乌灵菌粉的镇静作用及其机理研究 被引量：154

1

作者 马志章 左萍萍 +4 位作者 陈宛如 唐利军 沈琦 孙晓华 沈云 《中国药学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第6期374-377,共4页

目的：研究真菌中药乌灵菌粉对小鼠的镇静安眼作用及其机制。方法：以常规的药理试验方法检测本药在戊巴比妥钠协同下对小鼠睡眠的影响；以同位素掺入法研究作用机理。结果：乌灵菌粉在戊巴比妥钠协同下有明显的促睡眠作用，并使自主活... 目的：研究真菌中药乌灵菌粉对小鼠的镇静安眼作用及其机制。方法：以常规的药理试验方法检测本药在戊巴比妥钠协同下对小鼠睡眠的影响；以同位素掺入法研究作用机理。结果：乌灵菌粉在戊巴比妥钠协同下有明显的促睡眠作用，并使自主活动减少。同时服药小鼠脑内谷氨酸（Ｇｌｕ）和γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）的含量及ＧＡＢＡ受体的结合活性均高于对照，药物还能提高谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）的活性。结论：乌灵菌粉可能是通过促使Ｇｌｕ，ＧＡＢＡ进入脑内，提高ＧＡＤ活性及激活ＧＡＢＡ受体而实现其镇静作用。 展开更多

关键词 乌灵菌粉 镇静 安眠 小鼠 真菌菌核

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乌灵参对贫血大鼠造血功能的影响 被引量：9

2

作者 马志章 查士隽 +2 位作者 虞研原 李大林 陈宛如 《科技通报》 1992年第4期252-254,共3页

给失血50％的大鼠灌服乌灵参及FeSO_4(加VitC)10d,每隔1d检查血象1次,共12次.结果表明,给药期间RBC和Hb数量的增长率,乌灵参组明显地高于对照组,但与FeSO_4组之间无显著差异.乌灵参还明显地缩短RBC和Hb恢复至放血前90％的水平所需要的时间.

关键词 贫血 乌灵参 RBC HB 大鼠 造血功能

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用^3H—TdR掺入法检测小鼠LAK细胞活性 被引量：4

3

作者 马志章 丁仁瑞 +2 位作者 申屠 晓芳 江希明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期20-21,28,共3页

本文用~3H-TdR掺入法检测小鼠淋巴因子活化性杀伤细胞(LAK细胞)的活性。结果表明它对4种肿瘤细胞均呈现极高的细胞毒活性,对正常细胞却不表现细胞毒。淋巴器官中脾脏LAK细胞活性最高,淋巴结次之,胸腺则不表现活性。比较3种不同品系小鼠... 本文用~3H-TdR掺入法检测小鼠淋巴因子活化性杀伤细胞(LAK细胞)的活性。结果表明它对4种肿瘤细胞均呈现极高的细胞毒活性,对正常细胞却不表现细胞毒。淋巴器官中脾脏LAK细胞活性最高,淋巴结次之,胸腺则不表现活性。比较3种不同品系小鼠的LAK细胞,它们的活性也不一致,存在明显差异。 展开更多

关键词 细胞活性 LAK细胞 ^3H-TDR

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电场对生物细胞的作用及其实际应用 被引量：5

4

作者 马志章 蒋承浚 《细胞生物学杂志》 CSCD 1996年第3期111-115,共5页

电场对细胞作用的研究是细胞生物物理学的传统领域之一。近年来由于引入了新的技术和方法,使电场在生物与医学的实际应用方面开辟了广阔的途径。在所应用的电场中,无论是高电压强脉冲或是弱的交变场电脉冲都能对生物细胞的活动产生作用... 电场对细胞作用的研究是细胞生物物理学的传统领域之一。近年来由于引入了新的技术和方法,使电场在生物与医学的实际应用方面开辟了广阔的途径。在所应用的电场中,无论是高电压强脉冲或是弱的交变场电脉冲都能对生物细胞的活动产生作用,并伴随许多后续的影响(见表1) 展开更多

关键词 细胞 电场 生物效应

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人干扰素/β肿瘤坏死因子重组杂合蛋白的免疫调节功能 被引量：1

5

作者 马志章 查士隽 丁仁瑞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期99-99,共1页

报道了人干扰素／β肿瘤坏死因子（ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β）杂合蛋白对正常动物免疫反应的影响，结果如下：经ＬＰＳ激活的豚鼠腹腔巨噬细胞，当与适宜剂量的杂合蛋白温育后，其无细胞上清液中的Ｈ２Ｏ２浓度高于对照组。Ｄ... 报道了人干扰素／β肿瘤坏死因子（ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β）杂合蛋白对正常动物免疫反应的影响，结果如下：经ＬＰＳ激活的豚鼠腹腔巨噬细胞，当与适宜剂量的杂合蛋白温育后，其无细胞上清液中的Ｈ２Ｏ２浓度高于对照组。ＤＮＣＢ致敏的大鼠在半抗原攻击前，如在一侧耳翼内注入适宜剂量的ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β，则由ＤＮＣＢ诱导的迟发超敏（ＤＴＨ）反应大于在另一侧耳翼内注入ＰＢＳ作为对照的反应强度。在抗体形成细胞（ＡＦＣ）反应检测系统中，经异种红细胞致敏的小鼠免疫脾细胞用杂合蛋白做短暂处理后，其ＡＦＣ反应比对照组有所增强。 展开更多

关键词 杂合蛋白 免疫调节 Γ干扰素 肿瘤坏死因子

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淋巴细胞活化辅助分子与信号转导 被引量：2

6

作者 马志章 周晴 丁仁瑞 《基础医学与临床》 CSCD 1996年第3期174-180,共7页

淋巴细胞活化辅助分子与信号转导马志章，周晴，丁仁瑞（杭州大学生命科学学院，杭州３１００２８）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｏｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆａｎａｎｔｉｇｅｎｔｈｒｏｕｇｈａ... 淋巴细胞活化辅助分子与信号转导马志章，周晴，丁仁瑞（杭州大学生命科学学院，杭州３１００２８）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｏｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆａｎａｎｔｉｇｅｎｔｈｒｏｕｇｈａｎｔｉｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｌ... 展开更多

关键词 淋巴细胞 活化辅助分子 信号转导

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重组人肿瘤坏死因子β(HuTNFβ)的纯化及抗肿瘤效应的初步研究

7

作者 马志章 陆小兰 +3 位作者 陈明 钱骏 徐必钱 丁仁瑞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期272-272,共1页

本文利用能表达HuTNFβ的工程菌株(P20KLT)按常规培养及扩增．即采用LB培养液(内含Amp100．μg／ml Tet 5μg／ml)；1：40扩增．当A550达0．1时，加入IAA(20μg／ml)，当A550为1．0时，中止培养，离心(5000rpm，4℃)收集菌体。在菌体中... 本文利用能表达HuTNFβ的工程菌株(P20KLT)按常规培养及扩增．即采用LB培养液(内含Amp100．μg／ml Tet 5μg／ml)；1：40扩增．当A550达0．1时，加入IAA(20μg／ml)，当A550为1．0时，中止培养，离心(5000rpm，4℃)收集菌体。在菌体中按1：5加入缓冲液，冰浴中超声破碎，13，000rpm高速离心20分钟， 展开更多

关键词 TNF 重组人肿瘤坏死因子 抗肿瘤效应 扩增 初步研究 超声 纯化 工程菌 菌体 缓冲液

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黑柄炭角菌多糖对小鼠巨噬细胞功能的影响 被引量：18

8

作者 张曙云 马志章 +2 位作者 陈宛如 李大林 丁仁瑞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第2期13-16,共4页

本文研究了一种药用真菌一黑柄炭角菌的多糖提取物对小鼠巨噬细胞(Mφ)功能的影响。实验表明,该多糖能在体内激活正常和带瘤小鼠腹腔的Mφ,促进Mφ对肿瘤细胞(EAC)的细胞毒作用,用3H—TdR掺入法检测,肿瘤细胞增殖抑制率可达85～90％,但... 本文研究了一种药用真菌一黑柄炭角菌的多糖提取物对小鼠巨噬细胞(Mφ)功能的影响。实验表明,该多糖能在体内激活正常和带瘤小鼠腹腔的Mφ,促进Mφ对肿瘤细胞(EAC)的细胞毒作用,用3H—TdR掺入法检测,肿瘤细胞增殖抑制率可达85～90％,但在体外则没有直接激活Mφ的作用。该多糖可以提高Mφ的吞噬活力,它也能刺激Mφ分泌淋巴因子—IL—1,其活性可比对照组高1.5倍以上。比较天然和人工培养的炭角菌,它们促进Mφ功能的效果相似。该多糖对Mφ功能的良好作用意味着它在提高机体免疫功能方面有着积极的意义。 展开更多

关键词 黑柄炭角菌 巨噬细胞 药用真菌

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表达载体pRSET C重组rhTNF-β的表达及其纯化 被引量：2

9

作者 邱莲女 马志章 +3 位作者 周晴 李芳芳 陈常庆 丁仁瑞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期167-169,共3页

将hTNFβN端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSETC的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNFβ获得了高表达,表达量占细菌总蛋白的26%。其表达产物大部分以可溶性形式存在... 将hTNFβN端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSETC的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNFβ获得了高表达,表达量占细菌总蛋白的26%。其表达产物大部分以可溶性形式存在。菌体裂解上清经0.45μm滤膜过滤后,用固定化金属配体亲和柱层析,纯度可达95%左右;经肠激酶酶切后,具有TNFβ的细胞毒活性,此活性为9.8×109U/g。 展开更多

关键词 表达载体 pRSET C rhTNF-β 表达 纯化

原文传递

人TNFβ缺失体融合表达及其产物一步纯化法研究 被引量：2

10

作者 徐建芬 周晴 +3 位作者 马志章 余建法 华明 丁仁瑞 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第1期1-5,共5页

本文将hTNFβN端缺失 2 3aa的缺失体基因克隆于 pET 2 8 C(+ ) 表达载体 ,构建成T7lac启动子控制下His6 TNFβ融合表达质粒 ,转化到E coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,His6 TNFβ表达量约占总菌体蛋白的 2 5 % ,Mr2 0 5 0 0。表达产... 本文将hTNFβN端缺失 2 3aa的缺失体基因克隆于 pET 2 8 C(+ ) 表达载体 ,构建成T7lac启动子控制下His6 TNFβ融合表达质粒 ,转化到E coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,His6 TNFβ表达量约占总菌体蛋白的 2 5 % ,Mr2 0 5 0 0。表达产物大部分以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤 ,70mol/L脲变性溶解 ,用Ni2 + 亲和层析一步快速纯化 ,所得His6 TNFβ的纯度达 90 %以上 ,回收率在 90 %左右。纯化产物稀释复性后 ,其细胞毒活性为 (0 5～ 1 0 )× 10 6U/mg蛋白左右。这些研究结果将为制备重组人TNFβ缺失体以及进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 肿瘤环死因子 一步 经法 缺失体 TNFΒ

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硒及黑柄炭角菌多糖对LICC的调节研究 被引量：10

11

作者 陆小兰 马志章 丁仁瑞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第1期13-16,共4页

由Na_2SeO_3及黑柄炭角菌多糖活化腹腔Mφ,其产生的细胞毒细胞分化因子(CCDF)可与IL-2协同激活淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。研究表明:两者诱导的LICC在杀伤肿瘤靶细胞的活性方面均有促进作用,其中黑柄炭角菌多糖具有更强的调节功能... 由Na_2SeO_3及黑柄炭角菌多糖活化腹腔Mφ,其产生的细胞毒细胞分化因子(CCDF)可与IL-2协同激活淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。研究表明:两者诱导的LICC在杀伤肿瘤靶细胞的活性方面均有促进作用,其中黑柄炭角菌多糖具有更强的调节功能(P<0.05)。此外,还研究了抑瘤剂量的Na_2SeO_3对植瘤鼠(EAC)LICC活性的影响,发现高剂量的Na_2SeO_3对LICC有一定抑制作用,但与肿瘤所致的抑制相比,两者差异显著(P<0.05)。前者在停止给硒后,其活性可渐趋恢复。作者认为黑柄炭角菌是一类可通过诱导CCDF而对LICC起调节作用的免疫调节剂,对其最适剂量和作用机理有待进一步研究。 展开更多

关键词 硒 角菌多糖 细胞毒细胞

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人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白His6融合表达及一步纯化 被引量：3

12

作者 周晴 余建法 +1 位作者 马志章 丁仁瑞 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 2000年第2期188-192,共5页

将人γ干扰素 /β肿瘤坏死因子融合蛋白 ( hγTNF-β)重组基因克隆于表达载体 p ET2 8,构建成T7lac启动子控制下的 His6融合表达质粒 ,转化溶源菌 E.coli BL 2 1 ( DE3 ) .经 IPTG( 1 m M)诱导表达 ,阳性菌在 SDS-PAGE泳图上出现一条粗... 将人γ干扰素 /β肿瘤坏死因子融合蛋白 ( hγTNF-β)重组基因克隆于表达载体 p ET2 8,构建成T7lac启动子控制下的 His6融合表达质粒 ,转化溶源菌 E.coli BL 2 1 ( DE3 ) .经 IPTG( 1 m M)诱导表达 ,阳性菌在 SDS-PAGE泳图上出现一条粗表达带 ,其分子量 ( 3 2 k Da)与目的蛋白 His6-γ TNF-β)理论分子量相符 .薄层扫描与溶解性分析显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 4 5%以上 ,主要为不溶性的包涵体( IBs) .离心分离 IBs产物 ,溶于 7M尿素中 ,然后通过 Ni柱进行亲和层析 ,即可获得一步纯化的表达产物(纯度为 96%、回收率为 91 % ) .纯化产物再经复性缓冲液稀释复性 ,其细胞毒比活性与抗病毒比活性分别达到 1 .2× 1 0 7～ 2 .0× 1 0 7u/m gp和 6.6× 1 0 5～ 7.2× 1 0 展开更多

关键词 His6融合表达 Γ干扰素 β肿瘤坏死因子

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人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白原核细胞高效表达研究 被引量：2

13

作者 周晴 马志章 +3 位作者 冯根生 陈常庆 张惟杰 丁仁瑞 《基础医学与临床》 CSCD 1998年第6期51-56,共6页

利用ＤＮＡ重组技术，在构建人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３４Ｘ１３）表达质粒，取得高效表达的基础上，再将人β肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦβ１４３，Ｎ端缺失２３ａａ）的ＤＮＡ片段亚克隆到该质粒外源编码序列的３′端，构建... 利用ＤＮＡ重组技术，在构建人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３４Ｘ１３）表达质粒，取得高效表达的基础上，再将人β肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦβ１４３，Ｎ端缺失２３ａａ）的ＤＮＡ片段亚克隆到该质粒外源编码序列的３′端，构建成人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈγＴＮＦβ）的重组基因表达质粒，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。含有ｈγＴＮＦβ重组基因的阳性菌经温度（４２℃）诱导，在λＰＲＰＬ启动子的控制下，高效表达了ｈγＴＮＦβ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果显示，在理论分子量３０ｋＤ处出现特异的目的蛋白表达带，表达量约占全菌蛋白的１８％。表达产物主要以不溶性的包涵体（ＩＢｓ）形式存在，通过分离纯化ＩＢｓ产物及复性处理，表达产物的抗病毒比活性与细胞毒比活性分别达到５０～５８×１０７ｕ／ｍｇｐ和４２～４９×１０７ｕ／ｍｇｐ。 展开更多

关键词 融合蛋白 高效表达 TNF 干扰素 原核细胞

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IFNγ-LTα与LTα诱导L929细胞凋亡信号转导的初步研究 被引量：1

14

作者 梁赤周 丁鸣 +2 位作者 余建法 杨帆 马志章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期435-438,共4页

目的　研究融合蛋白IFNγ LTα诱导L92 9细胞凋亡的信号转导机制 ,并与LTα相比较。方法　用结晶紫染色法观察细胞毒效应 ;用检测试剂盒检测caspase 8和 3活性的变化 ;观察 3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ LTα和LTα诱导的细胞毒效应... 目的　研究融合蛋白IFNγ LTα诱导L92 9细胞凋亡的信号转导机制 ,并与LTα相比较。方法　用结晶紫染色法观察细胞毒效应 ;用检测试剂盒检测caspase 8和 3活性的变化 ;观察 3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ LTα和LTα诱导的细胞毒效应的影响。结果　IFNγ LTα能诱导L92 9细胞凋亡及胞内caspase 8和 3的活性变化 ,但两种caspase产生的时间和幅度有所不同。PKC的抑制剂可促进IFNγ LTα和LTα对L92 9细胞的杀伤 ;而PLA2及Ca2 +通道的抑制剂对杀伤则有明显的阻断作用 ,但对LTα的阻断强于对IFNγ LTα的阻断。结论　IFNγ LTα融合蛋白的抗肿瘤活性强于LTα ,其信号转导特征有别于LTα。信号分子caspase与PKC、PLA2、Ca2 展开更多

关键词 IFNγ-LTα LTα L929细胞 细胞凋亡 信号转导 信号转导分子抑制剂 结晶紫染色法

原文传递

碳酸酐酶与临床医学 被引量：2

15

作者 许丽丽 马志章 周双林 《生命的化学》 CAS CSCD 2003年第2期128-130,共3页

碳酸酐酶是一类含锌的蛋白酶 ,共发现了 10种同工酶及三种碳酸酐酶相关蛋白 ,广布于人体各组织 ,能可逆性地催化CO2 的水合反应 ,参与调节pH、离子运输等多种生理过程 ,碳酸酐酶的缺乏和异常将可能会导致一系列的疾病。

关键词 碳酸酐酶 亚细胞定位 作用机理 生理功能

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淋巴因子诱导的细胞毒细胞活性检测的研究 被引量：2

16

作者 陆小兰 马志章 丁仁瑞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期192-195,共4页

本文通过正交设计试验,建立了一种改良的诱生及检测LICC细胞毒活性的培养体系。先将脾脏淋巴细胞(5×10~6/ml)在含有IL-2(0.5U/ml)、CCDF(50％V/V)RPMI1640培养液中预培养72小时,然后加入肿瘤细胞(5×10~4/ml),用~3H-TdR后标法... 本文通过正交设计试验,建立了一种改良的诱生及检测LICC细胞毒活性的培养体系。先将脾脏淋巴细胞(5×10~6/ml)在含有IL-2(0.5U/ml)、CCDF(50％V/V)RPMI1640培养液中预培养72小时,然后加入肿瘤细胞(5×10~4/ml),用~3H-TdR后标法检测LICC细胞毒活性,杀伤时间为72小时。 展开更多

关键词 细胞毒细胞 淋巴因子诱导 IL-2

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人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达 被引量：1

17

作者 周晴 张惟杰 +2 位作者 马志章 应红宇 丁仁瑞 《浙江大学学报（自然科学版）》 CSCD 1999年第3期271-276,共6页

利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串... 利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串联起动子的下游，构建成人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１４）表达质粒．在质粒构建过程中，原载体上紧接ＳＤ序列后的ＥｃｏＲ１位点被新引入的Ｘｂａ１位点所取代，重组后的质粒，ＳＤ序列与ＡＴＧ起始密码子之间的核苷酸数达到１０个．经转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，温敏诱导表达，细菌稳定高效地表达了人γ干扰素突变体（１８ｋＤ），表达量约占菌体总蛋白的４２％，表达产物主要以包涵体形式存在．经初步纯化复性后，表达产物的干扰素（ＩＦＮ）抗病毒比活性达到１．１８×１０６Ｕ／ｍｇ蛋白． 展开更多

关键词 融合蛋白 γ干扰素突变体 β肿瘤坏死因子

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胱天蛋白酶(caspase)的前结构域 被引量：1

18

作者 梁赤周 马志章 《生命的化学》 CAS CSCD 2001年第5期373-376,共4页

关键词 CASPASE 细胞凋亡 前结构域 胱天蛋白酶

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人His6-TNF-β融合表达质粒的构建及其产物一步纯化法研究

19

作者 徐建芬 周晴 +4 位作者 马志章 华明 丁仁瑞 余建法 沈丙辉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第4期314-314,共1页

人β-肿瘤坏死因子（tumor mecrosis factor beta,TNF-β）又称淋巴毒素（lymphotoxin,LT）、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达.... 人β-肿瘤坏死因子（tumor mecrosis factor beta,TNF-β）又称淋巴毒素（lymphotoxin,LT）、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达.成熟的人TNF-β由171个aa组成,其N端为非功能区,研究发现若N端缺失25个aa,仍可保持其细胞毒活性;若缺失24个aa,则该缺失体的细胞毒作用可提高2～6倍,而对小鼠致死率却降低5倍.TNF-βC端结构的完整性对保持细胞毒活性是必需的,因此可通过构建N端的不同缺失体来重组高抗癌效应和低毒副作用的生物制剂.本文选用融台表达载体来组建人N端缺失体的表达质粒,并且借T（?）-lac启动子、His6-tag等元件,以期获得高效表达和利用Ni²⁺螯合树脂柱来亲和纯化,为进一步研究TNF-β缺失体的生物学活性和TNF-β的开发利用打下基础. 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 His6-TNF-β 质粒 纯化

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人His6-IFNγ/TNFβ(His6γ-TNFNβ)融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究

20

作者 余建法 周晴 +3 位作者 马志章 丁鸣 徐建芬 丁仁瑞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第4期256-260,共5页

应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养... 应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni^(2+)-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2～2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0～6.6)×10~6U/map. 展开更多

关键词 人IFNγ/TNFβ 融合蛋白 分离纯化

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