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天麻PCR‑层析试纸条快速可视化检测方法的建立与评价
1
作者 马秋贺 马玉贺 +9 位作者 刘悦 李涛 刘昂 徐子强 柴金军 王艳茹 高丽君 夏薇 李明成 曲永梅 《上海中医药杂志》 CSCD 2024年第3期79-85,共7页
目的通过聚合酶链式反应(PCR)与层析试纸条结合的方法,实现天麻快速可视化真伪鉴别,并对其检测效果进行评价。方法采用一步法提取天麻及其伪品基因组DNA,应用NCBI数据库设计天麻特异性引物。采用DNA分子克隆技术制备天麻阳性质粒,作为... 目的通过聚合酶链式反应(PCR)与层析试纸条结合的方法,实现天麻快速可视化真伪鉴别,并对其检测效果进行评价。方法采用一步法提取天麻及其伪品基因组DNA,应用NCBI数据库设计天麻特异性引物。采用DNA分子克隆技术制备天麻阳性质粒,作为天麻阳性对照品。建立PCR-层析试纸条法鉴定天麻真伪,摸索最优实验条件,并进行方法学评价。结果①样品DNA提取的纯度符合要求,最优的PCR反应引物浓度为1μmol/L,循环为29次。②分子克隆的天麻阳性质粒序列与天麻DNA分子标记特异性指纹区片段序列同源性为98%,可作为天麻PCR-层析试纸条法的阳性对照品。③PCR-层析试纸条法的方法学评价结果显示:天麻对照药材在试纸条上出现两个条带,伪品和阴性对照品出现1个条带,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致,特异性良好;PCR-层析试纸条法较琼脂糖凝胶电泳法的灵敏度高100倍,天麻DNA浓度为10-1 mg/L时,试纸条仍有模糊条带;在第3、6、9、12个月采用PCR-层析试纸条法进行检测,检测结果与预期一致,稳定性良好;混合样品验证显示,PCR-层析试纸条法的最低检测限为10%,而琼脂糖凝胶电泳法的最低检测限为50%。④采用PCR-层析试纸条法对15份市售天麻样品进行检测,鉴别出3个伪品,与琼脂糖凝胶电泳法结果一致。结论所构建的PCR-层析试纸条检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便快速,可在短时间内实现鉴定结果的可视化,检测结果准确、稳定,为道地药材天麻的真伪鉴别提供了新方法。 展开更多
关键词 天麻 聚合酶链式反应 试纸条 分子克隆 可视化鉴定 中药研究
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河北省保定市满城区就脱贫退出工作进行集中督查
2
作者 马秋贺 《中国民政》 2018年第22期63-64,共2页
为确保11月底前完成精准脱贫退出工作,河北省保定市满城区民政局抽调精干力量分组深入各乡镇236户拟脱贫建档立卡贫困户家中开展入户核查工作。此次核查主要采取查阅资料和走访调查两种方式进行,主要针对贫困户脱贫路径、措施及“两不... 为确保11月底前完成精准脱贫退出工作,河北省保定市满城区民政局抽调精干力量分组深入各乡镇236户拟脱贫建档立卡贫困户家中开展入户核查工作。此次核查主要采取查阅资料和走访调查两种方式进行,主要针对贫困户脱贫路径、措施及“两不愁”、“三保障”情况进行详细摸底。 展开更多
关键词 保定市 河北省 脱贫 城区 督查 核查工作 查阅资料 贫困户
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基于酶促恒温扩增技术快速鉴别天麻真伪检测方法的建立与应用
3
作者 马秋贺 马玉贺 +8 位作者 李涛 刘悦 柴金军 徐子强 刘昂 高丽君 夏薇 李明成 曲永梅 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期729-736,共8页
目的:基于酶促恒温扩增(enzymatic recombinase amplification, ERA)技术建立一种可快速定性鉴别道地药材天麻真伪的方法。方法:遵循ERA引物设计原则,应用Oligo 7.0软件根据天麻及其常见伪品的ITS2基因组序列,筛选优化天麻ERA特异性引物... 目的:基于酶促恒温扩增(enzymatic recombinase amplification, ERA)技术建立一种可快速定性鉴别道地药材天麻真伪的方法。方法:遵循ERA引物设计原则,应用Oligo 7.0软件根据天麻及其常见伪品的ITS2基因组序列,筛选优化天麻ERA特异性引物,应用Primer Premier 5.0软件设计天麻特异性PCR鉴别引物,通过对ERA、PCR反应体系的优化,最终确定ERA最佳反应时间为17 min,最适反应温度为40℃;PCR最优退火温度为57℃,循环为32次,对所建立的方法进行灵敏度、特异性验证,并选取中药市场市售天麻样品进行检测。结果:所设计的天麻ERA鉴别引物与其常见伪品间无交叉反应,特异性良好;重复性结果显示,3次重复性检测结果一致,未出现假阳性与假阴性;该方法对天麻基因组DNA的灵敏度为1 pg·μL^(-1),比传统PCR灵敏性高;ERA技术能够用于天麻市售样品的快速鉴定,且检测结果与PCR方法相同。结论:所建立的检测方法操作简单、快速,具有较高的特异性和灵敏度,为道地药材天麻的真伪鉴别提供了一种新手段。 展开更多
关键词 酶促恒温扩增 聚合酶链式反应 天麻 定性 真伪鉴定 快速检测
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道地药材天麻DNA真伪鉴定试剂盒的研制与评价
4
作者 马秋贺 马玉贺 +5 位作者 刘悦 李涛 高丽君 夏薇 李明成 曲永梅 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1198-1203,共6页
目的建立一种将DNA提取技术与PCR技术相结合的天麻DNA真伪鉴定试剂盒,并对试剂盒性能进行方法学评价。方法通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)查找天麻及其常见伪品紫茉莉根、大丽菊块茎、马铃薯的ITS2序列,应用DNAMAN进行多序列比对,N... 目的建立一种将DNA提取技术与PCR技术相结合的天麻DNA真伪鉴定试剂盒,并对试剂盒性能进行方法学评价。方法通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)查找天麻及其常见伪品紫茉莉根、大丽菊块茎、马铃薯的ITS2序列,应用DNAMAN进行多序列比对,NCBI-Primer-Blast设计天麻特异性引物。改良植物常用DNA提取的CTAB法,确保提取出高效的正品天麻及其常见伪品的基因组DNA,应用紫外分光光度法测其浓度及纯度。优化PCR反应体系,确定试剂盒的组成与反应条件,随机抽样检测市售天麻样品。结果应用所研制的试剂盒提取样品DNA,纯度OD260/OD280值为(1.87±0.13),灵敏度为10 ng·μL^(-1),3次重复性检测结果相同,反复冻融5、10、15、20次对检测效果无影响,于-20℃可保存1年,检测10个市售天麻样品,其中7个是正品,3个是伪品。结论道地药材天麻DNA真伪鉴定试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性和稳定性均良好,检测结果准确,适用于天麻及其常见伪品的快速鉴别。 展开更多
关键词 天麻 ITS2 DNA提取 真伪鉴定试剂盒 聚合酶链式反应
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平贝母PCR-核酸试纸条快速检测方法的建立和评价
5
作者 马玉贺 商聪慧 +7 位作者 马秋贺 李涛 刘悦 潘蓓珍 高丽君 李明成 夏薇 曲永梅 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1773-1778,共6页
本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复... 本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复性,对市售样品进行真伪鉴定。结果显示,基于ITS2序列可对平贝母及其混伪品进行区分。正品平贝母PCR产物滴定于试纸条上显示T、C线两条带,伪品与阴性对照只显示C线一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合。特异性为100%,PCR-核酸试纸条灵敏度可达0.1 ng·μL^(-1),高于凝胶电泳检测10倍。16个平贝母市售样品中11个合格,5个不合格。综上,本研究建立的平贝母PCR-核酸试纸条检测方法特异、快速、精准、可视化,可为平贝母检测提供新的技术思路。 展开更多
关键词 平贝母 分子克隆 ITS2序列 核酸试纸条 可视化
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PCR-核酸试纸条检测方法鉴别蛤蚧真伪 被引量：3
6
作者 迟凯月 马玉贺 +8 位作者 马秋贺 刘悦 李涛 刘馨悦 高丽君 母润红 李明成 夏薇 曲永梅 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1484-1493,共10页
目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应... 目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应条件。结果:通过PCR-核酸试纸条对蛤蚧进行定性分析,正品蛤蚧在PCR-核酸试纸条上均出现2条带,伪品以及阴性对照均出现1条带。结论:PCR-核酸试纸条检测方法可实现短时间内蛤蚧可视化检测,操作方便,结果准确,可以为蛤蚧的DNA分子鉴别提供技术保障。 展开更多
关键词 蛤蚧 真伪 鉴别 核酸试纸条 靶基因 聚合酶链式反应(PCR)
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快速鉴定鹿茸真伪及其种属检测试剂的试验研究 被引量：1
7
作者 徐宁 马玉贺 +4 位作者 马秋贺 艾金霞 母润红 高丽君 夏薇 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1435-1445,共11页
目的:建立1种双重PCR检测体系,根据琼脂糖凝胶电泳目的条带位置及数量快速鉴定花鹿茸、马鹿茸及常见伪品驯鹿茸。方法:采用碱变性法提取鹿茸样品基因组DNA,以鹿科动物Cytb和COI基因为靶序列,应用Primer 3.0,根据SNP位点设计特异性鉴别引... 目的:建立1种双重PCR检测体系,根据琼脂糖凝胶电泳目的条带位置及数量快速鉴定花鹿茸、马鹿茸及常见伪品驯鹿茸。方法:采用碱变性法提取鹿茸样品基因组DNA,以鹿科动物Cytb和COI基因为靶序列,应用Primer 3.0,根据SNP位点设计特异性鉴别引物(Cy-1、COI-1),并摸索及优化PCR反应体系及条件,同时,采用克隆及测序验证检测结果的准确性。结果:建立的双重PCR扩增体系显示,花鹿茸在电泳图谱408 bp及146 bp处可见2条扩增条带,马鹿茸则在146 bp处见1条目的条带,而伪品鹿茸则无扩增条带,与质粒克隆测序验证的结果一致。且市售鹿茸样品的检测结果与鉴定结果相吻合。结论:本试验自主构建的双重PCR检测体系简便、迅速,检测试剂结果准确,稳定性良好,在分子水平实现一步法鉴定花鹿茸、马鹿茸及其常见伪品,具有较大实用价值。 展开更多
关键词 花鹿茸 马鹿茸 双重聚合酶链式反应 位点特异性 检测试剂
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蛤蚧真伪鉴定试剂盒的研制与性能评价
8
作者 迟凯月 刘馨悦 +8 位作者 于文莹 徐宁 邵博宇 马玉贺 马秋贺 高丽君 艾金霞 李明成 夏薇 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期895-898,共4页
目的 蛤蚧作为我国的名贵中药材,资源少,市场需求量大,导致市场常有混伪品出现,因此研制蛤蚧真伪鉴定试剂盒,为蛤蚧药材鉴定提供新的方法。方法 以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR反应条件,研制... 目的 蛤蚧作为我国的名贵中药材,资源少,市场需求量大,导致市场常有混伪品出现,因此研制蛤蚧真伪鉴定试剂盒,为蛤蚧药材鉴定提供新的方法。方法 以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR反应条件,研制蛤蚧真伪鉴定试剂盒。结果 扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳后,正品可以扩增出约250~500bp之间(473bp)的扩增条带,而伪品无蹼壁虎和石龙子均没有条带。结论 研制出的蛤蚧真伪鉴定试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性好,适用范围广,操作简单,结果准确,可以为蛤蚧的DNA分子鉴别提供技术保障,可以保证药源无误,药效可靠。 展开更多
关键词 蛤蚧 鉴定 试剂盒 分子生物学 性能评价
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基于PCR-核酸试纸条快速鉴定鹿茸及其伪品的实验研究 被引量：5
9
作者 徐宁 邵博宇 +7 位作者 于文莹 迟凯月 马玉贺 马秋贺 艾金霞 李明成 高丽君 夏薇 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第18期1528-1534,共7页
目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧... 目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧化酶亚基I(COI)特异性位点,应用Primer 3.0软件设计鹿茸特异引物,摸索PCR最佳反应体系及条件,建立PCR-核酸试纸条及琼脂糖凝胶电泳鉴定鹿茸真伪的最优条件。同时,通过克隆测序,验证鹿茸真伪鉴定的准确性。结果 本实验中正品鹿茸在PCR-核酸试纸条上均出现两条带,阴性对照及伪品出现一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,且试纸条检测的灵敏度可达1 ng·μL^(-1)。对9个市售鹿茸样品检测,正品鹿茸5个,合格率为45%。结论 自主构建的PCR-核酸试纸条检测方法简单、快速、特异性较好,可在较短时间内实现鹿茸真伪的可视化检测,检测结果稳定,为中药材鉴定提供又一新的方法。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 鹿茸 核酸试纸条 可视化 DNA指纹
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鉴定鸭血及掺假品种的多重PCR方法的建立及应用 被引量：2
10
作者 于文莹 迟凯月 +5 位作者 徐宁 马秋贺 马玉贺 高丽君 艾金霞 夏薇 《食品科技》 CAS 北大核心 2022年第12期307-312,共6页
目的:建立多重PCR方法,鉴别鸭血的真伪,同时鉴定猪血、羊血、牛血、鸡血4种常见掺假动物血。方法:采用试剂盒法和高效提取禽类血液DNA法提取鸭血及其伪品的基因组DNA,利用鸭血细胞色素b基因(Cytb)设计特异性引物,通过文献筛选掺假动物... 目的:建立多重PCR方法,鉴别鸭血的真伪,同时鉴定猪血、羊血、牛血、鸡血4种常见掺假动物血。方法:采用试剂盒法和高效提取禽类血液DNA法提取鸭血及其伪品的基因组DNA,利用鸭血细胞色素b基因(Cytb)设计特异性引物,通过文献筛选掺假动物血液的特异性引物,优化五重PCR的反应体系及反应条件,进行方法学验证和市售鸭血样品的检测。结果:所建立多重PCR体系特异性强,引物间无交叉干扰,重复性好,检测灵敏度为1 ng/μL,对市售的9份鸭血进行抽样检测,结果表明本地鸭血市场确实存在掺假现象。结论:多重PCR体系的建立,可以准确、快速检测鸭血制品中掺假的动物血液,为鸭血制品真伪鉴定提供了新的方法。 展开更多
关键词 鸭血 动物血 基因组 多重PCR 分子鉴定
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