褪黑激素治疗骨关节炎的作用研究探析

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作者 林艳铭 涂海水 +4 位作者 金灵璐 叶锦霞 黄艳峰 马德尊 付长龙 《风湿病与关节炎》 2024年第2期48-51,共4页

骨关节炎是一种常见的退行性全关节疾病,其发病机制为软骨细胞密度降低、细胞外基质合成与分解代谢失衡、异常炎症信号转导和过度氧化应激反应。褪黑激素及其衍生物是一种高效的自由基解毒剂和广谱抗氧化剂,具有抗氧化、抗炎症反应和抗... 骨关节炎是一种常见的退行性全关节疾病,其发病机制为软骨细胞密度降低、细胞外基质合成与分解代谢失衡、异常炎症信号转导和过度氧化应激反应。褪黑激素及其衍生物是一种高效的自由基解毒剂和广谱抗氧化剂,具有抗氧化、抗炎症反应和抗衰老作用,通过调节多种分子信号,能够针对骨关节炎的发病机制发挥保护作用。总结褪黑激素介导其作用对骨关节炎发病机制的影响,旨在为褪黑激素临床治疗骨关节炎提供支持。 展开更多

关键词 骨关节炎 褪黑激素 软骨细胞 细胞外基质 发病机制

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基于SDF-1/CXCR4轴探讨补肾壮筋汤促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的机制研究

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作者 黄艳峰 马德尊 +3 位作者 付长龙 叶锦霞 黄云梅 李西海 《康复学报》 CSCD 2024年第1期44-54,共11页

目的探讨补肾壮筋汤调控SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的作用机制,为膝骨关节炎(KOA)的康复治疗提供实验依据。方法①动物实验中,选用8周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠30只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、补肾壮筋汤... 目的探讨补肾壮筋汤调控SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢和保护关节软骨的作用机制,为膝骨关节炎(KOA)的康复治疗提供实验依据。方法①动物实验中,选用8周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠30只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、补肾壮筋汤组,每组10只,干预12周。采用micro-CT、HE染色观察各组软骨形态变化;激光共聚焦显微镜观察骨组织SDF-1荧光强度;qPCR、Western blot检测各组归巢相关调控因子mRNA转录水平和蛋白相对表达量。②细胞实验中,选用4周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠,采用全骨髓贴壁法提取原代BMSCs,流式细胞术对所提取的细胞进行鉴定后,筛选最佳慢病毒MOI值;随机将细胞分为空白组、空载组、补肾壮筋汤组、sh-SDF-1组、sh-SDF-1+补肾壮筋汤组5组,采用划痕实验观察各组BMSCs迁移情况;阿利新蓝、CollagenⅡ免疫细胞学染色观察各组细胞成软骨分化能力;激光共聚焦显微镜观察各组SDF-1、CXCR4的荧光强度;qPCR检测各组归巢相关调控因子mRNA转录水平。结果①动物实验中,关节组织形态学结果(micro-CT、HE染色)显示:与假手术组比较,模型组股骨髁间可见一圆形缺损,骨皮质失连,软骨细胞缺失;与模型组比较,补肾壮筋汤组股骨髁间环形缺损好转,软骨细胞排列稍紊乱。关节组织免疫荧光显示:与假手术组比较,模型组SDF-1蛋白相对表达量升高;与模型组比较,补肾壮筋汤组SDF-1的蛋白相对表达量升高(P<0.05)。qPCR与Western blot结果显示:与假手术组比较,模型组归巢关键调控因子(SDF-1、CXCR4、MIP-1α、MCP-1、MIP-1β、RANTES、VEGF、G-CSF、NCAM-1、MMP-2)的mRNA转录水平和蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,补肾壮筋汤组归巢关键调控因子mRNA转录水平和蛋白相对表达量升高(P<0.05)。②细胞实验中,BMSCs经细胞流式术鉴定:CD44、CD105呈阳性表达,CD34呈阴性表达。当病毒MOI值为100时,SDF-1基因感染率最高。BMSCs迁移和成软骨分化能力检测结果显示:与空白组比较,sh-SDF-1组细胞向划痕区域迁移的细胞数量、酸性黏多糖及CollagenⅡ蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);补肾壮筋汤组和sh-SDF-1+补肾壮筋汤组迁移的细胞数量、阿利新蓝染色及CollagenⅡ蛋白相对表达量显著增多(P<0.05)。细胞免疫荧光显示:与空白组比较,sh-SDF-1组细胞SDF-1、CXCR4蛋白相对表达量显著减少;补肾壮筋汤组和sh-SDF-1+补肾壮筋汤组细胞SDF-1、CXCR4蛋白相对表达量显著增多(P<0.05)。qPCR结果显示:与空白组比较,sh-SDF-1组归巢关键调控因子的mRNA转录水平降低(P<0.05),补肾壮筋汤组归巢关键调控因子的mRNA转录水平升高(P<0.05)。结论补肾壮筋汤可通过上调SDF-1/CXCR4轴促进小鼠BMSCs归巢保护关节软骨。 展开更多

关键词 软骨损伤 补肾壮筋汤 BMSCS SDF-1/CXCR4 归巢

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基于lncRNA MGC-Mirg与PERK通路探讨荣筋拈痛方延缓膝骨关节炎小鼠软骨退变

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作者 谢新宇 林晴 +4 位作者 黄艳峰 马德尊 叶锦霞 李西海 付长龙 《福建中医药》 2024年第2期31-35,共5页

目的 基于长链非编码RNA(lncRNA) MGC-Mirg与PRKR样内质网激酶(PERK)通路探讨荣筋拈痛方延缓膝骨关节炎模型小鼠软骨退变的机制。方法 48只8周龄小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只和造模组36只,造模组采用改良Hulth... 目的 基于长链非编码RNA(lncRNA) MGC-Mirg与PRKR样内质网激酶(PERK)通路探讨荣筋拈痛方延缓膝骨关节炎模型小鼠软骨退变的机制。方法 48只8周龄小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只和造模组36只,造模组采用改良Hulth法诱导建立KOA模型,将造模成功的小鼠分为模型组、荣筋拈痛方组和阳性对照组各12只。荣筋拈痛方组按9 g/(kg·d)给予荣筋拈痛方药液灌胃;阳性对照组按500 mg/(kg·d)给予特异性内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸溶液灌胃;空白组和模型组按10 mL/(kg·d)给予生理盐水灌胃,均连续灌胃8周。采用HE染色与番红O-固绿染色观察小鼠关节软骨组织病理改变;Western blot检测膝关节软骨组织PERK、激活转录因子4(ATF4)、结合免疫球蛋白(BIP)、ER降解增强α-甘露糖苷酶样蛋白1(EDEM1)、生长停滞与DNA损伤诱导蛋白(GADD153)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达量;qPCR检测膝关节软骨组织lncRNA MGC-Mirg RNA相对表达水平。结果 与空白组比较,模型组关节间隙变窄,软骨膜表层发生破坏,软骨层纤维方向出现偏移、变薄,软骨细胞数量降低,且胫骨平台处的软骨下骨出现塌陷,各层结构不完整;膝关节软骨组织PERK、ATF4、BIP、EDEM1、GADD153、Caspase-3蛋白表达量和lncRNA MGC-Mirg RNA相对表达水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,荣筋拈痛方组与阳性对照组软骨层结构基本完整;膝关节软骨组织PERK、ATF4、BIP、EDEM1、GADD153、Caspase-3蛋白含量表达和lncRNA MGC-Mirg RNA相对表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 荣筋拈痛方可以有效延缓KOA小鼠软骨退变,其机制可能与下调lncRNA MGC-Mirg基因、PERK通路相关蛋白表达,抑制细胞内质网应激有关。 展开更多

关键词 膝骨关节炎 荣筋拈痛方 lncRNA 内质网应激 PERK通路

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荣筋拈痛方对膝骨关节炎大鼠软骨组织Beclin1及LC3B表达的影响

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作者 李路 王文义 +5 位作者 潘丹虹 林晴 付长龙 郑春松 马德尊 叶锦霞 《风湿病与关节炎》 2023年第5期1-5,11,共6页

目的:观察荣筋拈痛方对膝骨关节炎大鼠软骨组织自噬的影响,探讨其防治膝骨关节炎的作用机制。方法:将24只SD大鼠按照随机分层法分为假手术组、模型对照组、荣筋拈痛方组,每组8只。除假手术组外,其他组采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模... 目的:观察荣筋拈痛方对膝骨关节炎大鼠软骨组织自噬的影响,探讨其防治膝骨关节炎的作用机制。方法:将24只SD大鼠按照随机分层法分为假手术组、模型对照组、荣筋拈痛方组,每组8只。除假手术组外,其他组采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型。给药12周后,从假手术组和模型对照组中随机抽取3只大鼠拍摄膝关节MRI,观察模型是否成功。采集大鼠膝关节组织,HE染色法观察软骨组织形态结构,采用Mankin病理评分对关节软骨进行组织形态学评分;免疫组织化学法观察软骨组织酵母自噬相关基因6同源物(Beclin1)及微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)的定位与表达。结果:MRI显示,假手术组关节间隙正常,关节面平整;模型对照组关节间隙增宽,关节软骨面不平整、局部缺损,结缔组织增生,骨赘形成。荣筋拈痛方组大鼠骨关节炎模型关节软骨的大体外观及HE染色均改善明显,Mankin软骨评分高于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。荣筋拈痛方组自噬蛋白Beclin1及LC3B表达均呈上升趋势。结论:荣筋拈痛方可能通过提高自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达,改善软骨细胞状态,延缓关节软骨退变。 展开更多

关键词 膝骨关节炎 荣筋拈痛方 软骨组织 自噬 大鼠

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计算机模拟法探讨没药治疗骨肉瘤的作用机制

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作者 杨燕妮 勾伟颖 +6 位作者 段辛威 李西海 陈友琴 马德尊 叶锦霞 付长龙 郑春松 《福建中医药》 2023年第1期48-56,共9页

目的探讨没药治疗骨肉瘤(OS)的作用及其机制。方法以口服生物利用度≥30%和类药性≥0.18为阈值,从中药系统药理学数据库及分析平台,收集没药的潜在活性成分及其对应靶点,并通过中国知网数据库检索与骨肉瘤相关的已报道活性化合物,利用Di... 目的探讨没药治疗骨肉瘤(OS)的作用及其机制。方法以口服生物利用度≥30%和类药性≥0.18为阈值,从中药系统药理学数据库及分析平台,收集没药的潜在活性成分及其对应靶点,并通过中国知网数据库检索与骨肉瘤相关的已报道活性化合物,利用Discovery Studio(DS)模拟软件,分别构建没药潜在活性成分和已报道活性化合物的数据集,基于“Calculate Molecular Properties”模块,比较两数据集的化学空间;以已知活性化合物数据集为参照配体,基于“Find Similar Moleculars by Fingerprints”模块,从没药潜在活性成分数据集中找出相似的分子。在GEO、OMIM、PharmGkb、DrugBank与GeneCards数据库中收集OS疾病靶点,与没药成分对应靶点取交集,将交集靶点与活性成分导入Cytoscape 3.8.1软件中,构建没药活性成分-靶点网络;再将交集靶点导入STRING网站构建蛋白质-蛋白质作用网络(PPI网络),在Cytoscape 3.8.1软件中拓扑分析筛选出核心靶点;用DAVID在线数据库对交集靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;最后用分子对接验证没药活性成分与OS核心靶点的相互作用。结果从TCMSP中得到没药潜在的活性成分45个及其对应的靶点393个;没药潜在活性成分和含147个已报道活性化合物的数据集,具有相近的化学空间分布,从前者数据集中发现了与活性化合物结构指纹特征相似度高的化合物有5个,分别为槲皮素、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、[(5aS,8aR,9R)-8-oxo-9-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-5,5a,6,9-tetrahydroisobenzofurano[6,5-f][1,3]benzodioxol-8a-yl]acetate、β-谷甾醇和豆甾醇。收集到OS相关靶点5114个,与没药成分对应的靶点取交集,得到共同靶点129个;没药活性成分-靶点作用网络显示32个活性成分能与129个靶点相互作用,其中,3个化合物能作用于1个靶点,8个化合物能作用于2个靶点,21个化合物能作用≥3个靶点;PPI网络的核心靶点为JUN、MAPK1、HSP90AA1、ESR1、RELA、Akt1、MYC和FOS;GO功能富集共得到2174个条目(P<0.05),其中生物进程条目1987个、细胞组成条目40个、分子功能条目147个。KEGG通路富集分析共得到172条信号通路(P<0.05),主要涉及TNF信号通路、IL-17信号通路、p53信号通路等。分子对接结果表明没药化学成分中的槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、阿魏酸与其对应的核心靶点结合能均小于-4 Kcal/mol,显示出良好的结合能力。结论计算机模拟直观展示了没药主要通过多成分、多靶点和多通路对OS发挥治疗作用,为其在OS中的应用提供新的依据。 展开更多

关键词 没药 骨肉瘤 化学空间 网络药理学 分子对接

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丹参和降香配伍协同改善骨关节炎炎症微环境作用的计算机模拟研究

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作者 赵金阁 杨燕妮 +3 位作者 付长龙 马德尊 叶锦霞 郑春松 《赣南医学院学报》 2023年第9期910-917,共8页

目的:从分子水平可视化探讨丹参和降香配伍在改善骨关节炎炎症微环境中的协同作用。方法:①从北京大学天然产物库中,检索180个丹参化学成分和119个降香化学成分,构建各自的化学成分数据集;从化学结构角度进行聚类分析,并计算两者的全局... 目的:从分子水平可视化探讨丹参和降香配伍在改善骨关节炎炎症微环境中的协同作用。方法:①从北京大学天然产物库中,检索180个丹参化学成分和119个降香化学成分,构建各自的化学成分数据集;从化学结构角度进行聚类分析,并计算两者的全局指纹相似度分值。②依托定量构效关系及主成分分析平台,分析丹参和降香化学成分数据集的化学空间。③以白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、基质金属蛋白酶1(Matrix Metallopeptidase 1,MMP-1)、MMP-3、MMP-9和MMP-13为改善骨关节炎炎症微环境的靶点,利用分子对接和生物网络等平台,研究其与丹参、降香中化学成分的相互作用,并构建丹参和降香的化合物-靶点网络,分析丹参和降香配伍在改善骨关节炎炎症微环境中的意义。结果:①对丹参和降香化学成分数据集进行聚类,发现丹参和降香化学成分数据集在第1、2、3、4、5、6、8、9、10类存在交集,但在第7类仅出现丹参化学成分;同时,对两个数据集的全局指纹进行比较,发现其相似度分值为0.6375。②丹参和降香化学成分数据集在化学空间的后底部存在相近的分布。③丹参化合物-靶点网络显示,丹参的潜在活性化合物个数达到32个,其核心化合物为酚酸类成分,核心作用靶点为IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-1和MMP-9;降香化合物-靶点网络显示,降香中的潜在活性化合物个数达到64个,其核心化合物为黄酮类成分,核心作用靶点为IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-3和MMP-9。结论:从化学结构特征及化学空间分布看,丹参和降香存在相似之处,配伍后具有更多的潜在活性成分种类和数量、更广的化学空间分布,可通过对应的特定靶点和共同靶点在改善骨关节炎炎症微环境中相互作用发挥互补协同效应。即计算机模拟实现丹参和降香配伍协同改善骨关节炎炎症微环境作用的可视化分析。 展开更多

关键词 丹参 降香 中药配伍 骨关节炎 炎症微环境 计算机模拟 数据可视化

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福建海洋中药现代化研究现状及其发展建议

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作者 郑春松 杨燕妮 +4 位作者 赵金阁 马德尊 付长龙 叶锦霞 叶蕻芝 《福建中医药》 2023年第11期62-64,共3页

本文以传承精华、守正创新为发展方向,以中医理论为核心,以海洋中药的古籍文献及临床疗效为依据,建议开展福建海洋中药资源保护与可持续利用、物质基础及作用机制、标准化和质量控制技术、复方新药、大健康产品、数据库建设与应用服务... 本文以传承精华、守正创新为发展方向,以中医理论为核心,以海洋中药的古籍文献及临床疗效为依据,建议开展福建海洋中药资源保护与可持续利用、物质基础及作用机制、标准化和质量控制技术、复方新药、大健康产品、数据库建设与应用服务等方面的基础研究,建立系统的福建海洋中药现代化研究体系,以期服务于福建省海洋经济的发展。 展开更多

关键词 海洋中药 福建省 基础研究 现代化发展

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从lncRNA NEAT1和IRE1α/XBP1信号通路探讨透骨消痛胶囊改善膝骨关节炎内质网应激研究

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作者 付长龙 梅阳阳 +4 位作者 谢新宇 涂海水 叶锦霞 郑春松 马德尊 《福建中医药》 2023年第6期37-39,58,共4页

目的基于lncRNA NEAT1和IRE1α/XBP1信号通路,探讨透骨消痛胶囊延缓膝骨关节炎(KOA)软骨退变的机制。方法48只8周龄小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只、造模组36只,造模组动物经5%异氟醚吸入麻醉后,采用Hulth法诱导KO... 目的基于lncRNA NEAT1和IRE1α/XBP1信号通路,探讨透骨消痛胶囊延缓膝骨关节炎(KOA)软骨退变的机制。方法48只8周龄小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只、造模组36只,造模组动物经5%异氟醚吸入麻醉后,采用Hulth法诱导KOA模型,随机数字表法分为模型组12只、透骨消痛胶囊组12只和对照组12只。透骨消痛胶囊组予以透骨消痛胶囊368 mg/kg进行灌胃;对照组使用牛磺熊去氧胆酸500 mg/kg进行灌胃;空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续4周。干预结束后,麻醉状态下处死各组小鼠,分离与收集膝关节软骨组织,Micro-CT观察小鼠膝关节软骨组织形态变化;Western blot检测关节软骨IRE1α/XBP1通路相关蛋白表达;qPCR检测软骨组织中lncRNA NEAT1表达水平。结果与空白组比较,模型组半月板结构缺失,胫骨平台软骨面呈现凹凸不平状、伴有明显的骨赘增生,软骨组织IRE1α、XBP1、GRP78、CHOP蛋白含量、lncRNA NEAT1表达均显著升高(P<0.05);透骨消痛胶囊组、对照组小鼠内侧半月板结构缺失,2组软骨组织的IRE1α、XBP1、GRP78、CHOP蛋白含量均显著降低(P<0.05),lncRNA NEAT1表达水平均显著降低(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊可通过下调KOA小鼠关节软骨组织中lncRNA NEAT1水平,抑制软骨组织与内质网应激有关的IRE1α/XBP1通路蛋白表达发挥作用。 展开更多

关键词 骨关节炎 透骨消痛胶囊 内质网应激 IRE1α/XBP1通路

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转基因猪中抗生素标记基因neo漂移风险评估

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作者 王庆庆 高鹏飞 +5 位作者 李和刚 马德尊 蔡春波 钱丽丽 姜声旺 崔文涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2720-2725,共6页

本试验旨在研究转基因猪中抗生素标记基因neo漂移的可能性。利用Southern blotting鉴定F1代仔猪的显隐性,结果发现6头仔猪中有3头为转基因仔猪,3头为阴性仔猪。通过PCR技术对试验仔猪血液和消化道组织中neo基因进行检测,结果发现neo基... 本试验旨在研究转基因猪中抗生素标记基因neo漂移的可能性。利用Southern blotting鉴定F1代仔猪的显隐性,结果发现6头仔猪中有3头为转基因仔猪,3头为阴性仔猪。通过PCR技术对试验仔猪血液和消化道组织中neo基因进行检测,结果发现neo基因没有在血液水平和消化道组织中发生漂移。通过PCR技术对试验仔猪肠道细菌中neo基因进行检测,在肠道细菌基因组中没有检测到neo基因的存在。检测结果表明,仔猪血液、肠道细菌和消化道组织等都没有发生neo基因的漂移。 展开更多

关键词 转基因仔猪 neo基因 基因漂移

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基于PERK通路探讨荣筋拈痛方对软骨细胞内质网应激反应抑制作用 被引量：4

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作者 付长龙 谢新宇 +4 位作者 何俊君 邱志伟 郑春松 叶锦霞 马德尊 《福建中医药》 2022年第4期22-24,28,共4页

目的基于PERK通路探讨荣筋拈痛方(RJNTD)对毒胡萝卜素(TG)诱导的软骨细胞内质网应激反应的抑制作用。方法将30只4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠处死后,体外分离双膝软骨细胞置于低糖DMEM培养基培养,经Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法鉴定后将软... 目的基于PERK通路探讨荣筋拈痛方(RJNTD)对毒胡萝卜素(TG)诱导的软骨细胞内质网应激反应的抑制作用。方法将30只4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠处死后,体外分离双膝软骨细胞置于低糖DMEM培养基培养,经Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法鉴定后将软骨细胞分成空白组、对照组、模型组和中药组。空白组常规培养4 h,对照组常规培养4 h后更换300μg/mL RJNTD培养液培养12 h,模型组用25μmol/L TG培养液培养4 h后改为常规培养,中药组用25μmol/L TG培养液培养4 h后更换300μg/mL RJNTD培养液培养12 h。干预后采用Real-time PCR检测各组软骨细胞中miRNA-377-3p相对表达水平;Western blot检测各组软骨细胞中内质网降解增强子(EDEM1)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、转录激活子4(ATF4)、免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)与DNA损伤诱导基因153(GADD153)蛋白表达水平。结果对照组各指标与空白组比较均无统计学意义(P均>0.05);与空白组比较,模型组及中药组miRNA-377-3p相对表达水平显著降低(P<0.05),且中药组较模型组降低更不明显(P<0.05);与空白组比较,模型组及中药组EDEM1、PERK、ATF4、BIP、GADD153蛋白表达水平均升高(P均<0.05),且中药组上述各指标较模型组升高更不明显(P均<0.05)。结论RJNTD可通过PERK通路抑制内质网应激反应,进而发挥延缓TG诱导的软骨细胞退变作用,其潜在作用机制可能与调节miRNA-377-3p相关。 展开更多

关键词 膝骨关节炎 荣筋拈痛方 软骨细胞退变 内质网应激 PERK

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基于lncRNA MALAT1调控软骨细胞胆固醇代谢探讨透骨消痛胶囊延缓骨关节炎退变的机制研究

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作者 付长龙 林艳铭 +4 位作者 涂海水 叶锦霞 黄艳峰 马德尊 郑春松 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1785-1792,共8页

从长链非编码RNA肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)调控软骨细胞胆固醇代谢角度,探讨透骨消痛胶囊(Tougu Xiaotong Capsules,TGXTC)延缓骨关节炎退变的作用与机制。8周龄C57BL/6小鼠48只经适应性喂养1周后,随机数字表法分为空白组12只、造模... 从长链非编码RNA肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)调控软骨细胞胆固醇代谢角度,探讨透骨消痛胶囊(Tougu Xiaotong Capsules,TGXTC)延缓骨关节炎退变的作用与机制。8周龄C57BL/6小鼠48只经适应性喂养1周后,随机数字表法分为空白组12只、造模组36只,造模组动物经5%异氟醚吸入麻醉后,采用Hulth法诱导骨关节炎(OA)模型,随机分为模型组12只、阳性药组(牛磺熊去氧胆酸)12只、透骨消痛胶囊组12只。阳性药组予以牛磺熊去氧胆酸500 mg·kg-1进行灌胃;透骨消痛胶囊组予以透骨消痛胶囊368 mg·kg-1进行灌胃;空白组和模型组给予等量生理盐水灌服,连续灌胃4周。干预结束后,麻醉下处死各组小鼠,分离与收集膝关节软骨组织。通过形态学染色观察小鼠膝关节软骨组织结构变化;通过real-time PCR检测小鼠软骨组织中lncRNA MALAT1水平变化;通过Western blot检测小鼠关节软骨中ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、载脂蛋白A1(ApoA1)、肝X核激素受体β(LXRβ)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、胱天蛋白酶(caspase)-3蛋白表达情况。使用慢病毒包被的质粒进行敲减肺腺癌转录本1(sh-MALAT1)转染小鼠软骨细胞;real-time PCR检测sh-MALAT1转染小鼠软骨细胞中lncRNA MALAT1基因水平;Western blot检测透骨消痛胶囊对lncRNA MALAT1敲低后,毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导的小鼠软骨细胞ABCA1、ApoA1、LXRβ、CHOP、caspase-3蛋白含量表达情况。流式细胞术检测透骨消痛胶囊对lncRNA MALAT1敲低后TG诱导的小鼠软骨细胞凋亡率影响。苏木精-伊红(HE)染色与番红O染色结果显示,与模型组比较,透骨消痛胶囊组、阳性药组软骨层结构基本完整,关节结构破坏程度显著改善,软骨基质被番红O染色显著增强;与模型组比较,透骨消痛胶囊组、阳性药组中lncRNA MALAT1水平明显降低;与模型组比较,透骨消痛胶囊组、阳性药组的ABCA1、ApoA1、LXRβ蛋白含量表达显著增高,CHOP、caspase-3蛋白含量表达显著降低。与TG组比较,TG+sh-MALAT1组的lncRNA MALAT1水平下降;与TG+透骨消痛胶囊组比较,TG+sh-MALAT1+透骨消痛胶囊组的lncRNA MALAT1水平升高;Western blot结果显示,与模型组比较,透骨消痛胶囊组ABCA1、ApoA1、LXRβ、CHOP、caspase-3蛋白含量表达显著降低,lncRNA MALAT1敲低后,透骨消痛胶囊对TG诱导的小鼠软骨细胞中ABCA1、ApoA1、LXRβ、CHOP、caspase-3调控作用及凋亡率影响减弱。透骨消痛胶囊可改善OA软骨细胞胆固醇代谢紊乱,进而延缓OA退变,与调控lncRNA MALAT1关系密切。 展开更多

关键词 透骨消痛胶囊 骨关节炎 胆固醇代谢 软骨退变

原文传递

乌头汤通过lncRNANEAT1调控IRE1α/XBP1途径减轻软骨细胞内质网应激的作用

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作者 金灵璐 涂海水 +5 位作者 谢新宇 马德尊 叶锦霞 郑春松 仲卫红 付长龙 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1238-1245,共8页

目的:探讨乌头汤通过lncRNA NEAT1调控IRE1α/XBP1途径减轻毒胡萝卜素(TG)诱导的软骨细胞内质网应激的作用与机制。方法:采用荧光原位杂交(FISH)检测25μmol/L TG诱导的软骨细胞中lncRNA NEAT1分布情况;构建lncRNA NEAT1沉默软骨细胞,Re... 目的:探讨乌头汤通过lncRNA NEAT1调控IRE1α/XBP1途径减轻毒胡萝卜素(TG)诱导的软骨细胞内质网应激的作用与机制。方法:采用荧光原位杂交(FISH)检测25μmol/L TG诱导的软骨细胞中lncRNA NEAT1分布情况;构建lncRNA NEAT1沉默软骨细胞,Real-time PCR检测其IRE1α、XBP1 mRNA水平变化;Western Blot检测其IRE1α、XBP1蛋白表达。使用第一代软骨细胞进行后续实验,设置空白组(10%DMEM)、TG组(25μmol/L TG+10%DMEM)、乌头汤含药血清组(25μmol/L TG+不同浓度含药血清)。Real-time PCR检测TG诱导的软骨细胞中lncRNA NEAT1 mRNA水平变化;Western Blot检测TG诱导的软骨细胞中IRE1α、XBP1、EDEM1、CHOP蛋白表达。免疫荧光染色观察各组软骨细胞中IRE1α、Caspase-12的荧光表达量。流式细胞术检测各组软骨细胞凋亡率情况。结果:FISH结果显示,lncRNANEAT1主要分布于软骨细胞的胞核中。与TG+Lenti-control组比较,TG+sh-NEAT1组IRE1α、XBP1 mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。与TG组比较,乌头汤含药血清组lncRNA NEAT1水平及IRE1α、XBP1、EDEM1、CHOP蛋白表达显著降低(P<0.01),IRE1α、Caspase-12的荧光表达量显著降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。结论:乌头汤可通过lncRNA NEAT1调控IRE1α/XBP1途径减轻TG诱导的软骨细胞内质网应激,延缓软骨细胞退变。 展开更多

关键词 骨关节炎 乌头汤 内质网应激 软骨细胞 lncRNANEAT1

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