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代谢组分析不同碳源对铜绿假单胞菌ZS1代谢的影响
1
作者 马昀灏 张增平 +1 位作者 杨支力 刘建华 《浙江海洋大学学报（自然科学版）》 CAS 2023年第4期338-345,共8页
通过代谢组学分析了解葡萄糖培养基与YE培养基中培养的ZS1菌株生物合成鼠李糖脂的规律。发现Eetner-Doudoroff通路和EMP通路下游的代谢产物表达上调,而EMP通路上游和磷酸戊糖氧化途径的代谢产物表达下调。同时,丙酮酸转化为乙酰辅酶A的... 通过代谢组学分析了解葡萄糖培养基与YE培养基中培养的ZS1菌株生物合成鼠李糖脂的规律。发现Eetner-Doudoroff通路和EMP通路下游的代谢产物表达上调,而EMP通路上游和磷酸戊糖氧化途径的代谢产物表达下调。同时,丙酮酸转化为乙酰辅酶A的代谢产物表达上调,参与TCA循环的代谢产物表达下调。结果表明,与YE培养基相比,葡萄糖培养基培养的ZS1细胞将葡萄糖转化为乙酰辅酶A的酶活性有所提高。此外,在葡萄糖培养基中培养的ZS1细胞内,3-羟基癸酸酯(3-羟基癸酸衍生物)大量积累,这表明鼠李糖脂的合成受到dTDP-鼠李糖的限制,但不受3-羟基癸酸的限制。综上所述,葡萄糖培养基中培养的ZS1鼠李糖脂的促进作用受到dTDP-鼠李糖的限制,研究结果为研究ZS1鼠李糖脂生物合成的调控机制提供了新的思路。 展开更多
关键词 假单胞菌 生物表面活性剂 代谢组学
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液化沙雷氏菌ZS6脂肪酶的重组表达及功能分析
2
作者 马昀灏 张增平 +1 位作者 杨支力 刘建华 《浙江海洋大学学报（自然科学版）》 CAS 2023年第5期409-414,共6页
脂肪酶(E.C.3.1.1.3)在日常生活及工业生产中涉及油脂处理的方面有着广泛应用。课题组前期从舟山海域石油污泥中筛选出1株分泌脂肪酶的菌株,经分子鉴定后确定为液化沙雷氏菌,将其命名为液化沙雷氏菌ZS6。ZS6菌株脂肪酶分泌量较低,因此... 脂肪酶(E.C.3.1.1.3)在日常生活及工业生产中涉及油脂处理的方面有着广泛应用。课题组前期从舟山海域石油污泥中筛选出1株分泌脂肪酶的菌株,经分子鉴定后确定为液化沙雷氏菌,将其命名为液化沙雷氏菌ZS6。ZS6菌株脂肪酶分泌量较低,因此采用大肠杆菌表达体系对ZS6脂肪酶进行重组表达。使用pET28a质粒作为重组蛋白表达载体,通过IPTG诱导大肠杆菌表达脂肪酶蛋白。表达产物经纯化—复性—冻干处理后得到脂肪酶结晶,经分光光度法测得活性达到1400 U·mg^(-1)。该研究结果可以应用于固定化脂肪酶的制备以及脂肪酶的工业化生产。 展开更多
关键词 沙雷氏菌 脂肪酶 重组表达
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假单胞菌ZS1鼠李糖基转移酶migA和wapR的缺失对细胞壁结构及鼠李糖脂合成的影响
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作者 张增平 金扬帆 +2 位作者 马昀灏 杨支力 刘建华 《浙江海洋大学学报（自然科学版）》 CAS 2023年第4期352-359,共8页
假单胞菌ZS1是本实验室在前期工作中从油污中分离出的1株高产鼠李糖脂菌株。本实验拟探究阻断脂多糖O-抗原添加鼠李糖基对假单胞菌ZS1鼠李糖脂合成的影响。通过两步法敲除技术,构建了假单胞菌ZS1的wapR和migA缺失突变菌株。发酵结果表明... 假单胞菌ZS1是本实验室在前期工作中从油污中分离出的1株高产鼠李糖脂菌株。本实验拟探究阻断脂多糖O-抗原添加鼠李糖基对假单胞菌ZS1鼠李糖脂合成的影响。通过两步法敲除技术,构建了假单胞菌ZS1的wapR和migA缺失突变菌株。发酵结果表明wapR缺失突变株在培养过程中鼠李糖脂合成量显著增加,而migA缺失突变株则只有少量的提升。SDS-PAGE银染结果表明,wapR缺失突变菌株的脂多糖的组分出现显著变化,O-抗原部分几乎完全消失。而migA缺失突变菌株脂多糖组成无显著变化。通过对突变株和野生株在不同抗生素的梯度浓度培养,发现wapR缺失突变菌株对四环素浓度敏感性从125μg·mL^(-1)降低至31.2μg·mL^(-1),而migA缺失突变菌株对四环素的敏感性与野生株相仿,说明假单胞菌脂多糖的缺失能够提高细菌对抗生素的敏感性,从而降低病原菌的危害性。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 鼠李糖脂 脂多糖 O-抗原 基因敲除
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假单胞菌ZS1糖基转移酶wbpXYZ的缺失对细胞壁结构及鼠李糖脂合成的影响
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作者 张增平 黄小佩 +2 位作者 马昀灏 杨支力 刘建华 《浙江海洋大学学报（自然科学版）》 CAS 2023年第5期439-446,共8页
糖基供体通常以活性核糖的形式存在于细胞内,wbpX、wbpY以及wbpZ(糖基转移酶)等基因负责转运细胞内的活性糖基分子。糖基转移酶通过运送dTDP-鼠李糖(脂多糖合成前体之一)将鼠李糖基由细胞内转至胞外脂多糖O-抗原B-band部分。同时,参与... 糖基供体通常以活性核糖的形式存在于细胞内,wbpX、wbpY以及wbpZ(糖基转移酶)等基因负责转运细胞内的活性糖基分子。糖基转移酶通过运送dTDP-鼠李糖(脂多糖合成前体之一)将鼠李糖基由细胞内转至胞外脂多糖O-抗原B-band部分。同时,参与鼠李糖脂合成的RhlB和RhlC(鼠李糖基转移酶)将dTDP-鼠李糖中的鼠李糖连接至3-羟基脂肪酸分别合成单、双鼠李糖脂。假单胞菌ZS1是本实验室在前期工作中从油污中分离出的1株高产鼠李糖脂菌株,本实验拟探究阻断脂多糖O-抗原B-band中鼠李糖基的添加对假单胞菌ZS1鼠李糖脂合成的影响。为此,构建了假单胞菌ZS1的wbpX、wbpY以及wbpZ 3个独立缺失突变菌株。结果表明,wbpX和wbpZ突变株的鼠李糖脂合成量均有增加,其中wbpZ的突变株合成量最高,较原菌株提高50%。SDS-PAGE分析结果表明,wbpZ缺失突变菌株的脂多糖O-抗原量显著降低;而wbpX和wbpY缺失突变菌株脂多糖含量变化不显著。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 鼠李糖脂 脂多糖合成 基因敲除
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