目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时一氧化氮(NO)的水平变化及其产生的调控机制,为临床治疗RSV疾病提供有益的思路。方法以RSV感染人肺上皮细胞A549细胞,并设立不同的感染时间(4h、8h、16h和24h),同时分别给予PDTC(核转录因子NF-κB的...目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时一氧化氮(NO)的水平变化及其产生的调控机制,为临床治疗RSV疾病提供有益的思路。方法以RSV感染人肺上皮细胞A549细胞,并设立不同的感染时间(4h、8h、16h和24h),同时分别给予PDTC(核转录因子NF-κB的特异性抑制剂)或AG(诱导型一氧化氮合酶i NOS的特异性抑制剂)处理。收集各组细胞和细胞培养上清,用Western blot法检测细胞核内活性NF-κBp65蛋白的表达,半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测i NOS mR-NA和蛋白表达,硝酸还原酶法检测细胞培养上清中NO含量。结果RSV感染4h后,核内活性NF-κBp65蛋白、i NOS mR-NA和蛋白、细胞培养上清中NO含量均升高,各指标的变化与正常对照相比,差异均有显著性,并且与RSV感染存在时间依赖关系。加入PDTC后可明显抑制NF-κB活化,同时下调i NOS mRNA和蛋白表达。加入AG后,则明显降低细胞培养上清中NO含量。结论RSV感染可诱导产生大量的NO,其主要受i NOS的调节。NF-κB活化对i NOS基因表达具有重要的正调控作用。提示RSV诱导NO生成可能通过活化NF-κB所致。展开更多
文摘目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时一氧化氮(NO)的水平变化及其产生的调控机制,为临床治疗RSV疾病提供有益的思路。方法以RSV感染人肺上皮细胞A549细胞,并设立不同的感染时间(4h、8h、16h和24h),同时分别给予PDTC(核转录因子NF-κB的特异性抑制剂)或AG(诱导型一氧化氮合酶i NOS的特异性抑制剂)处理。收集各组细胞和细胞培养上清,用Western blot法检测细胞核内活性NF-κBp65蛋白的表达,半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测i NOS mR-NA和蛋白表达,硝酸还原酶法检测细胞培养上清中NO含量。结果RSV感染4h后,核内活性NF-κBp65蛋白、i NOS mR-NA和蛋白、细胞培养上清中NO含量均升高,各指标的变化与正常对照相比,差异均有显著性,并且与RSV感染存在时间依赖关系。加入PDTC后可明显抑制NF-κB活化,同时下调i NOS mRNA和蛋白表达。加入AG后,则明显降低细胞培养上清中NO含量。结论RSV感染可诱导产生大量的NO,其主要受i NOS的调节。NF-κB活化对i NOS基因表达具有重要的正调控作用。提示RSV诱导NO生成可能通过活化NF-κB所致。
