大肠埃希菌JM109表面抗原Ag43基因敲除与鉴定

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作者 黄用豪 赵焕阁 +3 位作者 周松森 林映莹 谭光宏 黄风迎 《重庆医学》 CAS 北大核心 2015年第31期4330-4332,共3页

目的敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43(Ag43)基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体(RNP)基因序列,然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K-C... 目的敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43(Ag43)基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体(RNP)基因序列,然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K-C中,获得Ag43特异的重组RNP质粒pACD4K-Ag43。最后将pACD4K-Ag43转化JM109,经过IPTG诱导表达将Ⅱ组内含子插入Ag43特异的部位。结果通过软件分析发现插入Ⅱ组内含子的最佳位点位于碱基1 812和1 913之间,琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的突变Ⅱ组内含子RNP基因序列分子量大小和预期值(350bp)相一致,用NheⅠ和HindⅢ二种酶切分析重组质粒pACD4K-Ag43结果和预期值相符,PCR扩增相应产物和基因测序显示Ⅱ组内含子特异地插入Ag43基因碱基序列的1 812/1 913位点。结论成功地将大肠埃希菌JM109中的基因敲除,为更进一步深入研究Ag43基因的功能和将其作为制备重组Ag43嵌合蛋白的宿主菌奠定了基础。 展开更多

关键词 抗原Ag43 基因敲除 细菌表面表达 Ⅱ组内含子 表达系统

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Ag43/GFP嵌合表达质粒的构建及其在大肠杆菌表面的表达

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作者 黄用豪 赵焕阁 +3 位作者 周松林 林映莹 谭光宏 黄风迎 《广东医学》 CAS 北大核心 2015年第4期517-521,共5页

目的构建大肠杆菌抗原Ag43(p ETAg43')以及Ag43和绿色荧光蛋白(GFP)(p ETAg43'/GFP)的重组表达质粒,了解p ETAg43'/GFP是否能够将GFP表达于细菌表面。方法用PCR扩增获得Ag43大部分基因序列(Ag43'),同时用酶切方法从质粒... 目的构建大肠杆菌抗原Ag43(p ETAg43')以及Ag43和绿色荧光蛋白(GFP)(p ETAg43'/GFP)的重组表达质粒,了解p ETAg43'/GFP是否能够将GFP表达于细菌表面。方法用PCR扩增获得Ag43大部分基因序列(Ag43'),同时用酶切方法从质粒p EGFP-C1切取GFP基因序列,首先将Ag43'基因序列插入表达质粒p ET-22b中,获得重组质粒p ETAg43',然后再将GFP基因序列插入p ETAg43'获得质粒p ETAg43'/GFP。将重组质粒p ETAg43'/GFP转化Ag43基因缺失的菌株JM109(△Ag43),用荧光显微镜和SDS-PAGE了解是否能将GFP表达于细菌表面,同时了解加热是否能够直接获得Ag43'/GFP的嵌合重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的Ag43'和GFP基因序列分子量大小与预期值相一致,酶切分析重组质粒p ETAg43'和p ETAg43'/GFP结果与预期值相符,基因测序显示质粒p ETAg43'和p ETAg43'/GFP的基因序列和阅读框架均准确无误。质粒p ETAg43'/GFP经诱导后可以将Ag43'/GFP嵌合蛋白表达于大肠杆菌JM109(△Ag43)的表面,55℃加热50 min是提取Ag43'/GFP嵌合蛋白的最佳条件。结论成功构建了能够将外源蛋白GFP表达于细菌表面的重组表达载体,在大肠杆菌表面有效表达并加热提取获得了嵌合重组蛋白Ag43'/GFP,为制备其他自身抗原分子的Ag43嵌合蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 抗原Ag43 绿色荧光蛋白 嵌合重组蛋白质 重组表达质粒 细菌表面表达

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弓形虫ROP5基因真核表达载体的构建及其免疫保护性的研究 被引量：10

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作者 赵焕阁 王华 +5 位作者 黄用豪 周松林 郭峻莉 黄凤迎 林映莹 谭光宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期947-950,共4页

目的构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应。方法克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotti... 目的构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应。方法克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定。将45只小鼠随机均分为3组,分别为PBS组、空质粒组、pcDNA3.1-ROP5组,每2w肌注免疫(100μg/只)1次,共3次,于免疫前及每次免疫前1d和末次免疫后2w收集小鼠血清,用间接ELISA法检测血清抗弓形虫的IgG。各组小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子1 000个/每鼠,观察小鼠受攻击感染后的存活时间。结果真核表达载体构建成功,Western blotting分析结果显示,重组质粒pcDNA3.1-ROP5能在Hela细胞表达,蛋白相对分子质量为61kDa。pcDNA3.1-ROP5末次免疫后血清中IgG水平显著高于其他组,pcDNA-ROP5免疫的小鼠与对照组相比,实验组小鼠产生了明显的体液免疫应答。攻击感染试验中,实验组的小鼠比对照组的存活时间有明显延长。结论构建的真核表达重组质粒pcDNA-ROP5对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。 展开更多

关键词 弓形虫 ROP5 真核表达质粒 免疫保护

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弓形虫复合基因疫苗pcSAG1-ROP5诱导小鼠免疫应答的研究 被引量：7

4

作者 赵焕阁 范志刚 +4 位作者 黄风迎 黄用豪 周松林 林映莹 谭光宏 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-5,共5页

目的观察弓形虫复合基因疫苗pcSAGl-ROP5免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法构建弓形虫重组真核表达质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5，分别通过PCR、酶切和测序鉴定后，转染人宫颈癌细胞（HeLa细胞），蛋白印迹（Westernblotting）分析重... 目的观察弓形虫复合基因疫苗pcSAGl-ROP5免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法构建弓形虫重组真核表达质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5，分别通过PCR、酶切和测序鉴定后，转染人宫颈癌细胞（HeLa细胞），蛋白印迹（Westernblotting）分析重组蛋白的体外表达情况。70只昆明小鼠随机均分为5组（每组14只），分别为pc-SAGl组、pcROP5组、pcSAGl-ROP5组、空质粒组和空白对照组。重组质粒组每次每只肌注100μg重组质粒，每2周免疫1次，共3次。空质粒组和空白对照组分别注射等量的空质粒和PBS。于每次免疫前和末次免疫后2周眼眶采血。制备血清。采用ELISA法检测pcSAGl-ROP5组小鼠末次免疫后2周的血清与重组蛋白SAGl、ROP5和SAGl-ROP5结合的效价，以及5组小鼠的各次血清中抗弓形虫抗体IgG水平。末次免疫后3周，每组小鼠取10只腹腔接种10s弓形虫速殖子，观察生存时间。末次免疫后4周，采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中r干扰素（IFN-r）和白细胞介素4（IL-4）的水平。结果重组真核表达质粒构建成功。Westernblotting分析结果显示，重组质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5均能在HeLa细胞中表达，重组蛋白的相对分子质量（尬）分别为31000、57000和88000。pcSAGl-ROP5组小鼠血清与重组蛋白SAGl、ROP5和SAGl-ROP5结合的效价分别为1：320、1：160和1：2560。3个重组质粒组小鼠血清抗弓形虫IgG抗体水平随着免疫次数的增加和时间的延长逐渐升高，末次免疫后2周，pcSAGl-ROP5组小鼠血清IgG抗体水平（0．612±0．031）显著高于其他各组（P〈0．05）。攻击感染后，pcSAGl-ROP5组小鼠的平均存活时间为（288±7）h，较pc—SAGl组和pcROP5组分别延长了48h和96h（P〈0．05）。末次免疫后4周，pcSAGl-ROP5组小鼠脾细胞培养上清中IFN-1水平[（908．52±6．31）pg／m1]显著高于其他各组（P〈0．05），各组的IL-4水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论与弓形虫单基因疫苗pcSAGl和pcROP5相比，复合基因疫苗pcSAGl-ROP5所诱导的抗弓形虫IgG抗体和IFN-1水平较高，攻击感染后存活时间延长。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 复合基因疫苗 SAG1-ROP5

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一株银杏内生真菌菌株的抑菌活性成分研究 被引量：7

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作者 周松林 陈双林 +3 位作者 谭光宏 王华 黄用豪 陈凡 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2010年第2期193-196,共4页

从银杏叶柄分离筛选到具抗菌活性的内生真菌Colletotrichum.SP NTB-2菌株,利用硅胶柱色谱、制备高效液相色谱等方法在其发酵产物中分离到抗枯草芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌等具有广谱抑菌活性的化合物,经MS、NMR等波谱数据确认该活性成分... 从银杏叶柄分离筛选到具抗菌活性的内生真菌Colletotrichum.SP NTB-2菌株,利用硅胶柱色谱、制备高效液相色谱等方法在其发酵产物中分离到抗枯草芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌等具有广谱抑菌活性的化合物,经MS、NMR等波谱数据确认该活性成分为芹菜素-8-C-葡萄糖苷(apigenin-8-C-β-D-glucopyranoside),该化合物首次从真菌中分离得到。 展开更多

关键词 内生真菌 银杏 芹菜素-8-C-葡萄糖苷

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FITC标记葡聚糖粘附定量测定肿瘤组织血管密度 被引量：3

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作者 谭光宏 黄风迎 +3 位作者 王华 黄用豪 林映莹 黎岳南 《海南医学院学报》 CAS 2007年第5期409-413,共5页

目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dex... 目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dextran注射入小鼠体内,然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒,取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时,将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心,取上清检测荧光强度,分析二者之间是否存在直线相关关系。结果:免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应,用FITC-dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果,直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC-dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系(r=0.962,P<0.01)。结论:和藻酸盐包被试验相比,FITC-dextran测定肿瘤组织血管相对密度是一种简单有效的量化测定肿瘤组织血管生成水平的方法。 展开更多

关键词 肿瘤 血管 动物模型 藻酸盐包被肿瘤细胞试验

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16S rRNA测序鉴定一株感染实验小鼠的表皮葡萄球菌 被引量：3

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作者 林映莹 蒙秋平 +3 位作者 谭光宏 黄用豪 赵焕阁 黄风迎 《海南医学院学报》 CAS 2012年第8期1013-1015,1018,共4页

目的:应用16SrRNA测序及序列分析方法来鉴定一株来自实验室饲养小鼠的细菌。方法:对可疑小鼠的血液进行细菌培养,革兰氏染色观察细菌菌株的表型,PCR扩增菌株16SrRNA并进行测序,将测序序列与GenBank数据库的菌株序列进行进化树和基因距... 目的:应用16SrRNA测序及序列分析方法来鉴定一株来自实验室饲养小鼠的细菌。方法:对可疑小鼠的血液进行细菌培养,革兰氏染色观察细菌菌株的表型,PCR扩增菌株16SrRNA并进行测序,将测序序列与GenBank数据库的菌株序列进行进化树和基因距离分析。结果:本研究鉴定的菌株为革兰氏阳性表皮葡萄球菌。结论:16SrRNA基因测序鉴定细菌的方法适用于非专业研究人员;实验动物也可能含有病原体,进行动物实验时要有防护措施。 展开更多

关键词 表皮葡萄球菌 16S RRNA 基因序列分析

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弓形虫ROP5基因与基因佐剂IL-12对小鼠免疫保护性 被引量：2

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作者 赵焕阁 林映莹 +5 位作者 黄用豪 黄风迎 周松林 刘中娟 谭光宏 韦祎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期486-489,共4页

目的观察弓形虫ROP5基因疫苗和基因免疫佐剂IL-12共免疫对昆明小鼠所诱导的免疫保护性。方法大量制备重组质粒pcROP5和pcmIL-12,以100μg的剂量同时免疫昆明小鼠,PBS组和pcDNA3.1空质粒组作为对照。用ELISA法测定免疫鼠血清中特异性抗体... 目的观察弓形虫ROP5基因疫苗和基因免疫佐剂IL-12共免疫对昆明小鼠所诱导的免疫保护性。方法大量制备重组质粒pcROP5和pcmIL-12,以100μg的剂量同时免疫昆明小鼠,PBS组和pcDNA3.1空质粒组作为对照。用ELISA法测定免疫鼠血清中特异性抗体IgG、IgG亚型的表达水平及细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,MTT法测定淋巴细胞转化率,观察小鼠受攻击感染弓形虫后的存活时间。结果质粒pcROP5和pcmIL-12共免疫小鼠3次后,与pcROP5质粒单独免疫组和对照组相比,IL-12基因佐剂的共免疫提高了免疫鼠血清中特异性抗体IgG及IgG亚型IgG2a的表达水平,提高了细胞因子IFN-γ的含量,增加了淋巴细胞的转化率,但IgG1和IL-4的表达水平变化不大;攻击感染后,质粒pcROP5和pc-mIL-12共免疫组小鼠存活时间显著延长。结论弓形虫ROP5基因与基因佐剂pcmIL-12共免疫能增强对小鼠的免疫保护性。 展开更多

关键词 DNA疫苗 弓形虫抗原ROP5 基因佐剂pcmIL-12 免疫应答

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GRIM-19的表达与膀胱癌组织临床特征的相关性研究 被引量：2

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作者 彭晓晖 梁培育 +8 位作者 欧善际 李浩勇 翁阳 许海波 颜毅 王声兴 黄用豪 符津山 陈松 《海南医学院学报》 CAS 2013年第10期1372-1374,共3页

目的:探讨细胞GRIM-19在膀胱癌组织中的表达及与病理分级和临床分期之间的关系。方法:采用Westernblot方法分别检测50例膀胱癌患者膀胱癌组织、癌旁组织及38例正常膀胱组织中GRIM-19的表达情况,进行分析上述指标与膀胱癌病理分级和临床... 目的:探讨细胞GRIM-19在膀胱癌组织中的表达及与病理分级和临床分期之间的关系。方法:采用Westernblot方法分别检测50例膀胱癌患者膀胱癌组织、癌旁组织及38例正常膀胱组织中GRIM-19的表达情况,进行分析上述指标与膀胱癌病理分级和临床分期的关系。结果:显示GRIM-19膀胱癌、癌旁组织中的表达与正常膀胱组织比较,差异有统计学意义(P<0.01),膀胱癌、癌旁组织中的表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌、癌旁组织中的表达:临床分级,Ⅰ级逐渐向Ⅲ级下降,差异具有统计学意义(P<0.01);临床分期,T2～T4高于Tis～T1,差异具有统计学意义(P<0.01);是否转移,转移比未转移的表达量低,差异具有统计学意义(P<0.01)。GRIM-19蛋白在病理分级、临床分期及中是否转移的表达情况,均呈正相关。结论:GRIM-19可以作为判定膀胱癌的预后的一个标准。 展开更多

关键词 膀胱癌 GRIM-19基因 病理分级 临床分期

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膀胱癌组织中GRIM-19及其靶基因产物STAT3的表达及其相关性的研究 被引量：2

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作者 彭晓晖 梁培育 +8 位作者 欧善际 李浩勇 翁阳 许海波 颜毅 王声兴 黄用豪 符津山 陈松 《海南医学院学报》 CAS 2013年第9期1201-1203,1207,共4页

目的:研究GRIM-19及其靶基因产物STAT3在膀胱癌组织中的表达情况及其相关性。方法:采用Westernblot方法分别检测50例膀胱癌患者膀胱癌、癌旁组织及正常膀胱组织中GRIM-19及其靶基因产物STAT3的表达情况。结果:显示GRIM-19、STAT3膀胱癌... 目的:研究GRIM-19及其靶基因产物STAT3在膀胱癌组织中的表达情况及其相关性。方法:采用Westernblot方法分别检测50例膀胱癌患者膀胱癌、癌旁组织及正常膀胱组织中GRIM-19及其靶基因产物STAT3的表达情况。结果:显示GRIM-19、STAT3膀胱癌、癌旁组织中的表达与正常膀胱组织比较差异有统计学意义(P<0.01),膀胱癌、癌旁组织中的表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。GRIM-19、STAT3膀胱癌、癌旁组织中的表达呈负相关。结论:GRIM-19、STAT3在膀胱癌、癌旁组织及正常膀胱组织均表达,二者表达在膀胱癌、癌旁组织及正常膀胱组织中有差异,GRIM-19、STAT3可以作为膀胱癌的早期诊断及判定预后的指标。 展开更多

关键词 膀胱癌 GRIM-19基因 靶基因产物STAT3

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羊膜及羊膜来源细胞应用于组织再生工程的研究进展 被引量：1

11

作者 王华 谭光宏 +4 位作者 黄风迎 黄用豪 周松林 赵焕阁 林映莹 《海南医学院学报》 CAS 2009年第9期1176-1178,共3页

关键词 羊膜 羊膜来源细胞 分化潜能 组织再生 综述文献

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小鼠VCAM-1真核表达质粒的构建及表达 被引量：1

12

作者 谭光宏 宿静梅 +3 位作者 黄风迎 王华 黄用豪 林映莹 《海南医学院学报》 CAS 2007年第5期405-408,共4页

目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达。方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表... 目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达。方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染CHO细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质。结果:成功扩增了小鼠VCAM-1全长基因cDNA,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,West-ern Blot方法证实该质粒能在CHO真核细胞中正确表达目的蛋白。结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的真核表达质粒载体,为进一步研究VCAM-1的新功能和免疫治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 血管细胞粘附分子-1 真核表达 质粒 基因工程

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不同纯度的有机溶剂对2株肿瘤细胞的抑制作用 被引量：1

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作者 周松林 林映莹 +1 位作者 赵焕阁 黄用豪 《中国当代医药》 2015年第5期144-145,148,共3页

目的给脂溶性的抗肿瘤药物筛选高溶解性、低细胞毒性的有机溶剂。方法采用MTT法,按照不同纯度,对8种能溶于水的有机溶剂,测试其对黑色素瘤B16、人胃癌细胞SGC-7901两种细胞株的细胞毒性。结果不同有机溶剂对不同细胞株的抑制皆不同,甲... 目的给脂溶性的抗肿瘤药物筛选高溶解性、低细胞毒性的有机溶剂。方法采用MTT法,按照不同纯度,对8种能溶于水的有机溶剂,测试其对黑色素瘤B16、人胃癌细胞SGC-7901两种细胞株的细胞毒性。结果不同有机溶剂对不同细胞株的抑制皆不同,甲醇与丙酮对两种细胞株的毒性相对都较弱,纯度越高的有机溶剂对细胞毒害越小。结论光谱纯的甲醇与丙酮是脂溶性抗肿瘤药物有效的有机溶剂。 展开更多

关键词 MTT 细胞毒性 有机溶剂 纯度

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以Endoglin为靶点的新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

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作者 李灵 黄风迎 +5 位作者 黄用豪 周松林 郭峻莉 赵焕阁 谭光宏 王华 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期2761-2763,共3页

目的观察抗Endoglin(END)单克隆抗体与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)为交联剂制备END-ADM偶联物,MTT法测定其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠肝癌H22细胞皮下移... 目的观察抗Endoglin(END)单克隆抗体与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)为交联剂制备END-ADM偶联物,MTT法测定其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察其在体内抑制肿瘤生长的效果。结果等细胞毒性剂量的偶联物END-ADM与ADM对体外培养的肝癌细胞杀伤作用差异不大。动物实验中ADM 0.4mg/kg对H22肝癌的抑制率为29.33%,而等细胞毒性剂量的END-ADM偶联物的抑瘤率达到86.67%,抑制作用显著增强(P<0.05),与ADM相比,偶联物还可显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间(P<0.05)。结论 END-ADM偶联物对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的抑制作用比ADM显著增强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。 展开更多

关键词 阿霉素 Endoglin单抗 免疫偶联物 抗肿瘤

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2种开发重组疫苗的原核抗原展示系统

15

作者 陈凡 谭光宏 +3 位作者 黄风迎 周松林 王华 黄用豪 《海南医学院学报》 CAS 2008年第3期299-302,共4页

关键词 疫苗 合成 抗原 综述文献

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小型化免疫偶联物Fab-ADM抗肿瘤机制的初步探讨

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作者 李灵 黄风迎 +3 位作者 黄幼生 郭峻莉 黄用豪 王华 《海南医学院学报》 CAS 2012年第2期155-157,161,共4页

目的:探讨小型化的免疫偶联物Fab-ADM的抗肿瘤机制。方法:建立小鼠肝癌细胞H22及小鼠黑色素瘤细胞B16的皮下移植瘤模型,分别予以生理盐水及ADM、Fab-ADM治疗,治疗结束后取肿瘤组织制备石蜡切片进行HE染色,并通过CD34进行免疫组织化学染... 目的:探讨小型化的免疫偶联物Fab-ADM的抗肿瘤机制。方法:建立小鼠肝癌细胞H22及小鼠黑色素瘤细胞B16的皮下移植瘤模型,分别予以生理盐水及ADM、Fab-ADM治疗,治疗结束后取肿瘤组织制备石蜡切片进行HE染色,并通过CD34进行免疫组织化学染色以计数肿瘤微血管。结果:在2种动物模型中,Fab-ADM治疗组小鼠瘤体内可见肿瘤细胞的大片状坏死,微血管密度明显减少,与生理盐水对照组及ADM治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Fab-ADM偶联物较游离ADM具有更强的肿瘤抑制作用,其可显著抑制肿瘤微血管密度的增加,继而引起肿瘤细胞的大面积坏死。 展开更多

关键词 Fab-ADM偶联物 微血管密度 抗肿瘤机制

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鱼泡草总黄酮治疗特应性皮炎的研究

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作者 周松林 赵焕阁 +1 位作者 林映莹 黄用豪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期673-676,共4页

目的研究海南鱼泡草总黄酮(total flavonoids of Jussiaea repens,TFJ)对小鼠慢性皮炎的治疗作用。方法用不同浓度二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)反复刺激昆明小鼠皮肤致敏后,灌胃给药不同剂量的TFJ。再通过H&E染色检... 目的研究海南鱼泡草总黄酮(total flavonoids of Jussiaea repens,TFJ)对小鼠慢性皮炎的治疗作用。方法用不同浓度二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)反复刺激昆明小鼠皮肤致敏后,灌胃给药不同剂量的TFJ。再通过H&E染色检测皮肤组织病理学变化,ELISA检测血清总Ig E和IL-2含量变化,RT-PCR检测皮肤细胞因子Eotaxin-1/CCL11和LARC/CCL20的m RNA表达。结果通过TFJ和氢化可的松治疗后,TFJ能减轻鼠耳肿胀度,减少肥大细胞数及浸润炎症细胞数,并且能降低小鼠血清中升高的Ig E水平、升高血清中降低的IL-2水平,同时降低趋化因子配体基因Eotaxin-1/CCL11和LARC/CCL20的m RNA表达。结论 TFJ能有效抑制小鼠慢性皮炎。 展开更多

关键词 特应性皮炎 鱼泡草总黄酮 小鼠

原文传递

小鼠IL-5真核表达质粒的构建和体外表达

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作者 谭光宏 王才春 +4 位作者 黄风迎 王华 黄用豪 林映莹 宿静梅 《中国热带医学》 CAS 2007年第8期1289-1290,1339,共3页

目的构建小鼠白细胞介素-5(IL-5)基因真核表达质粒,了解该质粒在真核细胞COS细胞中有效表达情况。方法以含有小鼠IL-5基因的克隆质粒pORF9-mIL-5为模板,通过PCR扩增小鼠IL-5全段基因,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入pcDNA3·1... 目的构建小鼠白细胞介素-5(IL-5)基因真核表达质粒,了解该质粒在真核细胞COS细胞中有效表达情况。方法以含有小鼠IL-5基因的克隆质粒pORF9-mIL-5为模板,通过PCR扩增小鼠IL-5全段基因,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入pcDNA3·1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mIL-5,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染COS细胞,用WesternBlot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质。结果成功扩增了小鼠IL-5全长基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mIL-5,Westernblot方法证实该质粒能在COS真核细胞中有效表达小鼠IL-5目的蛋白。结论成功构建了小鼠IL-5基因的真核表达质粒载体,为进一步研究IL-5的新功能和免疫基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 白细胞介素-5 真核表达 质粒 基因工程

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不同生境具抑菌作用的海洋真菌筛选

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作者 周松林 林映莹 +1 位作者 赵唤阁 黄用豪 《安徽农业科学》 CAS 2015年第5期4-6,共3页

[目的]为了测定海口沿海海域不同生境的海洋真菌抑菌状况。[方法]从海口西海岸沿线、南渡江入海口以及演丰红树林3个生境分离到162株海洋真菌,通过药敏纸片法测定海洋真菌代谢产物对4株病原细菌的抑菌活性。[结果]82.72%的海洋真菌具有... [目的]为了测定海口沿海海域不同生境的海洋真菌抑菌状况。[方法]从海口西海岸沿线、南渡江入海口以及演丰红树林3个生境分离到162株海洋真菌,通过药敏纸片法测定海洋真菌代谢产物对4株病原细菌的抑菌活性。[结果]82.72%的海洋真菌具有不同程度的抑菌作用,其中分离自红树林生境的海洋具有抑菌作用的程度最高,西海岸生境分离的真菌次之,入海口生境分离的海洋真菌具有抑菌作用的概率相对最低。[结论]从不同生境分离到的海洋真菌,其抑菌效果也不一样。因此,当需要筛选某种活性的海洋真菌时,可到具有较易筛选出该活性的生境中筛选。 展开更多

关键词 海口 海洋真菌 生境 抑菌活性 药敏纸片

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对虾白斑综合症病毒PCR检测体系的优化研究

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作者 黄用豪 程伟 刘志昕 《华南热带农业大学学报》 2006年第2期6-9,共4页

通过改进WSSVPCR模板制备方法、引物的筛选、PCR反应的优化,建立稳定的WSSVPCR检测体系。结果表明,该体系具有稳定、快速、灵敏等特点,可用于生产中对WSSV的检测。

关键词 PCR 对虾 白斑综合症病毒(WSSV) 检测

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