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SARS冠状病毒S蛋白基因片段的表达及其单克隆抗体的制备 被引量：2
1
作者 鲍海逊 夏梅 +2 位作者 缪凤琴 谢维 张建琼 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2009年第1期18-21,共4页
目的:表达SARS冠状病毒S蛋白片段,并制备特异性单克隆抗体(mAb)。方法:原核表达SARS冠状病毒S蛋白片段,从SARS病毒cDNA中扩增S蛋白(N端205至419aa)基因片段,测序结果正确。将该基因片段插入pQE-30中,构建重组质粒pQE-30-S1m,以重组质粒... 目的:表达SARS冠状病毒S蛋白片段,并制备特异性单克隆抗体(mAb)。方法:原核表达SARS冠状病毒S蛋白片段,从SARS病毒cDNA中扩增S蛋白(N端205至419aa)基因片段,测序结果正确。将该基因片段插入pQE-30中,构建重组质粒pQE-30-S1m,以重组质粒转化E.coliM15诱导表达His-S1m蛋白。纯化后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:表达并纯化了重组蛋白His-S1m,获得1株抗His-S蛋白的mAb1H2。Ig亚类鉴定为IgG1a,轻链为κ型。经Western blotting检测,mAb1H2与S蛋白发生特异性反应,而与His蛋白无交叉反应。结论:成功表达了重组S蛋白并制备了特异性mAb,为SARS-CoV的早期诊断及进一步研究S蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 SARS冠状病毒 S蛋白 单克隆抗体
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抗ARL-1单克隆抗体的制备及初步应用 被引量：2
2
作者 单军 张建琼 +4 位作者 金俊飞 马达 鲍海逊 缪凤琴 谢维 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期60-63,共4页
　目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mA... 　目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mAb进行鉴定及初步应用。结果: 获得 1株可稳定分泌抗ARL -1蛋白mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类为IgG2b, 轻链属于κ型。腹水mAb的效价为: 1∶4. 096×105。Westernblot的结果表明, ARL 1蛋白在被检测的肝癌组织中呈高表达, 而在相应的癌旁组织中不表达。免疫组织化学染色的结果表明, ARL -1蛋白在肝癌组织中呈高表达且主要定位在胞质内。结论: 成功地制备 1株抗ARL -1蛋白的mAb。初步应用的结果表明, ARL- 1蛋白在肝癌组织中呈高表达, 为进一步研究ARL -1蛋白的功能, 以及其与肝癌的确切关系奠定了基础。 展开更多
关键词 ARL-1蛋白 单克隆抗体 免疫组化染色
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人源抗戊型肝炎病毒单克隆抗体的获得与鉴定 被引量：2
3
作者 张建琼 魏华 +3 位作者 鲁晓萱 鲍海逊 孟继鸿 谢维 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期198-201,共4页
目的　获得人源中和性抗戊型肝炎病毒 (HEV)单克隆基因工程抗体。方法　采用五轮筛选法 (逐轮降低抗原包被量 ,严格洗脱条件 ) ,以固相化的 4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV患者外周血源的噬菌体抗体库... 目的　获得人源中和性抗戊型肝炎病毒 (HEV)单克隆基因工程抗体。方法　采用五轮筛选法 (逐轮降低抗原包被量 ,严格洗脱条件 ) ,以固相化的 4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV患者外周血源的噬菌体抗体库。获得有特异结合活性的噬菌体抗体 ,酶切鉴定抗体基因插入。切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体 ,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段 ,ELISA、Westernblot检测抗体免疫学活性 ;测序分析抗体基因。结果　筛选出 4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体 ,可能为中和抗体。切去gⅢ基因 ,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段 ,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性。可溶性抗体与含中和抗原表位的HEVORF2重组混合抗原有特异结合活性 ,与BSA、HBsAg无交叉结合反应。Westernblot显示在相对分子质量 (Mr)略大于 4 5× 10 3 处有一明显条带 ,与Mr4 8× 10 3 的Fab大小一致。DNA测序分析表明 ,Fab段VH 属于IgGVH3基因家族 ,VL 属于Vκ1基因家族。结论　利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 单克隆抗体 鉴定 免疫学活性 外周血
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口腔鳞癌细胞系HLAI类分子异常表达及其机制探讨
4
作者 唐秋莎 张建琼 +6 位作者 祁兵 沈传来 鲁晓萱 鲍海逊 Soldano Ferrone Xinhui Wang 谢维 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期236-239,共4页
为探讨两个口腔鳞癌细胞系 (KB和Tca81 1 3)中HLAI类抗原的表达水平及其异常的分子机制。利用流式细胞术、Westernblot检测细胞系中HLAI类抗原在蛋白水平的表达 ;RT PCR检测细胞系在转录水平的表达。结果两个口腔鳞癌细胞系中HLAI类抗... 为探讨两个口腔鳞癌细胞系 (KB和Tca81 1 3)中HLAI类抗原的表达水平及其异常的分子机制。利用流式细胞术、Westernblot检测细胞系中HLAI类抗原在蛋白水平的表达 ;RT PCR检测细胞系在转录水平的表达。结果两个口腔鳞癌细胞系中HLAI类抗原蛋白水平的表达下调 ;RT PCR结果显示Tca81 1 3细胞系中A、B、C、LMP2、LMP7、LMP1 0基因的mRNA表达下调 ;在KB细胞系中除了A、B、C、LMP7、LMP1 0基因的mRNA表达下调 ,LMP2、PA2 8α基因的mRNA表达显著减少或缺失 ;而TAP1、TAP2、Tapasin基因在mRNA水平的表达无改变。IFN γ诱导后纠正了多个基因在mRNA水平的异常表达。两个口腔鳞癌细胞系中HLAI类抗原表达下调 。 展开更多
关键词 癌 鳞状细胞 HLAⅠ类抗原 基因表达
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