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微RNA-335对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制
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作者 路德荣 顾世玉 +2 位作者 魏晨初 郗晓慧 郁帅 《新乡医学院学报》 CAS 2022年第12期1113-1118,共6页
目的探讨微RNA(miR)-335对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法选择2020年1月至2021年7月新乡医学院第三附属医院收治的61例胃癌患者为研究对象,收集患者手术切除的胃癌组织、癌旁组织(距癌灶1~2 cm)及切缘正常组... 目的探讨微RNA(miR)-335对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法选择2020年1月至2021年7月新乡医学院第三附属医院收治的61例胃癌患者为研究对象,收集患者手术切除的胃癌组织、癌旁组织(距癌灶1~2 cm)及切缘正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测人胃癌组织、癌旁组织和正常组织中miR-335的表达。另外,将对数生长期的胃癌细胞系SGC-7901细胞分为miR-335转染组、空白载体组和对照组,miR-335转染组SGC-7901细胞转染miR-335 precursor,空白载体组SGC-7901细胞转染miR-335-NC,对照组细胞不做任何传染。采用四甲基偶氮唑盐法检测3组SGC-7901细胞增殖能力,划痕实验检测3组SGC-7901细胞迁移能力,Transwell小室法检测3组SGC-7901细胞侵袭能力。采用荧光素酶报告基因技术检测miR-335的作用靶点,Western blot法检测3组SCG-7901细胞中p53蛋白的表达。结果miR-335转染组、空白载体组和对照组胃癌组织中miR-335相对表达量显著低于正常组织和胃癌癌旁组织(t=15.238、8.796,P<0.05),癌旁组织与正常组织中miR-335相对表达量比较差异无统计学意义(t=0.293,P>0.05)。miR-335转染组SGC-7901细胞的增殖能力显著低于空白载体组和对照组(t=8.192、9.209,P<0.05),空白载体组与对照组SGC-7901细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(t=0.910,P>0.05)。miR-335转染组SGC-7901细胞迁移距离显著短于空白载体组和对照组(t=12.833、12.987,P<0.05),空白载体组与对照组SGC-7901细胞迁移距离比较差异无统计学意义(t=0.623,P>0.05)。miR-335转染组SGC-7901细胞侵袭数目显著少于空白载体组和对照组(t=12.750、14.553,P<0.05),空白载体组与对照组SGC-7901细胞侵袭数目比较差异无统计学意义(t=0.556,P>0.05)。含有p53-3′非翻译区预测基因质粒的miR-335转染组细胞的荧光素酶活性显著低于空白载体组和对照组(t=6.609、7.671,P<0.05),空白载体组与对照组细胞的荧光素酶活性比较差异无统计学意义(t=0.432,P>0.05)。miR-335转染组SGC-7901细胞中p53蛋白相对表达量显著低于空白载体组和对照组(t=7.652、9.227,P<0.05),空白载体组与对照组SGC-7901细胞中p53蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(t=1.004,P>0.05)。结论胃癌组织中miR-335呈低表达,miR-335可通过靶向p53抑制胃癌细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 胃癌 微RNA-335 迁移 侵袭 P53
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环指蛋白128通过稳定轴抑制蛋白1抑制胃癌发生发展的机制 被引量：3
2
作者 路德荣 魏晨初 +3 位作者 李振想 顾世玉 秦文举 郗晓慧 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期2383-2385,共3页
目的:探讨环指蛋白128(RNF128)通过轴抑制蛋白1(Axin1)抑制胃癌发生发展的具体作用机制。方法:查询Kmplot数据库并分析RNF128表达高低与胃癌患者总生存期、首次进展生存期、无进展生存期的关系;选取胃癌SGC7901细胞系,利用小干扰RNA敲低... 目的:探讨环指蛋白128(RNF128)通过轴抑制蛋白1(Axin1)抑制胃癌发生发展的具体作用机制。方法:查询Kmplot数据库并分析RNF128表达高低与胃癌患者总生存期、首次进展生存期、无进展生存期的关系;选取胃癌SGC7901细胞系,利用小干扰RNA敲低RNF128蛋白表达水平,分为3组:对照组(Control),siRNF128#1组和siRNF128#2组,通过平板克隆实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Transwell实验检测RNF128对胃癌细胞的增殖、迁移能力的作用。蛋白质印迹法(Western blot)和q-PCR检测RNF128对Wnt通路Axin1蛋白及其下游靶基因表达的作用。免疫共沉淀检测RNF128和Axin1是否存在相互作用。泛素化实验检测RNF128对Axin1蛋白泛素化水平高低的影响。两实验组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果:RNF128低表达的胃癌患者OS总生存期、首次进展生存期、无进展生存期低于RNF128高表达患者(P<0.01)。siRNF128#1组和siRNF128#2组胃癌细胞的增殖能力高于对照组(siRNF128#1:6.758±0.321比1.000±0.079,t=16.071,P<0.05;siRNF128#2:7.298±0.398比1.000±0.060,t=14.327,P<0.05),siRNF128#1组和siRNF128#2组胃癌细胞的迁移能力高于对照组(siRNF128#1:164.194±19.480比70.251±3.073,t=10.652,P<0.05;siRNF128#2:178.672±11.323比69.755±5.616,t=19.269,P<0.05)。Western blot结果显示,siRNF128#1组和siRNF128#2组胃癌细胞的Axin1表达水平低于对照组(siRNF128#1:0.526±0.058比1.000±0.110,t=8.519,P<0.05;siRNF128#2:0.464±0.087比1.000±0.117,t=8.196,P<0.05)。Co-IP实验证实RNF128与Axin1蛋白存在相互作用,RNF128可抑制Axin1蛋白的泛素化水平。结论:RNF128通过泛素化稳定Axin1蛋白抑制胃癌的发生发展。 展开更多
关键词 胃癌 环指蛋白128 轴抑制蛋白1 WNT信号通路 泛素化
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