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曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)的分离鉴定及基因组序列分析 被引量：1
1
作者 李富祥 喻永福 +4 位作者 杨金丽 朱沛 杨仕标 宋建领 高华峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期698-703,共6页
为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测,本研究在5%CO_(2)的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111,对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传... 为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测,本研究在5%CO_(2)的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111,对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传进化分析,结果显示3株分离株与曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)模式菌株CCUG 74657T及其它M.pernigra分离株的16S r DNA基因序列的同源性达99.6%以上,且3株分离株与M.pernigra参考株形成同一个进化分支,表明3株分离株均为M.pernigra。采用琼脂扩散法检测3株分离株对10类32种抗菌药物的敏感性,结果显示3株分离株对青霉素类的阿莫西林克拉维酸、头孢菌素类的头孢噻吩、喹诺酮类的氧氟沙星等29种抗菌药物敏感。将3株分离株感染小鼠进行致病性试验,结果显示3株分离株均能引起小鼠呼吸道疾病。采用Illumina Miseq和PacBio高通量测序平台对分离株ZY171111进行全基因组高通量测序并预测其毒力基因和耐药基因,基因组序列分析结果显示,分离株ZY171111基因组全长2 197 384 bp,G+C摩尔含量为39.1%,基因组携带1 978个蛋白编码基因,其中包括溶血素基因hlyB、黏附相关基因htpB、生存胁迫相关基因clpP和katA等32个毒力基因和磺胺类耐药基因folP、氨基糖苷类耐药基因StrA、喹诺酮类耐药基因gyr A和parC、甲氧苄啶耐药基因dfr A3等39个耐药相关基因。本研究在我国首次分离到M.pernigra,证实我国存在奶牛和山羊M.pernigra感染,并于国内外首次报道M.pernigra的耐药性、耐药基因及其对小鼠的致病性,上述结果为深入研究M.pernigra的致病性和耐药性提供菌种资源和基因组数据。 展开更多
关键词 曼氏杆菌 奶牛 山羊 分离 致病性
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化脓隐秘杆菌可视化LAMP检测方法的建立
2
作者 李富祥 朱沛 +2 位作者 赵文华 宋建领 高华峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1258-1263,共6页
为建立化脓隐秘杆菌(A.pyogenes)可视化LAMP检测方法,本研究根据A.pyogenes 16S rRNA基因的特异性保守核苷酸序列设计两对LAMP引物,通过反应体系和反应条件的优化,结果显示,本研究建立的LAMP方法的最佳反应条件为62℃反应70 min。利用... 为建立化脓隐秘杆菌(A.pyogenes)可视化LAMP检测方法,本研究根据A.pyogenes 16S rRNA基因的特异性保守核苷酸序列设计两对LAMP引物,通过反应体系和反应条件的优化,结果显示,本研究建立的LAMP方法的最佳反应条件为62℃反应70 min。利用建立的LAMP方法检测金黄色葡萄球菌、伪结核棒状杆菌、A.pyogenes等山羊和绵羊常见的16种细菌的DNA样品,结果显示仅A.pyogenes DNA样品检测为阳性,其它细菌DNA样品和阴性对照检测均为阴性,表明该方法具有较强的特异性。利用建立的LAMP方法检测不同稀释度的重组质粒标准品pMD19T-Arc,结果显示检测限为8.2拷贝/μL,表明该方法具有较高的敏感性。利用建立的LAMP方法和普通PCR方法对128份山羊和绵羊皮下脓肿样品进行检测,结果显示两种方法对A.pyogenes的阳性检出率分别为18.8%(24/128)和17.2%(22/128),总符合率为98.4%(126/128)。结果表明,本研究首次建立了检测A.pyogenes的基于钙黄绿素指示剂的可视化LAMP方法,为山羊和绵羊A.pyogenes感染的检测提供了一种可视化快速的技术手段。 展开更多
关键词 化脓隐秘杆菌 环介等温扩增 可视化现场检测
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒云南株的分离鉴定及遗传变异分析
3
作者 王金萍 付嘉佳 +3 位作者 李富祥 何于雯 宋建领 高华峰 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期27-33,共7页
2018年云南省边境地区某猪场猪群出现高热等症状,部分猪只死亡。为确认发病原因,采集死亡猪只肺脏组织样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RT-PCR检测,然后将阳性样品接种Marc-145细胞,连续传代3次后发现产生稳定的细胞病变效应(CPE... 2018年云南省边境地区某猪场猪群出现高热等症状,部分猪只死亡。为确认发病原因,采集死亡猪只肺脏组织样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RT-PCR检测,然后将阳性样品接种Marc-145细胞,连续传代3次后发现产生稳定的细胞病变效应(CPE)。经间接免疫荧光试验(IFA)、毒价测定及病毒全基因组测序,最终确定病原为PRRSV,将其命名为YNML-2018株,毒价测定为10-4.88 TCID50/0.1 mL。全基因组序列分析显示,YNML-2018毒株基因组全长15357 bp,包含8个开放阅读框(ORF),其中非结构蛋白2编码基因(NSP2)缺失90个碱基。病毒全基因组遗传进化分析显示,该毒株序列与国内分离的高致病性PRRSV同源性为95.3%~99.3%;其NSP2高变区序列与国内分离的高致病性PRRSV同源性为92.1%~97.8%;结构蛋白GP3、GP5氨基酸序列与国内分离的高致病性PRRSV毒株同源性分别为84.3%~99.6%和83.1%~99.0%。结果表明,YNML-2018株与近年来我国PRRSV流行株相比存在一定变异,但变异程度较低,仍与首次报道的高致病性毒株JXA1同属于亚群V。本研究为掌握云南省边境地区PRRSV流行毒株的遗传变异特征提供了技术支撑,并可为疫苗选用提供数据参考。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 分子遗传特征
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阿卡斑病毒培养特性和灭活疫苗免疫效果评估
4
作者 谢佳芮 寇美玲 +3 位作者 高华峰 高林 陈文瑾 苗海生 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第9期89-92,共4页
为制备一种阿卡斑病毒灭活疫苗并初步评价其免疫效果,本研究应用组织半数感染量(TCID_(50))测定的方法对阿卡斑病毒CX-01株在HmLu-1、Vero、BHK-21细胞上的扩繁规律进行判定,研究病毒在终浓度0.002 mol/L的BEI灭活剂、37℃条件下的灭活... 为制备一种阿卡斑病毒灭活疫苗并初步评价其免疫效果,本研究应用组织半数感染量(TCID_(50))测定的方法对阿卡斑病毒CX-01株在HmLu-1、Vero、BHK-21细胞上的扩繁规律进行判定,研究病毒在终浓度0.002 mol/L的BEI灭活剂、37℃条件下的灭活规律,然后应用ISA 206佐剂乳化制备疫苗,通过小鼠模型评估抗原中的添加剂蔗糖、海藻糖和左旋咪唑对免疫效果的影响。结果:HmLu-1细胞培养病毒效价最高为10^(6.75)TCID_(50)/mL,优于Vero和BHK-21细胞;终浓度为0.002 mol/L的BEI灭活剂处理5 h即可完全灭活病毒,为确保对阿卡斑病毒的灭活完全彻底,在BEI灭活剂用量和灭活条件不变的前提下,选择最优的灭活时间为8 h;添加5%蔗糖、5%海藻糖、1%左旋咪唑的疫苗组免疫效果最好,平均中和抗体滴度为18.0。本研究结果对阿卡斑病毒的培养和灭活疫苗的制备具有一定的借鉴意义。 展开更多
关键词 阿卡斑病毒 灭活疫苗 免疫效果
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抗原捕获ELISA对猪瘟的诊断效果 被引量：6
5
作者 高华峰 单于乃纯 +1 位作者 姚俊 解天珍 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第7期48-50,共3页
应用抗原捕获ELISA方法分别对现行猪瘟疫苗毒及接种疫苗后产生定型热的兔脾、不同地区可疑猪瘟组织样品进行检测。结果表明 ,ELISA方法对猪瘟强毒组织样品的检测效果良好 ,但对弱毒的检测并不敏感 。
关键词 抗原捕获ELISA 猪瘟组织样品 诊断 单克隆抗体 猪瘟病毒
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小反刍兽疫病毒H基因在杆状病毒中的表达 被引量：4
6
作者 高华峰 信爱国 +1 位作者 高林 杨仕标 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第1期43-46,共4页
从小反刍兽疫病毒全长cDNA中对血凝素蛋白H基因进行特异扩增,回收PCR产物分别连接于T载体酶切及测序分析后,将其亚克隆至真核表达转移载体pFastBacHT,经重组筛选获得杆状病毒重组质粒。重组质粒转染sf9细胞后连续传3～4代,分别收获细胞... 从小反刍兽疫病毒全长cDNA中对血凝素蛋白H基因进行特异扩增,回收PCR产物分别连接于T载体酶切及测序分析后,将其亚克隆至真核表达转移载体pFastBacHT,经重组筛选获得杆状病毒重组质粒。重组质粒转染sf9细胞后连续传3～4代,分别收获细胞上清及沉淀用于SDS-PAGE及Western blot对重组H蛋白的检测,用抗His蛋白单抗在细胞中检测到H标签蛋白,单抗在细胞及上清中检测到大小为46 ku的融合蛋白。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 H蛋白 杆状病毒
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猪瘟病毒E^(rns)基因的克隆及原核表达 被引量：3
7
作者 高华峰 李富祥 +1 位作者 张念祖 李华春 《动物医学进展》 CSCD 2007年第2期22-24,共3页
从猪瘟病毒石门株血液样品中提取总RNA,通过RT-PCR对Erns基因进行cDNA扩增,获得了696bp的片段。将该片段克隆于T-easy载体后进行序列分析,确认PCR产物为猪瘟病毒Erns基因,从阳性克隆中提取质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切,回收产物亚克隆到... 从猪瘟病毒石门株血液样品中提取总RNA,通过RT-PCR对Erns基因进行cDNA扩增,获得了696bp的片段。将该片段克隆于T-easy载体后进行序列分析,确认PCR产物为猪瘟病毒Erns基因,从阳性克隆中提取质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切,回收产物亚克隆到pET-32a表达载体中,提取质粒后转化BL21(DE3)感受态细胞,并筛选出阳性克隆,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测出Erns基因的表达。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E^rns蛋白 原核表达
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小反刍兽疫病毒原核表达体外转录系统的建立 被引量：2
8
作者 高华峰 赵文华 +1 位作者 高林 杨仕标 《动物医学进展》 北大核心 2016年第10期21-25,共5页
构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通... 构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通过全基因合成构建含PPRV病毒5′端启动子序列(AGP)、3′端启动子序列(GP)、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列HamRZ及氯霉素乙酰转移酶(CAT),获得PPRV微型复制子重组质粒pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达T7RNA多聚酶(T7RNP)感染痘病毒VTF7-3后,通过脂质体法优化4种质粒配比,并将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光分析CAT的表达情况,荧光显微镜观察到荧光的表达,并通过免疫印迹分析CAT蛋白的表达,表明构建的PPRV微型复制子具有转录和复制功能,这将有助于进一步开展以PPRV反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 微型复制子 氯霉素乙酰转移酶
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稳定表达山羊SLAM受体的Vero细胞系的建立 被引量：1
9
作者 高华峰 赵文华 +1 位作者 严欢 杨仕标 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期2047-2052,共6页
信号淋巴激活分子(signalling lymphocyte activation molecule,SLAM)又称CD150,是小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)和犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵... 信号淋巴激活分子(signalling lymphocyte activation molecule,SLAM)又称CD150,是小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)和犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥着重要作用。为了建立稳定表达山羊SLAM真核细胞系,本研究将全基因合成的gSLAM基因克隆至真核表达质粒pIRES2-GFP中,构建了重组质粒pIRES2-gSLAM。将该重组质粒转染非洲绿猴肾细胞(Vero),经G418筛选后,筛选到稳定表达gSLAM基因的细胞系Vero-gSLAM,该细胞系在传代至第10代,仍能稳定表达gSLAM基因,PPRV N75/1病毒株可以感染且能形成明显的细胞病变(CPE),相比在Vero细胞上10-4.65 TCID50/0.1mL的毒价,在Vero-gSLAM上为10-5.75 TCID50/0.1mL,其毒价有所提高。该细胞系可用于PPRV强毒分离和致弱机制等相关研究。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 受体 信号淋巴细胞激活分子 Vero-gSLAM细胞
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绿茶风选装备设计与性能试验 被引量：1
10
作者 张开兴 马国良 +3 位作者 胡芳源 高华峰 周长安 赵秀艳 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第S02期366-374,387,共10页
针对茶叶风选装备存在结构简单、风选效果差及风选试验对象单一等问题,为提高茶叶风选效果及茶叶品质,设计了一款绿茶风选装备并开展不同工序下茶叶的风选性能试验。首先,根据风选装备的工作原理,设计了绿茶风选装备,并确定了风选室、... 针对茶叶风选装备存在结构简单、风选效果差及风选试验对象单一等问题,为提高茶叶风选效果及茶叶品质,设计了一款绿茶风选装备并开展不同工序下茶叶的风选性能试验。首先,根据风选装备的工作原理,设计了绿茶风选装备,并确定了风选室、风机、传动装置以及物料传递装置的相关设计参数;然后,基于流体力学仿真方法研究风选室内部流场的流线、速度及压力情况,基于离散元仿真方法模拟不同时刻茶叶颗粒群的风选状态,探究不同风速对茶叶风选效果的影响,得出风机风速为6~6.5 m/s时流线稳定,且风选效果较好;最后,对风选装备进行了性能测试、风选效果等试验,探究了不同运行频率对风选效果、不同风选顺序对成品茶品质的影响。试验结果表明,绿茶风选装备4种风机变频器频率下风速变异系数均小于8%,风机变频器最佳运行频率为35 Hz;单位有效宽度生产率大于7 kg/(cm·h),千瓦小时产量大于420 kg/(kW·h),绿茶风选装备性能测试的各项指标符合国家规程要求;茶鲜叶及杀青叶由B级提升为A-和A级,茶叶复选率均高于90%,风选效果显著,茶叶品质得到提升;各试验组中,主出茶口整体优于其余出茶口,杀青分级中主出茶口茶叶品质最佳,茶叶感官评审得分最高。 展开更多
关键词 绿茶 风选装备 仿真 风选性能试验
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一例犬瘟热的RT-PCR诊断 被引量：4
11
作者 高华峰 信爱国 赵文华 《云南畜牧兽医》 2003年第4期3-4,共2页
采用特异性引物 ,对一例犬瘟热疑似病例的肺脏及肝脏样品进行RT -PCR扩增 (反转录多聚酶链式反应试验 ) ,结果得到两份与预期相符合的阳性产物 ,而在对牛瘟疫苗进行扩增时则未得到阳性结果 。
关键词 犬瘟热病毒 诊断 RT-PCR 疫苗
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猪瘟的诊断与新出现的诊断技术 被引量：4
12
作者 高华峰 宋建领 《动物科学与动物医学》 2003年第8期56-57,共2页
猪瘟是目前危害养猪业发展的一种主要传染病,被国际兽疫局列为“A”类传染病。本文主要介绍目前国际上对该病的诊断方法以及今后可能用于该病的各种诊断技术。
关键词 猪瘟 诊断技术 免疫荧光试验 细胞分离培养 血清学试验
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断奶仔猪多系统衰竭综合征
13
作者 高华峰 浦仕飞 《云南畜牧兽医》 2005年第2期6-7,共2页
断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)是一个新出现的疾病,该病主要由圆环病毒科的猪PCV2病毒引起,发病日龄为25～120d,其中60～80日龄发病率最高。PMWS的最终确诊需满足以下三个条件:(1)存在PMWS相关临床症状;(2)出现特征性的显微病理损伤;... 断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)是一个新出现的疾病,该病主要由圆环病毒科的猪PCV2病毒引起,发病日龄为25～120d,其中60～80日龄发病率最高。PMWS的最终确诊需满足以下三个条件:(1)存在PMWS相关临床症状;(2)出现特征性的显微病理损伤;(3)在满足以上两个条件时有圆环病毒2型(PCV2)存在。这三个标准对PMWS的诊断缺一不可,如仅仅检测到PCV2只表明存在PCV2感染而不能确定为PMWS。 展开更多
关键词 猪 PMWS 圆环病毒 诊断
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副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析 被引量：11
14
作者 李富祥 李华春 +5 位作者 宋建领 杨仕标 朱建波 廖德芳 姚俊 高华峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期68-72,共5页
从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟... 从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%～99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 16S RRNA 序列分析
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猪瘟病毒云南毒株E2基因片段序列测定及分析 被引量：9
15
作者 尹革芬 朱建波 +3 位作者 姚俊 高华峰 信爱国 张念祖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期167-169,共3页
用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与... 用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与中国标准强毒石门株差异较大 ,其核苷酸及氨基酸同源性均小于 80 %。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析
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小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：13
16
作者 赵文华 杨仕标 +1 位作者 高华峰 王金萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期65-71,共7页
为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测... 为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测。试验结果显示,所建立的N-ITR二联探针实时荧光定量RT-PCR方法可同步检测PPRV和GTPV,产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒(FPV)、犬瘟热病毒(CDV)等相关病毒无荧光信号检出。以PPRV-N和GTPVITR的pMD18-T载体质粒为标准品,构建了二联标准曲线,N-ITR探针对PPRV和GTPV的检测敏感度可分别达102和103拷贝/μL。本研究初步建立了可同步快速特异性检测PPRV和GTPV的二联实时荧光定量RT-PCR方法。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 山羊痘病毒 二联实时荧光定量RT—PCR 探针
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鸭瘟病毒的PCR鉴定及相关序列分析 被引量：4
17
作者 赵文华 高华峰 +3 位作者 宋建领 朱建波 李志华 张念祖 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期34-36,共3页
设计、合成了 2对鸭瘟病毒引物 ,对云南省发现的 1例鸭瘟可疑病例 (YN DPV0 1)进行PCR鉴定 ,并对其扩增产物进行测序。结果显示 ,引物对被检测病料的扩增正确 ;所扩增的片段经序列测定与参考毒株 p4 81的同源性为 99.5 %。
关键词 鸭瘟 鸭瘟病毒 PCR 鉴定 序列分析 同源性
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犬瘟热病毒F基因克隆及序列分析 被引量：1
18
作者 高华峰 朱建波 +2 位作者 赵文华 姚俊 张念祖 《动物医学进展》 CSCD 2007年第7期40-43,共4页
从犬瘟热病毒检测阳性的3份（KM1、KM2、KM3）病料中进行F基因的克隆测序,并与其他5株代表性参考毒株的同一基因序列进行比较（国内外流行毒株以及疫苗毒株）。结果表明,KM1与KM2有95.7%的核苷酸同源性,其氨基酸序列完全相同;KM3株与KM1... 从犬瘟热病毒检测阳性的3份（KM1、KM2、KM3）病料中进行F基因的克隆测序,并与其他5株代表性参考毒株的同一基因序列进行比较（国内外流行毒株以及疫苗毒株）。结果表明,KM1与KM2有95.7%的核苷酸同源性,其氨基酸序列完全相同;KM3株与KM1有1个氨基酸的差异,与参考的5株犬瘟热病毒的F基因核苷酸和氨基酸分析同源性分别为91.1%~96.5%和96.8%~100%。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 F基因 融合基因 序列分析
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低碳化景区游客满意度提升策略研究 被引量：2
19
作者 高华峰 任佩瑜 《统计与决策》 CSSCI 北大核心 2012年第23期60-63,共4页
低碳景区建设是解决旅游发展和生态破坏矛盾、实现景区可持续发展的重要途径。而游客满意度是景区建设的核心之一,如何在低碳景区建设的同时提高游客满意度?文章以九寨沟景区为研究对象,借助于问卷调查,运用层次分析法,针对"适应性... 低碳景区建设是解决旅游发展和生态破坏矛盾、实现景区可持续发展的重要途径。而游客满意度是景区建设的核心之一,如何在低碳景区建设的同时提高游客满意度?文章以九寨沟景区为研究对象,借助于问卷调查,运用层次分析法,针对"适应性"、"社会比较"和"满意度累积效应"结合影响游客满意度的一般因素进行逐层分析,提出以"景区低碳化建设为主、游客低碳知识教育为辅,加强引导,逐步适应"的低碳化景区游客满意度提升策略。 展开更多
关键词 低碳化景区 游客满意度 层次分析法 旅游 策略
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山羊痘和小反刍兽疫病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：5
20
作者 赵文华 杨仕标 高华峰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期9-14,共6页
为实现对山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的同步快速检测,基于GTPV的ITR基因及PPRV的M基因,分别设计合成两套特异性引物及探针;探针分别用5′-FAM-TAMRA-3′及5′-JOE-Eclipse-3′标记物进行标记以实现同步检测。结果显示,所建... 为实现对山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的同步快速检测,基于GTPV的ITR基因及PPRV的M基因,分别设计合成两套特异性引物及探针;探针分别用5′-FAM-TAMRA-3′及5′-JOE-Eclipse-3′标记物进行标记以实现同步检测。结果显示,所建立的ITR-M二联探针荧光定量RT-PCR方法可同时特异性检测GTPV和PPRV产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒、犬瘟热病毒等相关病毒无荧光信号可检出。以GTPV-ITR和PPRV-M的pMD-18T载体质粒为标准品,构建了双重标准曲线,ITR-M探针的检测敏感度可分别达103拷贝/μL及101.2拷贝/μL cDNA。本研究初步建立了可同步快速检测GTPV和PPRV的二联实时荧光定量RT-PCR法。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 小反刍兽疫病毒 实时荧光定量RT-PCR 探针
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