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利用CRISPR/Cas9靶向敲除Piezo1基因对小鼠间充质干细胞成骨分化的影响研究
1
作者 高昕 杨屹羚 +2 位作者 黄湘如 代庆刚 江凌勇 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1080-1088,共9页
目的·应用CRISPR/Cas9系统对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2进行靶向Piezo1基因稳定敲除,探究Piezo1对间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法·根据CRISPR/Cas9原理,设计2条靶向Piezo1基因的单链指导RNA(single guide RNA,sgRNA),... 目的·应用CRISPR/Cas9系统对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2进行靶向Piezo1基因稳定敲除,探究Piezo1对间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法·根据CRISPR/Cas9原理,设计2条靶向Piezo1基因的单链指导RNA(single guide RNA,sgRNA),利用Lenti-Cas9-GFP和Lenti-U6-sgRNA-mCherry载体分别构建表达Cas9的慢病毒和表达sgRNA的慢病毒。将2种慢病毒感染C3H10T1/2细胞,利用流式细胞分选技术对GFP和mCherry阳性的细胞进行筛选;挑取单克隆细胞,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳验证,最终得到Piezo1基因片段敲除的单克隆细胞系。序列测定、实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,qPCR)及细胞免疫荧光技术对构建的Piezo1基因敲除细胞(Piezol knockout C3H10T1/2,CPK)进行敲除效率验证。CCK-8实验检测敲除Piezo1对细胞增殖的影响;对构建成功的Piezo1基因敲除细胞进行体外成骨诱导分化,并进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及茜素红染色,利用qPCR探究敲除Piezo1对细胞的成骨相关基因mRNA水平的影响。结果·琼脂糖凝胶电泳结果显示,敲除Piezo1的单克隆细胞菌液通过PCR扩增后产物出现阳性克隆。单克隆细胞的测序结果显示,敲除Piezo1的单克隆细胞的Piezo1基因在第4外显子中提前形成终止密码子TGA,无法正确翻译蛋白;qPCR验证了CPK中Piezo1基因在mRNA水平被抑制;免疫荧光显示CPK中Piezo1基因的敲除效率较高,基本阻碍Piezo1在细胞中的表达。CCK-8实验显示敲除Piezo1后细胞增殖能力下降(P<0.05);ALP染色及茜素红染色结果显示敲除Piezo1后细胞成骨能力降低(P<0.05),且CPK中成骨相关基因如Ⅰ型胶原蛋白A1(α1 typeⅠcollagen,Col1a1)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,Osx)以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,Alp)的mRNA表达水平降低(均P<0.05)。结论·利用CRISPR/Cs9基因编辑系统成功构建靶向敲除Piezo1基因的C3H10T1/2细胞系。敲除Piezo1能抑制小鼠间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化。 展开更多
关键词 Piezo1 CRISPR/Cas9 间充质干细胞 成骨分化
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新课标视角下的地理教学设计
2
作者 黄湘如 《中文科技期刊数据库（全文版）教育科学》 2023年第5期0163-0166,共4页
本文针对新课标视角下的地理教学设计进行探讨,包括地理教学设计的重要性、教学设计观、初中地理单元教学设计、以及初中地理教学中需要注意的问题。其中,重点讨论了如何科学设计教学方法与策略,突出学生主体地位与有效性,包括设计教学... 本文针对新课标视角下的地理教学设计进行探讨,包括地理教学设计的重要性、教学设计观、初中地理单元教学设计、以及初中地理教学中需要注意的问题。其中,重点讨论了如何科学设计教学方法与策略,突出学生主体地位与有效性,包括设计教学信息结构和建设以生为本的地理课堂等方面,旨在提高地理教学效果和促进学生的学习兴趣和探究能力。 展开更多
关键词 新课标 地理教学 设计
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黄野螟防治药剂筛选试验 被引量：19
3
作者 陈志云 王玲 +3 位作者 李东文 李奕震 黄湘如 秦长生 《林业科技开发》 北大核心 2012年第1期117-119,共3页
利用浸渍法在室内测定了10种和4种农药分别毒杀黄野螟高龄和低龄幼虫的药效试验,结果表明:对高龄幼虫,1.8%阿维菌素乳油500万倍液,0.5%甲维盐微乳剂500万倍液,森得保可湿性粉剂800倍液,2.5%多杀菌素悬浮剂5 000倍液,90%敌百虫晶体20 00... 利用浸渍法在室内测定了10种和4种农药分别毒杀黄野螟高龄和低龄幼虫的药效试验,结果表明:对高龄幼虫,1.8%阿维菌素乳油500万倍液,0.5%甲维盐微乳剂500万倍液,森得保可湿性粉剂800倍液,2.5%多杀菌素悬浮剂5 000倍液,90%敌百虫晶体20 000倍液,15%茚虫威悬浮剂3 000倍液和4.5%高效氯氰菊酯乳油1000倍液的致死率均达100%;对低龄幼虫,4.5%高效氯氰菊酯乳油4 000倍液和森得保可湿性粉剂1 000倍液的致死率分别为100%和97.7%。在林间,阿维菌素或甲维盐500万倍液、森得保1 000倍液的杀虫效果均达100%。 展开更多
关键词 土沉香 黄野螟 杀虫剂 筛选试验
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诱导型成骨细胞特异Stat3基因敲除小鼠的构建及验证
4
作者 龚心仪 黄湘如 +5 位作者 周巳入 杨屹羚 徐弘远 金安婷 代庆刚 江凌勇 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期337-342,共6页
目的:运用Cre-Loxp基因敲除系统,构建诱导型条件性Stat3基因敲除小鼠并验证其敲除效率。方法:通过Stat3fl/fl与Col1 creERT2基因型的C57小鼠多代杂交,构建诱导型成骨细胞特异Stat3敲除小鼠Stat3Col1ERT2。取其骨髓间充质干细胞(bone mes... 目的:运用Cre-Loxp基因敲除系统,构建诱导型条件性Stat3基因敲除小鼠并验证其敲除效率。方法:通过Stat3fl/fl与Col1 creERT2基因型的C57小鼠多代杂交,构建诱导型成骨细胞特异Stat3敲除小鼠Stat3Col1ERT2。取其骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),加入4-羟基他莫西芬(4-OTH)后,采用实时定量PCR技术和免疫印迹技术在m RNA与蛋白水平分别体外验证Stat3敲除效果。于小鼠腹腔注射他莫昔芬,采用免疫荧光染色技术,观察小鼠上颌牙槽骨区域STAT3的表达,以体内验证敲除效果。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实时定量PCR和免疫印迹结果显示,Stat3Col1ERT2小鼠BMSCs体外加药诱导敲除后,STAT3的m RNA水平显著下调(P<0.05)、蛋白表达降低(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,Stat3Col1ERT2小鼠体内上颌牙槽骨区域成骨细胞的STAT3表达显著降低(P<0.05)。结论:本研究成功构建了诱导型成骨细胞特异Stat3基因敲除小鼠,使基因敲除可受观察者时空调控,为今后正畸牙移动、颌骨牵引成骨、颌骨骨折等牙槽骨改建机制的研究提供了新的思路及依据。 展开更多
关键词 STAT3 成骨细胞 诱导型条件性基因敲除小鼠 他莫西芬
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Prrx1+牙周膜干细胞在牙移动过程中的谱系示踪
5
作者 汪席均 金安婷 +5 位作者 黄湘如 徐弘远 高昕 杨屹羚 代庆刚 江凌勇 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1008-1015,共8页
目的·通过Cre/loxP重组酶系统研究牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)中配对相关同源基因1(paired related homeobox 1,Prrx1)阳性细胞谱系(Prrx1+细胞谱系)在小鼠牙移动过程中的动态分布。方法·利用Cre/l... 目的·通过Cre/loxP重组酶系统研究牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)中配对相关同源基因1(paired related homeobox 1,Prrx1)阳性细胞谱系(Prrx1+细胞谱系)在小鼠牙移动过程中的动态分布。方法·利用Cre/loxP重组酶系统,将诱导型Prrx1-Cre^(ERT2)小鼠与R26^(tdTomato)荧光标记小鼠交配繁殖,并通过PCR对其子代小鼠进行基因型鉴定。取8只子代小鼠,向其腹腔注射他莫昔芬(tamoxifen,TA),以标记PDLSCs中的Prrx1+细胞谱系(即tdTomato^(+)细胞)。于小鼠上颌左侧安置加力装置[即正畸牙移动(orthodontics tooth movement,OTM)侧],右侧未加力即为对照侧,以构建小鼠OTM模型。分别于牙移动第3日(OTM 3 d)、第7日(OTM 7 d)时处死小鼠,收集其双侧上颌磨牙及周围牙周组织,经脱钙后行包埋及冰冻切片处理。采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)观察张力区和压力区牙周膜的改变,并利用免疫荧光染色观察Prrx1+细胞谱系在张力区及压力区的动态分布。结果·经PCR鉴定,子代小鼠基因型为Prrx1-Cre^(ERT2);R26^(tdTomato)。随着加力装置作用的增加,OTM 7 d小鼠的牙移动距离[(87.44±4.02)μm]较OTM 3 d小鼠[(42.81±5.04)μm]明显增加,提示小鼠OTM模型构建成功。H-E染色结果显示:OTM 3 d时小鼠OTM侧压力区的牙周膜被压缩、间隙变窄,而OTM 7 d时OTM侧牙周膜宽度逐渐恢复;OTM 3 d时OTM侧张力区的牙周膜被拉伸,而OTM 7 d较OTM 3 d时牙周膜排列更规则。免疫荧光染色结果显示:OTM 3 d时OTM侧压力区牙周膜中tdTomato^(+)细胞数量较对照侧减少,OTM 7 d时OTM侧压力区tdTomato^(+)细胞数量较对照侧增加(均P<0.05);OTM 3 d及OTM 7 d时,OTM侧张力区tdTomato^(+)细胞数量较对照侧均有增加(均P<0.05)。结论·成功构建了Prrx1-Cre^(ERT2);R26^(tdTomato)小鼠的OTM模型,并初步证实了Prrx1+细胞谱系参与OTM过程中的牙周改建。 展开更多
关键词 细胞谱系示踪 正畸牙移动 配对相关同源基因1 Cre/loxP重组酶系统
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广东南岭国家级自然保护区的管理现状及对策探讨
6
作者 黄湘如 《农技服务》 2016年第2期191-191,共1页
广东南岭国家级自然保护区地处广东省内北部南岭山脉中段南坡,其总面积5.84万公顷,横跨包括阳山、乳源、连州三个县市,占到了广东省陆地面积的0.31%,是我国重点自然保护区之一。笔者从地区资源建设、野生动物保护以及科研监测管理等多... 广东南岭国家级自然保护区地处广东省内北部南岭山脉中段南坡,其总面积5.84万公顷,横跨包括阳山、乳源、连州三个县市,占到了广东省陆地面积的0.31%,是我国重点自然保护区之一。笔者从地区资源建设、野生动物保护以及科研监测管理等多个角度探析了该保护区在未来的经营管理对策,以供参考。 展开更多
关键词 广东南岭 自然保护区 野生动物资源 保护 科研监测 组织管理
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植物多样性及其相关问题探讨 被引量：1
7
作者 邓燕萍 陈志明 +1 位作者 黄湘如 陈接磷 《吉林农业》 2019年第16期28-29,共2页
生物多样性是人类生存和发展的物质基础。植物作为生物系统的重要组成部分,具有直接和潜在的价值。对维护环境平衡和生态系统的稳定性具有重要意义。随着科技的发展,资源过度利用、气候变化等方面的作用、植物种植资源与植物的可持续利... 生物多样性是人类生存和发展的物质基础。植物作为生物系统的重要组成部分,具有直接和潜在的价值。对维护环境平衡和生态系统的稳定性具有重要意义。随着科技的发展,资源过度利用、气候变化等方面的作用、植物种植资源与植物的可持续利用,以及植物生长过程中需要面对的环境在日渐变坏。本文主要是从植物多样性的研究水平、评价指标以及保护方面进行探讨,以期为植物多样性的研究提供合理的理论依据。 展开更多
关键词 植物多样性 物种多样性 评价指数
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间有容 秩有序
8
作者 廖开民 黄湘如 +2 位作者 陈前程 刘宗福 李群娜 《设计家》 2009年第9期76-81,共6页
本户别墅以"新东方风格"为主基调,将汉、和与南洋文化做融合性设计,用深色调材料和原木质感表现朴实沉稳的气氛,体现出耐人寻味的东方韵味,同时渗入现代的时尚元素。装饰配以几何元素的家具,在细节处做到动感,也增加了空间的... 本户别墅以"新东方风格"为主基调,将汉、和与南洋文化做融合性设计,用深色调材料和原木质感表现朴实沉稳的气氛,体现出耐人寻味的东方韵味,同时渗入现代的时尚元素。装饰配以几何元素的家具,在细节处做到动感,也增加了空间的视觉延伸,给观者以更多的遐想。中国书法挥洒于墙面,提升了整个空间的气质,也凸显了现代中式的神韵。 展开更多
关键词 新东方 几何元素 中国书法 空间 融合性 东方文化 深色调 风格 元设计 现代
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土沉香黄野螟生物学特性研究 被引量：26
9
作者 陈志云 李东文 +3 位作者 王玲 李奕震 黄湘如 秦长生 《中国植保导刊》 北大核心 2011年第11期10-14,共5页
黄野螟(Heortia vitessoides Moore)是土沉香的主要害虫。通过室内、外的观察,结果表明,土沉香黄野螟1年可以发生6代。11月下旬以老熟幼虫入土化蛹越冬。翌年4月初羽化。成虫趋光性弱。26℃条件下,卵期6.6 d,幼虫期14.1 d,预蛹期2.9 d,... 黄野螟(Heortia vitessoides Moore)是土沉香的主要害虫。通过室内、外的观察,结果表明,土沉香黄野螟1年可以发生6代。11月下旬以老熟幼虫入土化蛹越冬。翌年4月初羽化。成虫趋光性弱。26℃条件下,卵期6.6 d,幼虫期14.1 d,预蛹期2.9 d,蛹期9.8 d,雌、雄成虫寿命分别为8.7和8.6 d。幼虫共5龄,1～4龄具群集性,5龄的取食量占幼虫期的70.24%。卵主要分布于寄主树冠下层嫩叶端部的背面。 展开更多
关键词 土沉香 黄野螟 生物学特性
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