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人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化
被引量:
1
1
作者
吴芳明
韩春光
+4 位作者
彭明丽
黄琳仪
王琼
朱欣凯
刘永学
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008年第S1期149-154,共6页
旨在建立获得融合蛋白GPR81-Gi1α的方法和最优条件。采用RT-PCR从人胚胎肾及大脑组织总RNA中分别扩增孤儿G蛋白偶联受体GPR81和Gi1α的完整表达序列(分别为1 041bp和1 065bp),并构建各自的重组质粒pcDNA3.1(+)-GPR81及pcDNA3.1(+)-Gi1...
旨在建立获得融合蛋白GPR81-Gi1α的方法和最优条件。采用RT-PCR从人胚胎肾及大脑组织总RNA中分别扩增孤儿G蛋白偶联受体GPR81和Gi1α的完整表达序列(分别为1 041bp和1 065bp),并构建各自的重组质粒pcDNA3.1(+)-GPR81及pcDNA3.1(+)-Gi1α,再以重组质粒为模板,运用重叠延伸PCR法扩增得到融合基因GPR81-Gi1α,测序无误后将融合基因与pFASTBac1重组得重组质粒pFASTBac1-GPR81-Gi1α,而后转化DH10Bac,使该融合基因重组质粒发生特异性的转座和病毒重组,获得杆状病毒表达穿梭质粒pBacmid-GPR81- Ci1α,再将该重组杆粒转染昆虫sf9细胞,获得含杆状病毒的细胞分泌上清,以上清在不同条件下(包括不同感染时间、滴度等)感染sf9细胞以优化融合蛋白在昆虫sf9细胞的表达条件。结果表明,感染72h且感染强度moi为5时是融合蛋白在sf9细胞中高效表达的理想条件。该表达体系的建立及蛋白表达条件的优化,保证了足量GPR81- Gi1α融合蛋白的制备。
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关键词
GPR81
Gi1α
融合蛋白
bac-to-bac杆状病毒表达
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职称材料
注射用银杏达莫的安全性评价
被引量:
4
2
作者
何晓静
黄琳仪
刘玉兰
《中国实验方剂学杂志》
CAS
2006年第8期52-55,共4页
目的:评价国产注射用银杏达莫的安全性.方法:将注射用银杏达莫配成适当浓度,观察豚鼠静脉注射后有无过敏反应、家兔静脉注射有无血管刺激性及热原反应、体外溶血试验中是否具有溶血和血球凝集作用,小鼠静脉注射的急性毒性.结果:豚鼠静...
目的:评价国产注射用银杏达莫的安全性.方法:将注射用银杏达莫配成适当浓度,观察豚鼠静脉注射后有无过敏反应、家兔静脉注射有无血管刺激性及热原反应、体外溶血试验中是否具有溶血和血球凝集作用,小鼠静脉注射的急性毒性.结果:豚鼠静脉注射银杏达莫无过敏反应,家兔静脉注射银杏达莫无血管刺激性及热原反应,体外溶血试验无溶血和血球凝集作用,小鼠静脉给药测的LD50及95%的可信限为138.2mg·kg-1和118.5mg·kg-1~158.0mg·kg-1.结论:注射用银杏达莫可供静脉注射试用给药.
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关键词
注射用银杏达莫
安全性评价
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职称材料
α-酮戊二酸钠对CHO-hGPCRc细胞内游离钙离子浓度的影响
3
作者
黄琳仪
朱欣凯
+3 位作者
韩春光
吴芳明
王琼
刘永学
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2007年第1期39-41,共3页
目的:研究α-酮戊二酸钠对CHO-hGPCRc细胞内钙离子浓度的影响,并分析其变化的原因,从功能上进一步鉴定人源G蛋白偶联受体hGPCR c表达细胞的可靠性。方法:将重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hGPCRc转染入CHO-K1细胞,经G418(800μg/m l)作用7~10...
目的:研究α-酮戊二酸钠对CHO-hGPCRc细胞内钙离子浓度的影响,并分析其变化的原因,从功能上进一步鉴定人源G蛋白偶联受体hGPCR c表达细胞的可靠性。方法:将重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hGPCRc转染入CHO-K1细胞,经G418(800μg/m l)作用7~10 d,挑选、扩增阳性克隆,得到CHO-hGPCR c细胞,再以RT-PCR检测所得细胞内hGPCRc mRNA的表达;然后用不同浓度的α-酮戊二酸钠诱导该细胞,通过激光扫描共聚焦显微镜观察F luo-3标记细胞内钙离子变化,以及细胞外钙离子对其影响。结果:(1)RT-PCR结果表明,所得CHO-hGPCR c细胞能够稳定表达hGPCR c的mRNA;(2)α-酮戊二酸钠可引起细胞内钙离子浓度的变化,表现为钙波动幅度明显增加,并呈浓度依赖性;(3)α-酮戊二酸钠引起的细胞内钙波动,不是细胞外钙离子内流所致,而是细胞内钙库动员的结果。结论:α-酮戊二酸钠为hGPCRc的特异性配基,CHO-hGPCRc细胞能够稳定表达具有功能活性的hGPCRc受体,为进一步开展hGPCRc研究奠定了基础。
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关键词
hGPCRc
α-酮戊二酸钠
钙离子
CHO—hGPCRc
转染
质粒
原文传递
链脲佐菌素诱发糖尿病性肾病大鼠模型的特点
被引量:
1
4
作者
朱欣凯
黄琳仪
+3 位作者
黄锐
韩春光
王琼
刘永学
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2009年第2期141-143,共3页
目的:建立糖尿病性肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型,观察DN发生发展过程中大鼠肾脏相关功能及结构的变化特点。方法:二级Wistar雄性大鼠60只,体质量180~220g,分为2组:正常对照组和模型组各30只。模型组大鼠一次性腹腔...
目的:建立糖尿病性肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型,观察DN发生发展过程中大鼠肾脏相关功能及结构的变化特点。方法:二级Wistar雄性大鼠60只,体质量180~220g,分为2组:正常对照组和模型组各30只。模型组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65mg/kg),正常对照组注射等量的枸橼酸缓冲溶液。在注射后第6、10、12、16和32周,分别动态监测大鼠的体质量、血糖、24h尿蛋白和肌酐、肾脏质量及病理改变等。结果:随着病程的发展,模型组大鼠持续高血糖,体质量明显降低,24h尿蛋白、尿蛋白/尿肌酐比值则逐渐升高,肾脏明显肥大,而且肾小球和肾小管病变在第10周开始出现,之后病变程度逐渐加重、病变范围不断扩大,表现出较为典型的DN变化特点,诸如肾小球系膜增厚、细胞外基质增生及肾小管间质损伤等。结论:STZ可成功诱导大鼠持续性高糖血症,后者的进一步发展,又可引起大鼠肾脏功能受损和形态改变。高糖血症持续12周后,DN大鼠模型的明显特征开始显现。
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关键词
链脲佐菌素
糖尿病性肾病
大鼠
细胞外基质
高血糖症
原文传递
题名
人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化
被引量:
1
1
作者
吴芳明
韩春光
彭明丽
黄琳仪
王琼
朱欣凯
刘永学
机构
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
江西中医学院中药系
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008年第S1期149-154,共6页
基金
国家自然科学基金(NO.30171096)
“十五”全军医药卫生基金(No.01MB056)资助项目
文摘
旨在建立获得融合蛋白GPR81-Gi1α的方法和最优条件。采用RT-PCR从人胚胎肾及大脑组织总RNA中分别扩增孤儿G蛋白偶联受体GPR81和Gi1α的完整表达序列(分别为1 041bp和1 065bp),并构建各自的重组质粒pcDNA3.1(+)-GPR81及pcDNA3.1(+)-Gi1α,再以重组质粒为模板,运用重叠延伸PCR法扩增得到融合基因GPR81-Gi1α,测序无误后将融合基因与pFASTBac1重组得重组质粒pFASTBac1-GPR81-Gi1α,而后转化DH10Bac,使该融合基因重组质粒发生特异性的转座和病毒重组,获得杆状病毒表达穿梭质粒pBacmid-GPR81- Ci1α,再将该重组杆粒转染昆虫sf9细胞,获得含杆状病毒的细胞分泌上清,以上清在不同条件下(包括不同感染时间、滴度等)感染sf9细胞以优化融合蛋白在昆虫sf9细胞的表达条件。结果表明,感染72h且感染强度moi为5时是融合蛋白在sf9细胞中高效表达的理想条件。该表达体系的建立及蛋白表达条件的优化,保证了足量GPR81- Gi1α融合蛋白的制备。
关键词
GPR81
Gi1α
融合蛋白
bac-to-bac杆状病毒表达
Keywords
Human GPR81
Gi1α
Fusion protein
Bac-to-Bac baculovirus expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
注射用银杏达莫的安全性评价
被引量:
4
2
作者
何晓静
黄琳仪
刘玉兰
机构
中国医科大学附属第二医院药剂科
沈阳药科大学药学院
出处
《中国实验方剂学杂志》
CAS
2006年第8期52-55,共4页
文摘
目的:评价国产注射用银杏达莫的安全性.方法:将注射用银杏达莫配成适当浓度,观察豚鼠静脉注射后有无过敏反应、家兔静脉注射有无血管刺激性及热原反应、体外溶血试验中是否具有溶血和血球凝集作用,小鼠静脉注射的急性毒性.结果:豚鼠静脉注射银杏达莫无过敏反应,家兔静脉注射银杏达莫无血管刺激性及热原反应,体外溶血试验无溶血和血球凝集作用,小鼠静脉给药测的LD50及95%的可信限为138.2mg·kg-1和118.5mg·kg-1~158.0mg·kg-1.结论:注射用银杏达莫可供静脉注射试用给药.
关键词
注射用银杏达莫
安全性评价
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
α-酮戊二酸钠对CHO-hGPCRc细胞内游离钙离子浓度的影响
3
作者
黄琳仪
朱欣凯
韩春光
吴芳明
王琼
刘永学
机构
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
出处
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2007年第1期39-41,共3页
文摘
目的:研究α-酮戊二酸钠对CHO-hGPCRc细胞内钙离子浓度的影响,并分析其变化的原因,从功能上进一步鉴定人源G蛋白偶联受体hGPCR c表达细胞的可靠性。方法:将重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hGPCRc转染入CHO-K1细胞,经G418(800μg/m l)作用7~10 d,挑选、扩增阳性克隆,得到CHO-hGPCR c细胞,再以RT-PCR检测所得细胞内hGPCRc mRNA的表达;然后用不同浓度的α-酮戊二酸钠诱导该细胞,通过激光扫描共聚焦显微镜观察F luo-3标记细胞内钙离子变化,以及细胞外钙离子对其影响。结果:(1)RT-PCR结果表明,所得CHO-hGPCR c细胞能够稳定表达hGPCR c的mRNA;(2)α-酮戊二酸钠可引起细胞内钙离子浓度的变化,表现为钙波动幅度明显增加,并呈浓度依赖性;(3)α-酮戊二酸钠引起的细胞内钙波动,不是细胞外钙离子内流所致,而是细胞内钙库动员的结果。结论:α-酮戊二酸钠为hGPCRc的特异性配基,CHO-hGPCRc细胞能够稳定表达具有功能活性的hGPCRc受体,为进一步开展hGPCRc研究奠定了基础。
关键词
hGPCRc
α-酮戊二酸钠
钙离子
CHO—hGPCRc
转染
质粒
Keywords
hGPCRc
α-ketoglutarate sodium
Ca^2+
CHO-hGPCRc
transfection
plasraids
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
原文传递
题名
链脲佐菌素诱发糖尿病性肾病大鼠模型的特点
被引量:
1
4
作者
朱欣凯
黄琳仪
黄锐
韩春光
王琼
刘永学
机构
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
江西中医学院
出处
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2009年第2期141-143,共3页
基金
北京市自然科学基金资助项目(No.7072058)
文摘
目的:建立糖尿病性肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型,观察DN发生发展过程中大鼠肾脏相关功能及结构的变化特点。方法:二级Wistar雄性大鼠60只,体质量180~220g,分为2组:正常对照组和模型组各30只。模型组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65mg/kg),正常对照组注射等量的枸橼酸缓冲溶液。在注射后第6、10、12、16和32周,分别动态监测大鼠的体质量、血糖、24h尿蛋白和肌酐、肾脏质量及病理改变等。结果:随着病程的发展,模型组大鼠持续高血糖,体质量明显降低,24h尿蛋白、尿蛋白/尿肌酐比值则逐渐升高,肾脏明显肥大,而且肾小球和肾小管病变在第10周开始出现,之后病变程度逐渐加重、病变范围不断扩大,表现出较为典型的DN变化特点,诸如肾小球系膜增厚、细胞外基质增生及肾小管间质损伤等。结论:STZ可成功诱导大鼠持续性高糖血症,后者的进一步发展,又可引起大鼠肾脏功能受损和形态改变。高糖血症持续12周后,DN大鼠模型的明显特征开始显现。
关键词
链脲佐菌素
糖尿病性肾病
大鼠
细胞外基质
高血糖症
Keywords
streptozotocin
diabetic nephropathy
rat
extracellular matrix
hyperglycemia
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化
吴芳明
韩春光
彭明丽
黄琳仪
王琼
朱欣凯
刘永学
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2008
1
下载PDF
职称材料
2
注射用银杏达莫的安全性评价
何晓静
黄琳仪
刘玉兰
《中国实验方剂学杂志》
CAS
2006
4
下载PDF
职称材料
3
α-酮戊二酸钠对CHO-hGPCRc细胞内游离钙离子浓度的影响
黄琳仪
朱欣凯
韩春光
吴芳明
王琼
刘永学
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2007
0
原文传递
4
链脲佐菌素诱发糖尿病性肾病大鼠模型的特点
朱欣凯
黄琳仪
黄锐
韩春光
王琼
刘永学
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2009
1
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