强直性脊柱炎患者外周血TCR Vα CDR3谱系基因扫描分析研究 被引量：1

1

作者 魏克娜 余伍忠 +2 位作者 徐新玉 张璐 邹红云 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1009-1013,共5页

目的:探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血T细胞受体α链可变区互补决定区3(TCR Vα CDR3)谱系多态性,为AS的免疫发病机制的研究提供实验基础。方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增34个TCR Vα亚家族,经免疫扫描谱型技术分析AS患者外... 目的:探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血T细胞受体α链可变区互补决定区3(TCR Vα CDR3)谱系多态性,为AS的免疫发病机制的研究提供实验基础。方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增34个TCR Vα亚家族,经免疫扫描谱型技术分析AS患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TCR Vα CDR3的谱系漂移情况。结果:5例正常健康对照PB-MC TCR Vα CDR3谱型多数呈高斯分布。所有AS患者外周血T细胞均出现多个TCR Vα亚家族谱型的异常改变,异常峰型包括:单峰、寡峰/寡峰趋势、偏峰和不规则异常峰型。34个TCR Vα亚家族中,共有17个亚家族在少数患者中的扫描谱型呈单峰即单克隆增生。结论:AS患者PBMC TCR Vα CDR3谱系具有显著多态性,表明T细胞在AS免疫发病机理中扮演重要角色。单/寡克隆增生的T细胞有可能是AS发病中的自身反应性T细胞,将为AS的发病机制的进一步研究提供基础依据。 展开更多

关键词 强直性脊柱炎 T细胞受体 Vα亚家族 互补决定区3 免疫扫描谱型分析

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葡萄膜炎患者外周血T细胞TCR BV亚家族克隆性的初步研究 被引量：1

2

作者 魏克娜 黄红艳 +3 位作者 张璐 邹红云 余伍忠 焦敏 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第1期51-55,共5页

为探讨葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)TCR BV CDR3谱系特点及多态性,为其免疫发病机制研究提供实验基础。采用RT-PCR扩增TCR BV 26个亚家族CDR3的方法,经免疫扫描谱型技术分析对葡萄膜炎患者P... 为探讨葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)TCR BV CDR3谱系特点及多态性,为其免疫发病机制研究提供实验基础。采用RT-PCR扩增TCR BV 26个亚家族CDR3的方法,经免疫扫描谱型技术分析对葡萄膜炎患者PBMC中TCR BV CDR3的谱系漂移情况进行研究。结果显示:(1)5例正常健康人PBMC TCR BV CDR3谱型绝大多数呈正态(或高斯)分布,4例葡萄膜炎患者TCR BV CDR3扫描谱型均出现非正态分布的异常峰型,包括寡峰/寡峰趋势,偏峰和不规则异常峰型;(2)在26个TCR BV亚家族中,不同亚家族异常峰型出现的频率不同,非正态异常峰型出现频率较高的亚家族有BV2和BV17(均为3/4),而BV5.2、BV6、BV15和BV18亚家族均未出现异常峰型;(3)TCR BV2和BV17两个亚家族在HLA-B27阴性的3个患者均出现非正态异常峰型,而在HLA-B27阳性(合并强直性脊柱炎)的患者并未出现异常。葡萄膜炎患者PBMC TCRBV部分亚家族的异常表达可能与该病的免疫发病机理有关,为葡萄膜炎发病机制的进一步研究提供依据。 展开更多

关键词 葡萄膜炎 T细胞受体 BV亚家族 互补决定区3 免疫扫描谱型分析 克隆性

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内皮型一氧化氮合酶基因标签单核苷酸多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的关联研究 被引量：3

3

作者 张强 邓峰美 +7 位作者 何芳 王树人 卢贤贵 王刚 邹放君 钟华 魏克娜 唐斌 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2012年第2期91-94,共4页

目的:探讨新疆哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因标签单核苷酸多态性与原发性高血压之间的关系。方法:采用流行病学病例—对照研究,酚—氯仿法进行DNA抽取及纯化,用SNaPshot分型技术对新疆哈萨克族363例原发性高血压患者(病例组... 目的:探讨新疆哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因标签单核苷酸多态性与原发性高血压之间的关系。方法:采用流行病学病例—对照研究,酚—氯仿法进行DNA抽取及纯化,用SNaPshot分型技术对新疆哈萨克族363例原发性高血压患者(病例组)和370例健康对照者(对照组)进行eNOS基因的6个标签单核苷酸的多态性(tSNP)rs1800783、rs7830、rs3918188、rs1799983、rs2070744和rs1800779分型,并测定十项生化指标,测量体重指数、腰臀比等指标。结果:新疆哈萨克族人群eNOS基因6个tSNP在病例组各基因型频率和等位基因频率与对照组分布差异无统计学意义(P>0.05)。性别分层发现eNOS基因rs1799983男性病例组与对照组G和T等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05),男性病例组G等位基因频率(80.8%)低于对照组(87.9%),而T等位基因频率(19.2%)高于对照组(12.1%),T等位基因患病风险为G等位基因的0.587倍(95%CI 0.370～0.901,P=0.015)。发现除rs1800783、rs1800779、rs2070744位点间存在强的配对连锁不平衡外,其它tSNP各位间不存在配对强连锁不平衡,所构建的单体型在病例组和对照组的分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:eNOS基因rs1799983 T等位基因可能是新疆哈萨克族男性原发性高血压的遗传易感基因;rs1800783与rs1800779、rs2070744位点间存在强连锁不平衡;6个tSNP构建的单体型与原发性高血压无相关性。 展开更多

关键词 高血压 一氧化氮合酶 单核苷酸多态性 哈萨克族

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qRT-PCR检测结核分枝杆菌蛋白抗原编码基因表达水平 被引量：2

4

作者 陈伟 王远志 +5 位作者 李永祥 米利古 张辉 张娟 魏克娜 袁俐 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第12期2004-2007,共4页

目的运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价... 目的运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值。方法根据Genbank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法。选用46株结核分枝杆菌临床分离株,以及2株非结核分枝杆菌。应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv国际标准株fbpB、psts1、mpt64基因的表达水平。结果结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号;耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,P<0.01;t=2.545,P<0.05),北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。结论有统计学意义(t=2.567,P<0.05;t=2.373,P<0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR检测方法,该方法可以快速判断活菌与死菌。检测发现耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株;北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85B 38kDa MPT64 实时定量PCR

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实时定量PCR检测耐异烟肼结核分枝杆菌Ag85B、38kDa及MPT64 mRNA表达水平

5

作者 陈伟 李永祥 +5 位作者 王远志 米利古 张辉 张娟 魏克娜 袁俐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期991-994,共4页

目的运用实时定量PCR(Real-time PCR)检测结核分枝杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB、psts1、mpt64)的mRNA表达水平,探讨结核分枝杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供... 目的运用实时定量PCR(Real-time PCR)检测结核分枝杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB、psts1、mpt64)的mRNA表达水平,探讨结核分枝杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1、mpt64及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64的实时定量PCR方法,并应用此方法检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1、mpt64的mRNA表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株的表达水平为0.36±0.13,两者有显著性差异(t=5.683,P<0.01)。耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株的表达水平为9.86±2.79,两者差异有统计学意义(t=3.869,P<0.01)。耐异烟肼菌株的mpt64表达水平为5.89±3.22,敏感菌株的表达水平为7.67±4.52,差异无统计学意义(t=1.552,P>0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的实时定量检测方法,检测显示耐异烟肼菌株的fbpB、psts1基因的mRNA表达水平显著高于敏感菌株,可能为耐异烟肼MTB的实验室诊断提供分子标识。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 AG85B 38kDa MPT64 实时定量PCR

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葡萄膜炎患者外周血TCR Vα谱系多态性分析

6

作者 邹红云 余伍忠 +6 位作者 黄红艳 郭琨 张璐 魏克娜 焦敏 卢静 张琼 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期182-185,共4页

目的探讨葡萄膜炎患者外周血T细胞受体α链可变区互补决定区3(TCR VαCDR3)谱系特点及多态性。方法采用RT-PCR扩增葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中TCR Vα34个亚家族,经免疫扫描谱型技术分析34个亚家族谱型。结果 5例正常健康人PB... 目的探讨葡萄膜炎患者外周血T细胞受体α链可变区互补决定区3(TCR VαCDR3)谱系特点及多态性。方法采用RT-PCR扩增葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中TCR Vα34个亚家族,经免疫扫描谱型技术分析34个亚家族谱型。结果 5例正常健康人PBMC TCR VαCDR3谱型多数呈高斯分布,4例葡萄膜炎患者外周血T细胞均出现多个TCR Vα亚家族谱型的异常改变,异常峰型包括单峰、寡峰/寡峰趋势,偏峰和不规则异常峰型。34个TCR Vα亚家族中,不同亚家族异常峰型出现的频率不同,非正态异常峰型出现频率较高的亚家族有Vα13和Vα17(均为3/4),而Vα1.1、Vα10、Vα20、Vα28和Vα28亚家族均未出现异常峰型。TCR Vα7在HLA-B27阴性的患者(U2)中出现异常峰型,在HLA-B27阳性的3个患者(U1、U3、U4)中并未出现这个亚家族的异常;TCR Vα13则相反,即在HLA-B27阳性的3个患者中均出现异常峰型,而在HLA-B27阴性的患者中正常。结论葡萄膜炎患者PBMC TCR VαCDR3谱系具有显著多态性特点,单/寡克隆增生的T细胞有可能是葡萄膜炎发病中的自身反应性T细胞。 展开更多

关键词 葡萄膜炎 T细胞受体 Vα亚家族 互补决定区3 免疫扫描谱型分析

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强直性脊柱炎患者外周血T细胞受体β链可变区基因谱系多态性的初步研究 被引量：2

7

作者 魏克娜 张璐 +2 位作者 焦敏 余伍忠 邹红云 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期329-332,F0003,共5页

目的探讨强直性脊柱炎（AS）患者外周血T细胞受体B链可变区互补决定区3（TCRBVCDR3）谱系多态性，为AS免疫发病机制研究提供实验依据。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增AS患者外周血单个核细胞（PBMC）中T细胞TCRBV的26个亚... 目的探讨强直性脊柱炎（AS）患者外周血T细胞受体B链可变区互补决定区3（TCRBVCDR3）谱系多态性，为AS免疫发病机制研究提供实验依据。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增AS患者外周血单个核细胞（PBMC）中T细胞TCRBV的26个亚家族CDR3，经免疫扫描谱型技术分析TCRBVCDR3的谱系多态性情况。结果20例活动期AS患者TCRBVCDR3扫描谱型均出现非正态的异常峰型，包括单峰、寡峰／寡峰趋势、偏峰和不规则异常峰型。其中有18例患者部分亚家族出现寡克隆／寡克隆趋势增生，有1例患者BV16和BV18的2个亚家族出现单克隆增生。5名健康对照PBMCTCRBVCDR3谱型绝大多数呈高斯分布。结论AS患者外周血TCRBVCDR3谱系具有显著多态性和谱系漂移特点，进一步表明T细胞在AS免疫发病机制中扮演重要角色。单，寡克隆增生的T细胞有可能是AS发病中的自身反应性T细胞。 展开更多

关键词 脊柱炎 强直性 受体 抗原 T细胞 互补决定区 BV亚家族

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T细胞在强直性脊柱炎发病机制中的作用 被引量：1

8

作者 魏克娜 邹红云 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期644-647,共4页

遗传因素尤其人类白细胞抗原（HLA）-B27致病机制的研究一直是强直性脊柱炎（ankylosingspondylitis，As）研究的热点。自1973年发现HLA—B27和AS有关联性以来，许多证据均表明HLA—B27参与了AS的发病。AS患者HLA—B27阳性率高达90％以... 遗传因素尤其人类白细胞抗原（HLA）-B27致病机制的研究一直是强直性脊柱炎（ankylosingspondylitis，As）研究的热点。自1973年发现HLA—B27和AS有关联性以来，许多证据均表明HLA—B27参与了AS的发病。AS患者HLA—B27阳性率高达90％以上。双胞胎研究显示，在AS的整体遗传风险中，HLA—B27占10％-30％，而主要组织相容性复合体（MHC）则占40％～50％。HIA—B27阳性的同卵双胞胎患病一致率是63％，而异卵双胞胎患病一致率则是23％。全基因组扫描和连锁分析发现，除HLA—B27以外，还有其他MHC基因及非MHC基因也可能与AS的发病相关。 展开更多

关键词 强直性脊柱炎 发病机制 主要组织相容性复合体 T细胞 人类白细胞抗原 同卵双胞胎 MHC基因 全基因组扫描

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肿瘤早期诊断标志物自身抗体

9

作者 魏克娜 邹红云 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2011年第5期342-345,共4页

常用的肿瘤检测标志物敏感性较低，特异性较差，所以挖掘新的理想血清标志物成为研究的热点。肿瘤患者血清中存在大量的肿瘤自身抗体，对肿瘤相关自身抗体的筛选和检测以及肿瘤的早期诊断具有很高的价值。

关键词 肿瘤 肿瘤标记 生物学 自身抗体

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实时荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法的建立与初步应用

10

作者 陈伟 王远志 +5 位作者 李永祥 米利古 张辉 张娟 魏克娜 袁俐 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期340-340,共1页

结核分枝杆菌不产外毒素和侵袭性酶，而结核分枝杆菌分泌的蛋白及菌体蛋白在宿主抗结核分枝杆菌的细胞免疫和体液免疫应答中发挥着重要作用。结核分枝杆菌mRNA的半衰期很短（3～5min），是结核分枝杆菌活菌诊断及检测药物敏感性很好的... 结核分枝杆菌不产外毒素和侵袭性酶，而结核分枝杆菌分泌的蛋白及菌体蛋白在宿主抗结核分枝杆菌的细胞免疫和体液免疫应答中发挥着重要作用。结核分枝杆菌mRNA的半衰期很短（3～5min），是结核分枝杆菌活菌诊断及检测药物敏感性很好的分子标志。 展开更多

关键词 抗结核分枝杆菌 实时荧光定量PCR 技术检测 应用 体液免疫应答 药物敏感性 侵袭性酶 细胞免疫

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实时定量qPCR检测耐异烟肼结核分枝杆菌Ag85B和38ku蛋白mRNA表达水平

11

作者 陈伟 李永祥 +5 位作者 王远志 张辉 米利古 张娟 魏克娜 袁俐 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第4期253-256,259,共5页

目的运用实时定量qPCR(quantitative real-ti me PCR)检测结核分支杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B和38 ku蛋白编码基因(fbpB、psts1)的表达水平,分析结核分支杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供... 目的运用实时定量qPCR(quantitative real-ti me PCR)检测结核分支杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B和38 ku蛋白编码基因(fbpB、psts1)的表达水平,分析结核分支杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-Tsi mple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用实时定量PCR检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1的表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株fbpB表达水平为0.36±0.13,差异有统计学意义(t=5.683,P<0.01);耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株psts1表达水平为9.86±2.79,差异有统计学意义(t=3.869,P<0.01)。结论应用实时定量PCR检测耐异烟肼菌株的fbpB、psts1的表达水平显著高于敏感菌株,为耐药结核的实验室诊断提供分子标识。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 Ag85B蛋白基因 38 KU蛋白 实时定量qPCR

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内皮型一氧化氮合酶基因标签单核苷酸多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的关联研究 被引量：1

12

作者 张强 邓峰美 +7 位作者 何芳 王树人 卢贤贵 王刚 邹放君 钟华 魏克娜 唐斌 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1100-1100,共1页

该文探讨新疆哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS） 基因标签单核苷酸多态性与原发性高血压之间的关系。方法：采用流行病学病例～对照研究，酚一氯仿法进行DNA抽取及纯化，用SNaPshot分型技术... 该文探讨新疆哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS） 基因标签单核苷酸多态性与原发性高血压之间的关系。方法：采用流行病学病例～对照研究，酚一氯仿法进行DNA抽取及纯化，用SNaPshot分型技术对新疆哈萨克族原发性高血压患者（病例组）363例和健康对照者（对照组）370人进行eNOS基因的6个标签单核苷酸的多态性（tags single nucleotide polymorphism, tSNP）rs1800783 rs7830 rs3918188, rs1799983 rs2070744 和rsl800779分型，并测定10项生化指标，测量体质量指数、腰臀比等指标。 展开更多

关键词 内皮型一氧化氮合酶基因 原发性高血压患者 单核苷酸多态性 新疆哈萨克族 标签 NITRIC ENOS基因 分型技术

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