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TMV、PVM和CMV干扰载体构建及对人参果遗传转化 被引量：7
1
作者 高宜峰 张菲菲 +3 位作者 张金文 陆艳梅 魏桂民 马廷蕊 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期44-51,共8页
人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物,连年种植易造成多种病毒病积累。为了寻求一种能同时抵御多种病毒病的方法,本试验以危害人参果的3种主要病毒为研究对象,根据GenBank中烟草花叶病毒(TMV)P126基因、马铃薯M病毒(PVM)CP基因... 人参果是以营养器官繁殖为主的多年生草本植物,连年种植易造成多种病毒病积累。为了寻求一种能同时抵御多种病毒病的方法,本试验以危害人参果的3种主要病毒为研究对象,根据GenBank中烟草花叶病毒(TMV)P126基因、马铃薯M病毒(PVM)CP基因和黄瓜花叶病毒(CMV)2b蛋白基因序列,利用E-RNAi网站提供的分析软件,筛选出含有较多有效小干扰RNA[siRNA,19 nt]的长dsRNA(Long dsRNA)片段作为RNAi的靶序列。用重叠延伸PCR方法将三个靶标片段融合在一起,构建了一种具有内含子(intro)的反向重复结构和嵌合基因的植物RNAi表达载体pCEIHFR。将pCEIHFR通过冻融法导入农杆菌LBA4404并转化人参果,经过草甘膦筛选和PCR检测,确认其中的24株为转基因阳性植株。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 马铃薯M病毒 黄瓜花叶病毒 ihpRNA 转基因人参果
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马铃薯Sgt1基因启动子的结构及功能分析 被引量：10
2
作者 魏桂民 张金文 +3 位作者 王蒂 张俊莲 陆艳梅 高宜峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期969-977,共9页
糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloids,SGAs)是一类存在于茄科和某些百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶半乳糖基转移酶(solanidine galactosyltransferases,SGT1)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一... 糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloids,SGAs)是一类存在于茄科和某些百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶半乳糖基转移酶(solanidine galactosyltransferases,SGT1)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.研究采用染色体步移技术(Genome walking),首次克隆到马铃薯Sgt1基因起始密码子上游2 183 bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC759163).构建该启动子驱动融合报告基因gfp::gus的植物双元表达载体p1304Sgt1p,转化野生型烟草获得Sgt1p::gfp::gus转基因植株,通过GUS组织化学染色分析Sgt1p::gfp::gus转基因植株中Sgt1p启动子的活性.结果表明,gus基因在转基因烟草的根、茎和叶中均表达,在叶中Sgt1p启动子的活性低于CaMV35S启动子,而在根和茎中二者基本相同;光诱导结果显示,光照处理明显增强了Sgt1p::gfp::gus转基因烟草叶片中Sgt1p启动子的活性,表明庄薯3号马铃薯Sgt1p启动子是一种光诱导型启动子. 展开更多
关键词 马铃薯 茄啶半乳糖基转移酶 启动子 报告基因 结构与功能
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马铃薯sgt2基因启动子的克隆及其活性分析 被引量：4
3
作者 魏桂民 张金文 +3 位作者 王蒂 张俊莲 陆艳梅 高宜峰 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期41-47,53,共8页
糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科和百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶葡糖基转移酶(SGT2)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用... 糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科和百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶葡糖基转移酶(SGT2)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.本研究采用染色体步移技术,克隆到马铃薯茄啶葡糖基转移酶基因(sgt2)起始密码子上游2 098bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC331038).构建该启动子驱动报告基因gfp∶∶gus的植物双元表达载体p1304sgt2p,采用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达,通过GUS组织化学染色分析sgt2p启动子的活性.结果表明:gus基因在转化烟草叶片中高效表达,克隆的启动子具有活性. 展开更多
关键词 马铃薯 糖苷生物碱 茄啶葡糖基转移酶 启动子克隆 瞬时表达
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人参果PVM病毒的克隆与鉴定 被引量：1
4
作者 张菲菲 张金文 +1 位作者 高宜峰 姚攀锋 《甘肃农业科技》 2013年第8期18-20,共3页
通过对武威市凉州区人参果感病植株所表现出来的花叶、皱缩、植株矮小等症状观察,初步判断可能感染了马铃薯M病毒(PVM)。结合分子生物学手段,提取感病人参果叶片总RNA,采用RT-PCR方法扩增到一段长300 bp的基因序列,连接至PMD19-T载体并... 通过对武威市凉州区人参果感病植株所表现出来的花叶、皱缩、植株矮小等症状观察,初步判断可能感染了马铃薯M病毒(PVM)。结合分子生物学手段,提取感病人参果叶片总RNA,采用RT-PCR方法扩增到一段长300 bp的基因序列,连接至PMD19-T载体并测序。测序结果同GeneBank中PVM CP基因序列[GI:361071296]同源性达到了98.97%,说明成功克隆到了PVM基因片段,即供试人参果确实感染了PVM病毒。 展开更多
关键词 人参果 PVM病毒 克隆 鉴定
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畜禽养殖“三宝”
5
作者 高宜峰 《农业知识（科学养殖）》 2013年第5期48-48,共1页
在养殖业中，人们常把大蒜、陈皮和辣椒称之为养殖业“三宝”，广泛应用于畜禽饲养上。
关键词 畜禽养殖 畜禽饲养 养殖业 大蒜 辣椒
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玉米大斑病发生规律及防治措施 被引量：2
6
作者 刘付岭 周霞丽 +2 位作者 高宜峰 张春生 周琳娜 《农业科技通讯》 2014年第5期213-214,共2页
玉米大斑病是我国主要玉米产区的常见病害,是世界玉米生产的重要病害。对玉米大斑病的病原菌、侵染机制、发病症状及发病条件进行了论述,指出利用抗病品种、改善耕作栽培环境、化学防治等措施,可以控制玉米大斑病的发生与危害。
关键词 玉米大斑病 发生规律 防治措施
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罂粟COR和BBE基因RNAi载体构建及烟草转化 被引量：4
7
作者 陆艳梅 张金文 +3 位作者 魏玉洁 魏贵民 张艳红 高宜峰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1169-1177,共9页
本研究通过RNAi技术,使用发卡RNA结构沉默罂粟可待因酮还原酶(COR)与小檗碱桥酶(BBE)基因的表达。采用RT-PCR技术克隆得到COR和BBE基因全序列,同源性比较结果显示,它们与GenBank中已报道的COR和BBE基因高度同源;按照RNAi设计原则,筛选出... 本研究通过RNAi技术,使用发卡RNA结构沉默罂粟可待因酮还原酶(COR)与小檗碱桥酶(BBE)基因的表达。采用RT-PCR技术克隆得到COR和BBE基因全序列,同源性比较结果显示,它们与GenBank中已报道的COR和BBE基因高度同源;按照RNAi设计原则,筛选出了COR和BBE基因靶标序列,并采用重叠PCR法将其拼接成643 bp的融合基因,以中间载体pHANNIBAL和植物表达载体pCEPSPS为基础,构建ihpRNA植物表达载体,用农杆菌介导法将目的基因转入烟草中,共获得转基因植株78株,通过PCR检测从中筛选出了17株阳性植株,可初步确定目的基因已经整合到烟草基因组中。 展开更多
关键词 罂粟 COR和BBE基因 RNAI 转化
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