放化疗后病理反应程度的关系,单独评价及两者联合后评价其表达水平对预测直肠癌术前放化疗敏感性的价值.方法:收集昆明医科大学第一附属医院肿瘤放疗科2008-07/2013-06接受术前放化疗并行手术的直肠腺癌患者43例,免疫组织化学方法检测放化疗前活检标本及手术后切除标本中Smac及Caspase9蛋白的表达水平,分析其放化疗前、后表达水平的变化,以及活检组织中Smac及Caspase9蛋白表达水平与术后病理反应程度的关系.结果:直肠癌术前放化疗后病理反应良好,有效率达72.1%,其中,病理完全缓解率达30.2%.放化疗前、后直肠癌组织中Smac及Caspase9蛋白表达均有差异,放化疗后Smac及Caspase9蛋白的染色得分均下降(P<0.001).放化疗前Caspase9表达阳性的患者(染色得分1-8分)放化疗有效的比例显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).当Smac及Caspase9均为阳性时,放化疗有效的比例显著提高(P=0.0002).生存分析显示,放化疗反应结果与患者总生存相关,放化疗有效组的生存时间较放化疗无效组明显延长(P=0.0193).结论:放化疗前活检组织中Caspase9的阳性表达是直肠癌患者对放化疗敏感的标志,联合检测放化疗前Smac及Caspase9的表达可更好地预测直肠癌细胞对放化疗的敏感性.在诸多因素中,直肠癌患者对放化疗的有效性是决定患者预后的重要因素,联合检测活检组织中Smac及Caspase9的表达有可能筛选出对放化疗敏感的患者,从而使其获得更好的预后.
文摘目的研究托瑞米芬(TOR)对人肺腺癌细胞株GLC-82的抑制作用及其与顺铂(DDP)联用的协同效应,为肺癌的综合治疗提供新思路。方法用MTT显色法检测TOR及与DDP联用后对GLC-82细胞的抑制作用,测定其吸光度(absorbance,A)值。采用real time RT-PCR法检测细胞p53、p21基因的表达,Western Blotting法检测p53、p21蛋白表达,探讨其可能的机制。结果TOR能直接抑制GLC-82细胞的生长,浓度大于5μmol/L的TOR可明显增强DDP的细胞毒副反应,DDP可协同TOR提高p53和p21基因mRNA的表达水平,且DDP联合TOR后使p53及p21蛋白表达增加。结论TOR与DDP联用对GLC-82细胞具有显著的协同抗肿瘤效应。TOR可能与p53蛋白依赖机制以及P21蛋白诱导表达有关。
