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抗棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)小鼠多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：3
1
作者 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔 古新蓉 +2 位作者 马纪 马小丽 刘小宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期845-849,共5页
目的原核表达棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)并制备其多克隆抗体。方法在大肠杆菌中表达组蛋白-HaCHT4融合蛋白(His-HaCHT4),镍柱纯化目的蛋白,经足垫加皮下注射免疫小鼠。4次免疫后,用ELISA检测抗His-HaCHT4多克隆抗体的效价,Western blo... 目的原核表达棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)并制备其多克隆抗体。方法在大肠杆菌中表达组蛋白-HaCHT4融合蛋白(His-HaCHT4),镍柱纯化目的蛋白,经足垫加皮下注射免疫小鼠。4次免疫后,用ELISA检测抗His-HaCHT4多克隆抗体的效价,Western blot法检测其免疫特异性。结果成功纯化His-HaCHT4融合蛋白,小鼠抗His-HaCHT4的多克隆抗体的滴度高于1∶204 800。Western blot结果显示该抗体能与His-HaCHT4融合蛋白及棉铃虫体中的天然HaCHT4结合,但不能与黄粉虫的蛋白结合。结论成功原核表达和纯化了His-HaCHT4,制备了特异性的鼠多克隆抗体。 展开更多
关键词 棉铃虫 Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4) 多克隆抗体 免疫特异性
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瓜类褪绿黄化病毒及其系统进化分析 被引量：1
2
作者 韩盛 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔 +2 位作者 杨渡 温且木·阿布列孜 玉山江·麦麦提 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期866-872,共7页
【目的】检测新疆南疆7个县/市瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV),进行系统发育分析,为新疆南疆CCYV预警和防控提供参考。【方法】于2019年,从中国新疆南疆7个县/市采集带有黄化特征的51份甜瓜叶片样品,RT-PCR进... 【目的】检测新疆南疆7个县/市瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV),进行系统发育分析,为新疆南疆CCYV预警和防控提供参考。【方法】于2019年,从中国新疆南疆7个县/市采集带有黄化特征的51份甜瓜叶片样品,RT-PCR进行CCYV的检测,进行特异性片段的克隆、测序和系统发育分析。【结果】中国新疆巴楚县、阿克苏市、莎车县、伽师县、疏勒县、疏附县均未检测到CCYV,而洛浦县的13份样本中,8份检出为CCYV阳性,检出率为61.53%,洛浦县CCYV特异性片段克隆测序获得了685 bp的核酸序列,与GenBank中的CCYV分离物外壳蛋白(Coat protein,CP)的一致性达到100%。所得序列与中国新疆(吐鲁番)、中国其他省、苏丹、日本、塞浦路斯、黎巴嫩的CP基因聚在I组(Group),沙特阿拉伯的分离物聚在Ⅱ组,伊朗的分离物聚在Ⅲ组。【结论】CCYV在中国新疆南疆洛浦县甜瓜产区发生,与中国新疆吐鲁番、中国其他省及周围国家的CCYV分离物亲缘关系很近,且群体遗传变异很小。 展开更多
关键词 瓜类褪绿黄化病毒 和田 甜瓜 病毒分布 病毒进化
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瓜类蚜传黄化病毒在南疆的检测及系统进化 被引量：2
3
作者 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔 杨渡 +2 位作者 韩盛 温且木·阿布列孜 玉山江·麦麦提 《中国蔬菜》 北大核心 2020年第7期38-44,共7页
2019年从南疆7个县/市采集表现瓜类蚜传黄化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)侵染典型特征的47份甜瓜叶片样品,通过RT-PCR进行CABYV的检测,从县/市各选出1份代表性样本,进行特异性片段的克隆、测序,以及核苷酸多样性、... 2019年从南疆7个县/市采集表现瓜类蚜传黄化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)侵染典型特征的47份甜瓜叶片样品,通过RT-PCR进行CABYV的检测,从县/市各选出1份代表性样本,进行特异性片段的克隆、测序,以及核苷酸多样性、蛋白序列和系统发育分析。结果显示,28份样本呈现CABYV阳性,检出率为59.57%,巴楚县、阿克苏市、莎车县、伽师县、疏勒县、疏附县、洛浦县的检出率分别为80.00%、28.57%、83.33%、60.00%、37.50%、71.42%、66.67%。克隆测序获得了707 bp的核酸序列,核苷酸多样性值在0.012~0.018之间,所有序列均具有2个开放阅读框(ORF)。ORF1编码199个氨基酸的外壳蛋白(CP),各县/市的序列相似性为99.07%。ORF2编码191个氨基酸的运动蛋白(MP),各县/市的序列相似性为98.80%。基于CP和MP序列构建的系统发育树表明,各县/市得到的所有CP和MP均聚在亚洲分支。CABYV在南疆甜瓜主产区普遍发生,且不同区域核苷酸变异很低,这些地区的CABYV与中国及日本分离物的亲缘关系较近,而与欧洲及中国台湾分离物的亲缘关系较远。 展开更多
关键词 瓜类蚜传黄化病毒 甜瓜 病毒分布 系统进化
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棉铃虫Ⅰ型和Ⅶ型几丁质酶基因表达规律的比较分析 被引量：2
4
作者 罗生慧 随慧 +4 位作者 包静 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔 白雪莹 吕国会 刘小宁 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期1424-1431,共8页
几丁质酶(chitinase,CHT)在昆虫生长发育过程中主要有降解围食膜、外骨骼、角质层以及肠道内层的几丁质成分,从而参与昆虫的蜕皮和细胞增殖的功能。在本研究中,分析比较了棉铃虫I型和Ⅶ型几丁质酶HaCHTⅠ、HaCHTⅦ的结构域及其时空表达... 几丁质酶(chitinase,CHT)在昆虫生长发育过程中主要有降解围食膜、外骨骼、角质层以及肠道内层的几丁质成分,从而参与昆虫的蜕皮和细胞增殖的功能。在本研究中,分析比较了棉铃虫I型和Ⅶ型几丁质酶HaCHTⅠ、HaCHTⅦ的结构域及其时空表达特性,对进一步功能研究提供重要的素材。首先利用生物信息学在线工具SMART对本课题组前期所获得的几丁质酶基因HaCHT I、HaCHT VII的结构域进行分析;之后采用qRT-PCR方法研究棉铃虫6龄幼虫不同组织和幼虫不同龄期蜕皮前后的中肠中HaCHT I、HaCHT VII的时空表达特性。结果表明:对几丁质酶HaCHTⅠ、HaCHTⅦ结构域进行分析,发现HaCHTⅠ和HaCHTⅦ均具有信号肽序列、催化区域、连接区域,且HaCHTⅠ有一个几丁质结合结构域,而HaCHTⅦ则无;棉铃虫Helicoverpa armigera几丁质酶基因HaCHT I和HaCHT VII在6龄幼虫不同组织部位的均有表达,其中HaCHT I在各个部位的表达量没有显著的差异,而HaCHT VII在头壳和体壁中表达显著高于其它组织;几丁质酶基因HaCHT I、HaCHT VII在棉铃虫幼虫蜕皮前后中肠的表达量变化较大,其中HaCHT I在3龄、4龄、5龄、6龄末期及蛹期时的表达量呈递减的趋势,在4龄、5龄、6龄初期时表达量则是先减后增的趋势,而HaCHT VII在3龄、4龄、5龄、6龄末期及蛹期时的表达量呈递增的趋势,恰与同一时期HaCHT I的表达量相反,在4龄、5龄、6龄初期时HaCHT VII的表达量呈递减的趋势。棉铃虫HaCHTⅠ和HaCHTⅦ的结构域和时空表达都存在差异,据此可推测这些差异可能对其功能具有一定的影响。研究结果为深入研究几丁质酶基因HaCHT I和HaCHT VII的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 棉铃虫 Ⅰ型几丁质酶 Ⅶ型几丁质酶 比较分析
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棉铃虫Ⅰ型几丁质酶的表达 被引量：2
5
作者 古新蓉 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔 +4 位作者 李梦鸽 王新 随慧 包静 刘小宁 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期1076-1082,共7页
昆虫几丁质酶主要参与昆虫蜕皮、围食膜降解、细胞增殖、机体免疫防御、生长因子等重要生理生长发育过程。在本研究中,从NCBI下载棉铃虫几丁质酶序列,并克隆验证正确,构建的系统发育树表明属于Ⅰ型几丁质酶。将不包含信号肽的开放阅读... 昆虫几丁质酶主要参与昆虫蜕皮、围食膜降解、细胞增殖、机体免疫防御、生长因子等重要生理生长发育过程。在本研究中,从NCBI下载棉铃虫几丁质酶序列,并克隆验证正确,构建的系统发育树表明属于Ⅰ型几丁质酶。将不包含信号肽的开放阅读框序列(1 707 bp)与pET28a载体连接,转化至大肠杆菌transetta(DE3)中进行诱导表达,Western blot进一步验证融合蛋白His-HaCHT。用镍柱子纯化融合蛋白,纯化获得的融合蛋白对胶体几丁质有降解活性,其酶活力为0.023 μg/mL·s ^-1 。不同龄期的qPCR结果显示,该基因在棉铃幼虫的 6个幼虫期以及预蛹蜕皮后均有表达,但 HaCHTI 在4龄和6龄幼虫阶段表达相对较高,而在1龄、 2龄、3龄、5龄幼虫和预蛹表达量较低。这些结果表明,异源表达的棉铃虫的I型几丁质酶对胶体几丁质具有降解活性,可能对棉铃虫正常蜕皮有着重要的作用。 展开更多
关键词 棉铃虫 几丁质酶 表达纯化 酶活性
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新型多功能蛋白家族DABB类蛋白研究进展 被引量：2
6
作者 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔 马纪 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期5460-5472,共13页
DABB类蛋白含有1~2个二聚化α+β桶状结构域(dimeric α+β barreldomain,DABB)。DABB结构域最早在嗜氢菌的果糖1,6二磷酸醛缩酶的C端和盐胁迫下胡杨的热休克蛋白(Hsp90)、羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)中发现。目前报道的该类蛋白主要存在于植... DABB类蛋白含有1~2个二聚化α+β桶状结构域(dimeric α+β barreldomain,DABB)。DABB结构域最早在嗜氢菌的果糖1,6二磷酸醛缩酶的C端和盐胁迫下胡杨的热休克蛋白(Hsp90)、羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)中发现。目前报道的该类蛋白主要存在于植物、细菌和真菌中,在动物中尚无报道。在植物中,DABB类蛋白与植物抵御多种病原真菌入侵和非生物胁迫相关。在微生物中,DABB类蛋白主要参与氧化还原相关的代谢过程。目前,关于DABB结构域的具体功能仍不清楚,尚无关于DABB类蛋白的综述文献,本综述从含有此结构域的DABB类蛋白的物种来源、DABB结构域的特点及其保守氨基酸、DABB类蛋白的系统进化等方面,对植物和细菌DABB类蛋白的研究现状进行了总结,并对该类蛋白的研究与应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 DABB类蛋白 α+β桶状结构域 单加氧酶 胁迫响应 抗真菌
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