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转化生长因子-β2诱导人Tenon囊成纤维细胞转化及其在瘢痕形成中的作用 被引量：7
1
作者 朱晓燕 李磊 +3 位作者 鲜光军 李海军 谭燕 谢琳 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期215-219,共5页
背景研究表明转化生长因子-β2（TGF-β2）能够促进瘢痕形成，但其在青光眼滤过术后局部瘢痕形成中的作用机制值得研究。目的探讨TGF-β2对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转化以及在滤过术后瘢痕形成中的作用。方法在斜视手术中获取3例患... 背景研究表明转化生长因子-β2（TGF-β2）能够促进瘢痕形成，但其在青光眼滤过术后局部瘢痕形成中的作用机制值得研究。目的探讨TGF-β2对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转化以及在滤过术后瘢痕形成中的作用。方法在斜视手术中获取3例患者的Tenon囊组织，并用组织块培养法在含质量分数10％胎牛血清的DMEM中培养，培养的细胞贴壁后达到70％～80％亚融合状态时更换为无血清培养基饥饿培养24h，然后分别加入质量浓度1、2、5、10、20Ixg／LTGF-β2诱导HTFs24h，另用2tzg／L或5μg／LTGF-β2 诱导HTFs6、24、48、72h，阴性对照组培养基中不加TGF-β2 用Westernblot法检测HTFs中α-平滑肌肌动蛋白（n—SMA）和pSmad2蛋白的表达，采用细胞免疫荧光技术检测“-SMA及纤维状肌动蛋白（F—actin）表达的定位，采用凝胶收缩实验检测培养细胞收缩力的变化。结果不同质量浓度TGF—B，组HTFs中0I—SMA表达的强度均明显强于阴性对照组，2tzg／L、5μg／LTGF—B，作用24～48h后HTFs中d—SMA表达强度达峰值，10μg／L、20μg／LTGF-β2组较2μg／L、5μg／LTGF-β2组α—SMA蛋白表达强度减弱。对照组HTFs中有少量α—SMA及F—actin表达，1、2、5μg／LTGF-β2组d—SMA及F—actin荧光表达明显增强，阳性细胞数明显增加，10μg／LTGF-β2组α—SMA及F-actin荧光表达较低质量浓度组减弱。2μg／LTGF-β2作用后pSmad2表达强度明显强于PBS组和FBS组，在作用后30rain～2h表达较强，2h后开始出现下降。对照组HTFs收缩凝胶面积所占原面积的百分数为（78．00-3．13）％，1、2、5、10tzg／LTGF-β2组分别为（63．88±1．78）％、（20．69±O．65）％、（19．49±O．54）％、（16．24~0．84）％，HTFs收缩凝胶面积占原面积的百分数随着TGF-β2质量浓度的增加而明显增加（F组别=859．400，P=0．000）。结论TGF-β2可诱导成纤维细胞转分化，一定程度上其作用呈质量浓度依赖性和时间依赖性，且细胞收缩力随质量浓度的增加而增强，可能是青光眼滤过术后滤过通道建立失败的重要机制。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β2 青光眼 滤过手术 瘢痕形成 TENON囊成纤维细胞 Α-平滑肌肌动蛋白
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人眼Tenon囊成纤维细胞体外培养及生长特性的比较 被引量：6
2
作者 朱晓燕 李磊 +2 位作者 鲜光军 李海军 谢琳 《局解手术学杂志》 2012年第3期233-235,共3页
目的观察在相同培养条件下不同组织来源的人眼Tenon囊成纤维细胞的生长特性,探讨不同组织来源对细胞培养的影响。方法分别取正常人、青光眼患者及翼状胬肉患者Tenon囊组织,均采用组织块贴壁法培养成纤维细胞,用含10%胎牛血清的DMEM培养... 目的观察在相同培养条件下不同组织来源的人眼Tenon囊成纤维细胞的生长特性,探讨不同组织来源对细胞培养的影响。方法分别取正常人、青光眼患者及翼状胬肉患者Tenon囊组织,均采用组织块贴壁法培养成纤维细胞,用含10%胎牛血清的DMEM培养基,于相同培养条件下进行离体培养,倒置显微镜下观察细胞生长情况并拍照记录,分别取传代第3、4、5代的成纤维细胞,于接种后第3天行MTT试验检测细胞增殖活力。结果青光眼组、翼状胬肉组较正常人组Tenon囊成纤维细胞离体培养细胞生长无明显差异,培养细胞2 d至6 d处于对数生长期。结论青光眼、翼状胬肉患者Tenon囊组织离体培养成纤维细胞的生长及增殖特性较正常人无明显差异,提示对相关疾病的研究及药物治疗的评价应以体内实验为主要参考,才能准确进行评估。 展开更多
关键词 TENON囊 成纤维细胞 翼状胬肉 青光眼
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壳聚糖纳米微粒对靶向转化生子因子-βⅡ型受体核酸适配子的缓释作用及其安全性研究 被引量：2
3
作者 陈侠 李磊 +3 位作者 鲜光军 王薇 朱晓燕 谢琳 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期352-357,共6页
背景本课题组前期已筛选得到了靶向转化生长因子-β（TGF-β）Ⅱ型受体（TpRⅡ）的核酸适配子S58，并证明S58可抑制TGF-β介导的人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转分化作用。壳聚糖纳米微粒（ CS-NP）已被证实可作为药物载体，但其包埋S58... 背景本课题组前期已筛选得到了靶向转化生长因子-β（TGF-β）Ⅱ型受体（TpRⅡ）的核酸适配子S58，并证明S58可抑制TGF-β介导的人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转分化作用。壳聚糖纳米微粒（ CS-NP）已被证实可作为药物载体，但其包埋S58后抑制HTFs增生的有效性和安全性值得关注。目的制备CS（S58）-NP，研究其生物学特性，并观察CS～NP对S58的保护及缓释作用。方法本研究所用细胞由本课题组前期原代培养的HTFs传代而来，取第4-10代对数生长期的细胞用于实验。以S58为实验对象，通过离子交联法制备出不同浓度CS-NP与S58表面电荷比（N／P比）的CS（S58）-NP。应用Zeta粒径分析仪检测CS（S58）-NP粒径及其Zeta电位；用扫描电子显微镜观察粒径的大小、形态及分布情况；采用琼脂糖凝胶电泳法检测CS-NP与S58的结合情况，并评估CS（S58）-NP对核酸酶的抵抗能力；用紫外分光光度计检测不同时间点缓释液PBS中S58的含量，以判断CS（S58）-NP缓释S58的情况；利用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测CS（S58）-NP对HTFs的细胞毒性。结果制备的CS（S58）-NP粒径分布于130～270nnl之间，其Zeta电位分布范围为＋16-＋28mV；扫描电子显微镜下可观察到CS（S58）-NP呈球形，分布均匀，粒径在300nm以内。当CS-NP与S58N／P比例为10、20、30、40时，CS（S58）．NP平均包封率分别为88．9％、89．3％、91．7％、90．5％；加入DNaseI组与无DNaseI组比较，S58经CS-NP包裹后能够明显抵御DNaseI的酶解作用；体外缓释实验发现，CS-NP在PBS中持续缓慢释放S58，随着时间的延长，S58累计释放量增加，以24～36h释放速率最高，96hS58累计释放量为100％。随着CS（S58）-NP浓度的增加，HTFs上清液中LDH相对释放率逐渐增加，差异有统计学意义（F=588．018，P=0．000）。50nmol／LCS（S58）-NP处理HTFs48h时LDH相对释放率最大，为（12．853±0．375）％。结论CS-NP对S58具有保护及缓释作用，其浓度在50nmol／L以下时对HTFs的毒性作用小，具有良好的生物相容性，可用于核酸适配子的载体研究。CS（S58）-NP可用于抑制TGF-β介导的HTFs转分化研究。 展开更多
关键词 核酸适配子 纳米载体 壳聚糖 TENON囊成纤维细胞 转化生长因子 生物靶向治疗
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转化生长因子β2对人眼Tenon囊成纤维细胞中赖氨酰氧化酶家族表达的诱导作用 被引量：2
4
作者 郭凤 朱晓燕 +7 位作者 陈侠 张勇 谭燕 吴晓凤 刘锐 李磊 鲜光军 谢琳 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期314-319,共6页
背景研究表明，转化生长因子β2（TGF-β2）促进Tenon囊成纤维细胞（TFs）的活化，在青光眼滤过术后结膜下纤维化过程中发挥作用，但其作用机制尚未完全明了。赖氨酰氧化酶家族（LOXs）与细胞外基质重塑有关，了解青光眼术后滤过泡的纤... 背景研究表明，转化生长因子β2（TGF-β2）促进Tenon囊成纤维细胞（TFs）的活化，在青光眼滤过术后结膜下纤维化过程中发挥作用，但其作用机制尚未完全明了。赖氨酰氧化酶家族（LOXs）与细胞外基质重塑有关，了解青光眼术后滤过泡的纤维化过程中TGF-β2与LOXs活化的关系对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的防治具有重要意义。目的观察TGF-β2对体外培养的人眼TFs中LOXs蛋白表达变化的影响。方法将培养的第4～8代人TFs分为正常对照组和不同质量浓度TGF-β2培养组，分别在细胞培养液中添加终质量浓度为2、4、8和16ng／ml TGF-β2继续培养24h，采用Western blot法测定不同质量浓度TGF-β2培养组细胞中LOXs蛋白表达的变化，确定最适TGF-β2刺激质量浓度。用4ng／ml TGF-β2分别处理培养的TFs6、12、24和48h，采用Western blot法测定各时间点细胞中LOXs蛋白表达的变化。采用细胞免疫荧光法分别检测正常对照组和4ng／ml TGF-β2培养组TFs中LOX蛋白的表达及其在细胞中的分布。结果Western blot法检测显示，正常对照组及2、4、8和16ng／ml TGF-β2培养组人TFs中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白的表达强度均随TGF-β2质量浓度的升高而增加，各组间细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3和LOXL4蛋白相对表达量的总体比较，差异均有统计学意义（F=37．338、13．438、31．067、11．767、15．167，均P〈0．01）。细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白相对表达量的升高呈TGF-β2剂量依赖性。正常对照组及4ng／ml TGF-β2刺激人TFs后6、12、24和48h组，细胞中LOXL2蛋白的相对表达量分别为0．68±0．07、1．09±0．10、1．32±0．07、1．50±0．06和1．89±0．12，其表达强度呈时间依赖性，总体比较差异有统计学意义（F=82．832，P=0．000）。正常对照组人TFs中LOX蛋白表达强度较弱，主要位于细胞质中，TGF-β2培养组细胞中LOX蛋白的表达强度明显强于正常对照组，且表达LOX蛋白的细胞增多。结论正常人TFs中可见LOXs呈低表达，TGF-β2以剂量和时间依赖的方式上调人TFs中LOXs蛋白的表达。这个结果为青光眼术后滤过泡纤维化的相关防治研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 青光眼 滤过手术/不良反应 TENON囊 成纤维细胞 人 赖氨酰氧化酶 转化生长因子β2/药物作用 细胞培养
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盐酸氮卓斯汀联合普拉洛芬治疗儿童变态反应性结膜炎 被引量：19
5
作者 刘华 许多 +2 位作者 杨红 鲜光军 陈为 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期1027-1030,共4页
目的:探讨盐酸氮卓斯汀联合普拉洛芬治疗儿童变态反应性结膜炎的疗效。方法:选择我院2016-05/2018-06接诊的变态反应性结膜炎患儿80例160眼,根据治疗方法不同分为两组,对照组40例80眼给予普拉洛芬滴眼液治疗,观察组40例80眼在对照组基... 目的:探讨盐酸氮卓斯汀联合普拉洛芬治疗儿童变态反应性结膜炎的疗效。方法:选择我院2016-05/2018-06接诊的变态反应性结膜炎患儿80例160眼,根据治疗方法不同分为两组,对照组40例80眼给予普拉洛芬滴眼液治疗,观察组40例80眼在对照组基础上联合盐酸氮卓斯汀滴眼液进行辅助治疗。两组患儿均连续治疗1wk。比较两组患儿临床疗效、临床症状、泪膜稳定性、炎症因子的变化情况及不良反应。结果:治疗1wk后观察组临床总有效率为95.0%,高于对照组的85.0%(P=0.035)。观察组患儿眼痒、流泪、异物感、畏光的评分均低于对照组[(1.13±0.36)vs(2.28±0.41)分,(1.05±0.33)vs(2.14±0.49)分,(1.17±0.46)vs(2.28±0.59)分,(1.29±0.37)vs(1.84±0.55)分](P<0.05);观察组患儿的泪膜破裂时间(BUT)明显高于对照组,角膜荧光素染色试验(FL)明显低于对照组[(11.96±1.14)vs(5.85±0.92)s,(2.85±0.33)vs(6.21±0.68)分](P<0.05);观察组患儿泪液中组胺(HA)、嗜酸性细胞阳离子蛋白(ECP)和免疫球蛋白E(IgE)水平均低于对照组[(31.62±4.51)vs(65.03±6.48)μg/L,(2.20±0.28)vs(7.26±0.72)μg/L,(0.06±0.01)vs(0.18±0.04)mg/L](P<0.05);两组患儿治疗期间的不良反应总发生率无差异(χ2=1.897,P=0.168)。结论:盐酸氮卓斯汀联合普拉洛芬治疗儿童变态反应性结膜炎的效果明显,能有效改善炎症因子指标水平,促进泪膜稳定性的恢复,安全性好。 展开更多
关键词 变态反应性结膜炎 普拉洛芬 盐酸氮卓斯汀 炎症因子 临床症状
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视觉功能训练联合托吡卡胺滴眼液治疗假性近视的临床疗效观察 被引量：8
6
作者 许多 刘明明 +4 位作者 杨红 鲜光军 孙强 刘华 陈少琼 《现代生物医学进展》 CAS 2020年第19期3673-3677,共5页
目的:探讨视觉功能训练联合托吡卡胺滴眼液在治疗假性近视中的临床疗效。方法:选取中国人民解放军陆军特色医学中心眼科和重庆佑佑宝贝妇儿医院眼科2019年2月至2019年8月收治的400例假性近视患儿作为研究对象,将其随机分为对照组和观察... 目的:探讨视觉功能训练联合托吡卡胺滴眼液在治疗假性近视中的临床疗效。方法:选取中国人民解放军陆军特色医学中心眼科和重庆佑佑宝贝妇儿医院眼科2019年2月至2019年8月收治的400例假性近视患儿作为研究对象,将其随机分为对照组和观察组(n=200)。对照组给予滴眼液缓解眼疲劳治疗,观察组则采用视觉功能训练联合托吡卡胺滴眼液治疗。比较两组患儿治疗前及治疗2个月、6个月后裸眼视力、眼轴长度、屈光度、正相对调节量和视疲劳评分的变化。结果:治疗2个月和6个月后,观察组患儿裸眼视力分别为(0.75±0.05)和(0.81±0.04),较对照组显著上升(P<0.05);屈光度分别为(+0.05±0.50)和(+0.06±0.48),明显高于对照组(P<0.05);正相对调节量检测结果依次是(-1.98±0.07)和(-2.51±0.24),较对照组明显增加(P<0.05)。两组患儿视觉感知双眼视功能均有明显改善,其中观察组视觉功能恢复显著高于对照组(P<0.05)。视疲劳调查显示观察组患儿视疲劳评分分别为(6.90±0.89)分和(3.91±0.89)分,显著低于对照组(P<0.05)。结论:视觉功能训练联合托吡卡胺滴眼液治疗能有效提高患儿裸眼视力、改善屈光度、正相对调节量和视觉感知功能,从而减少视疲劳,预防近视。 展开更多
关键词 视觉功能训练 吡卡胺滴眼液 假性近视中 临床疗效
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