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广西壮族自治区猪圆环病毒2型(PCV2)分子流行病学调查及遗传变异分析
1
作者 黄美芝 何奇松 +12 位作者 冯淑萍 龙凤 尹彦文 莫胜兰 胡丽萍 黄胜斌 韩银华 周庆安 蓝惠华 韦海娜 魏园园 甘雨 施开创 《畜牧与饲料科学》 2024年第2期109-115,共7页
[目的]了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在广西壮族自治区的流行情况及遗传特征。[方法]采用PCR方法对广西壮族自治区不同地区送检的病料进行PCV2检测和全基因组序列扩增。应用BioEdit、Mega 7.0、RDP 5和SimPlot(ver... [目的]了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在广西壮族自治区的流行情况及遗传特征。[方法]采用PCR方法对广西壮族自治区不同地区送检的病料进行PCV2检测和全基因组序列扩增。应用BioEdit、Mega 7.0、RDP 5和SimPlot(ver 3.5.1)软件对获得的24株PCV2毒株全基因组序列进行核苷酸序列相似性、遗传变异和重组分析,并对Cap蛋白氨基酸序列变异位点进行分析。[结果]PCV2广西株基因组大小均为1768 bp;核苷酸序列相似性分析显示,广西株与参考株PCV1~PCV4的相似性在44.7%~99.7%,与PCV3亲缘性最低;广西株为PCV2b和PCV2d型,PCV2d流行最为广泛;全基因组序列重组分析显示,部分广西株存在重组事件;与疫苗株AY686764-PCV2b和HM641752-PCV2b相比,PCV2广西株的Cap蛋白氨基酸序列共有21个位点发生变异。[结论]PCV2广西流行毒株以PCV2d型为主,部分毒株具有重组现象,部分位点发生独特的氨基酸变异,遗传进化趋势明显。研究结果为广西壮族自治区PCV2的流行病学调查和遗传进化特征分析提供了基本数据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 全基因组 相似性 遗传变异
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广西猪群H1和H3亚型猪流感病毒抗体水平调查 被引量：7
2
作者 黄胜斌 蒙雪琼 +6 位作者 陈义祥 陈芳芳 陆文俊 赵国明 苏凯 屈素杰 刘棋 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第7期42-43,共2页
猪流感（Swine influenza．SI）是由猪流感病毒（Swine influenza virus．SIV）所引起的一种急性呼吸道传染病．一年四季都可发生．但以春秋多发．各种日龄的猪都可感染。单纯的SIV感染表现为发病率高．死亡率低．但常常与其它病原体并... 猪流感（Swine influenza．SI）是由猪流感病毒（Swine influenza virus．SIV）所引起的一种急性呼吸道传染病．一年四季都可发生．但以春秋多发．各种日龄的猪都可感染。单纯的SIV感染表现为发病率高．死亡率低．但常常与其它病原体并发继发感染。临床上主要表现为：咳嗽、流鼻涕、呼吸困难、精神沉郁和发烧，怀孕母猪流产。 展开更多
关键词 猪流感病毒 抗体水平 急性呼吸道传染病 亚型 猪群 广西 继发感染
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广西野鸟H9N2亚型流感病毒的分离与鉴定 被引量：3
3
作者 黄胜斌 蒋家霞 +4 位作者 何奇松 付薇 孙翔翔 马琳 熊毅 《南方农业学报》 CAS CSCD 2011年第5期539-543,共5页
【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增... 【目的】探讨H9N2亚型流感病毒在野鸟中的存在与传播,为广西流感疫情动态监测和防控及人流感预防监测提供重要依据。【方法】采集广西野鸟肺脏组织,将病料接种于9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔进行分离培养,血清学试验鉴定HA和NA亚型,并克隆扩增其HA和NA基因。【结果】该分离株能被H9亚型阳性血清抑制,神经氨酸酶抑制（NI）试验结果将其鉴定为N2亚型,判断该病毒属于H9N2亚型流感病毒,命名为A/wildbird/Guangxi/H2/07,对HA和NA基因进行序列分析,发现与流感病毒H9亚型和N2亚型同源性最高,分别达到82.4%~99.0%和83.1%~99.9%。【结论】H9N2亚型流感病毒已在广西野鸟中存在,该结论为广西流感疫情动态监测和防控提供了重要依据。 展开更多
关键词 野鸟 H9N2亚型流感病毒 分离 鉴定 HA基因 NA基因 广西
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广西隆安县肉用动物弓形虫血清学调查
4
作者 韩银华 蓝惠华 +3 位作者 黄胜斌 周庆安 何丹 何奇松 《特种经济动植物》 2024年第1期5-10,共6页
为了解广西隆安县猪、牛、羊等肉用动物弓形虫感染情况,采用间接血凝试验(IHA)方法,对从广西隆安县雁江乡、城厢乡、那桐乡等10个乡采集的1 160份猪、牛、羊血清进行弓形虫抗体检测,其中猪血清样品480份、牛血清样品460份、羊血清样品22... 为了解广西隆安县猪、牛、羊等肉用动物弓形虫感染情况,采用间接血凝试验(IHA)方法,对从广西隆安县雁江乡、城厢乡、那桐乡等10个乡采集的1 160份猪、牛、羊血清进行弓形虫抗体检测,其中猪血清样品480份、牛血清样品460份、羊血清样品220份。结果表明:1 160份血清样本中有119份弓形虫血清抗体阳性,阳性率为10.3%,其中猪弓形虫血清抗体阳性97份,阳性率为20.2%,牛阳性血清13份,阳性率为2.8%,羊阳性血清9份,阳性率为4.1%,猪阳性率显著高于牛和羊(P<0.05)。表明广西隆安县猪、牛、羊等肉用动物都存在不同程度的弓形虫感染,其中猪感染较严重,需要采取防控措施,尽量避免与犬猫共同饲养,阻断猫科动物及其排泄物对环境如畜舍、草料、水源等的污染,并且定期消毒及驱虫,对已感染弓形虫的急性病例给予口服磺胺嘧啶或甲氧苄氨嘧啶治疗。 展开更多
关键词 弓形虫 肉用动物 血清抗体 阳性率
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γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用 被引量：12
5
作者 徐贤坤 熊毅 +5 位作者 韦达有 黄小武 蓝纪 黄胜斌 马琳 刘棋 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期667-670,共4页
【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况，为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查，共检疫5478头奶牛和1580头奶水... 【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况，为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查，共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头，阳性检出率分别为1.15％和1.08％，总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测，发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应，且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时，先以变态反应检疫牛群，再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断，更有利于牛结核病的检测与净化。 展开更多
关键词 牛结核病 γ-干扰素ELISA 皮内变态反应 流行病学调查 阳性率 广西
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中国“人-猪-禽”基因重排H1N2亚型猪流感病毒全基因克隆及遗传进化的研究 被引量：15
6
作者 陈义祥 蒙雪琼 +7 位作者 刘棋 黄夏 黄胜斌 刘翠权 施开创 郭建刚 陈芳芳 胡丽萍 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期466-472,共7页
【目的】为了研究2006年从广西病猪肺组织中分离的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/Swine/Guangxi/13/2006(H1N2)(Sw/GX/13/06)的遗传学特性和8个基因的来源。【方法】运用RT-PCR方法对其全基因进行了克隆并运用分子生物学软件对其基因序列进... 【目的】为了研究2006年从广西病猪肺组织中分离的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/Swine/Guangxi/13/2006(H1N2)(Sw/GX/13/06)的遗传学特性和8个基因的来源。【方法】运用RT-PCR方法对其全基因进行了克隆并运用分子生物学软件对其基因序列进行了遗传进化分析。【结果】血凝素(HA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M)和非结构蛋白(NS)基因来源于猪古典H1N1亚型流感病毒;神经氨酸酶(NA)和聚合酶蛋白(PB1)基因来源于人的H3N2亚型流感病毒;聚合酶蛋白(PA)和聚合酶蛋白(PB2)基因来自于禽流感病毒。【结论】可见Sw/GX/13/06是一株"人-猪-禽"三源基因重排H1N2亚型SIV,且与美国(1999?2001年)和韩国(2002年)分离到该型病毒的有明显的亲缘关系。据我们所知,这是中国首次报道含有禽流感病毒基因片段的重排H1N2SIV,该病毒是否对养猪业和人类公共卫生健康具有潜在的威胁,有待于进一步研究。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H1N2亚型 基因重排 遗传进化
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2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析 被引量：4
7
作者 胡巧云 袁小宁 +8 位作者 熊毅 何奇松 黄胜斌 孙翔翔 吴军 颜健华 冯淑萍 李军 郭建刚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1310-1314,共5页
【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离... 【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以Ssp A基因的重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】Ssp A基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大。在IPTG诱导下,含有重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C的菌株表达出3段融合蛋白,其中,Ssp N和Ssp C重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而Ssp M重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:Ssp N重组蛋白66 k D,Ssp M重组蛋白65 k D,Ssp C重组蛋白32 k D。Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以Ssp N重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应。【结论】2型猪链球菌Ssp A基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的Ssp N蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 SspA基因 分段表达 免疫原性
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两种奶牛结核病检测方法的比较 被引量：14
8
作者 徐贤坤 黄小武 +5 位作者 蓝纪 黄胜斌 熊毅 刘棋 韦正吉 黄益泓 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第2期29-33,共5页
本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性... 本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性为53.33%,特异性为70.49%,符合率为67.11%。本研究证实单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在非特异性强等缺点,易造成假阳性牛的误杀;用抗原特异性IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性,该方法在临床上有重要应用价值。 展开更多
关键词 奶牛结核病 皮内变态反应 抗原特异性IFN-γ试验
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A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达、纯化及鉴定 被引量：3
9
作者 颜健华 何奇松 +7 位作者 蒋家霞 冯淑萍 黄胜斌 韦达有 易春华 许瑞胜 梁晟 熊毅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期301-305,共5页
【目的】通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持。【方法】以含A型FMDV VP1基因的重组质粒p MD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩... 【目的】通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持。【方法】以含A型FMDV VP1基因的重组质粒p MD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩增A型FMDV的VP1基因,构建表达质粒p ET-32a-VP1和p GEX-6p-1-VP1,然后转入感受态细胞E.coli BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白。【结果】诱导表达获得的VP1融合蛋白主要以包涵体形式存在,分别经His·Bind和GST·Bind柱层析纯化,SDS-PAGE分析结果表明融合蛋白纯度较高;Western blotting检测分析发现,VP1融合蛋白能与豚鼠抗A型FMDV阳性血清发生特异性结合,但不与豚鼠抗O型和Asia1型FMDV阳性血清反应。【结论】经原核表达及纯化获得的A型FMDV VP1融合蛋白具有良好的特异性和抗原性,可用于易感动物的免疫及血清抗体筛查。 展开更多
关键词 A型FMDV VP1蛋白 原核表达 纯化 鉴定
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基因重排H1N2亚型猪流感病毒的分离鉴定和生物学特性的研究 被引量：4
10
作者 蒙雪琼 刘棋 +6 位作者 陈义祥 黄胜斌 刘翠权 郭建刚 郑敏 赵国明 陈芳芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期669-674,共6页
本研究对2005年～2006年广西和海南省疑似猪流感(SI)病猪的组织病料进行了病毒分离,并对分离毒株进行了亚型鉴定和生物学特性的研究。结果显示:分离的3株流感病毒均为H1N2亚型猪流感病毒(SIV),能凝集多种动物的红细胞,但凝集谱与以往报... 本研究对2005年～2006年广西和海南省疑似猪流感(SI)病猪的组织病料进行了病毒分离,并对分离毒株进行了亚型鉴定和生物学特性的研究。结果显示:分离的3株流感病毒均为H1N2亚型猪流感病毒(SIV),能凝集多种动物的红细胞,但凝集谱与以往报道略有不同;为热不稳定型病毒;在电镜下可观察到典型流感病毒粒子。动物试验显示:小白鼠、大白鼠和家兔对分离毒株不敏感,而豚鼠较敏感,能较好地复制出流感症状和病理变化;本体试验动物仅有轻微的临床症状,但能检测到抗体升高的变化,并能从鼻腔和上呼吸道检测和分离到SIV。核苷酸同源性分析显示:分离毒株Sw/GX/17/05、Sw/GX/13/06和Sw/HN/1/05的血凝素(HA)基因分别与基因重排H1N2亚型SIVA/Swine/Indiana9K035/99、A/SW/MN/23124-T/01和A/swine/Zhejiang/1/04的核苷酸同源性最高,分别达97.4%、97.0%和95.7%;神经氨酸酶(NA)基因均与基因重排H1N2亚型流感病毒A/Turkey/MO/24093/99的核苷酸同源性最高,达97.2%～98.0%。核苷酸同源性分析进一步证实了分离毒株为基因重排H1N2亚型SIV。 展开更多
关键词 H1N2亚型猪流感病毒 分离和鉴定 生物学特性
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广西鹅α干扰素基因的克隆与序列分析 被引量：3
11
作者 付薇 蒋家霞 +6 位作者 孙翔翔 易春华 何奇松 马琳 徐贤坤 黄胜斌 熊毅 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第12期1335-1338,共4页
根据GenBank上已发表的东北白鹅α干扰素(IFN-α)基因(AY524422)序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR从经鹅副粘病毒(GPMV)刺激培养的鹅外周血淋巴细胞中克隆获得广西鹅IFN-α基因,将其连接pMD18-T载体、转化DH5α感受态细胞后进行序列分... 根据GenBank上已发表的东北白鹅α干扰素(IFN-α)基因(AY524422)序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR从经鹅副粘病毒(GPMV)刺激培养的鹅外周血淋巴细胞中克隆获得广西鹅IFN-α基因,将其连接pMD18-T载体、转化DH5α感受态细胞后进行序列分析。结果表明,广西鹅IFN-α基因完整的开放阅读框大小为576 bp,共编码192个氨基酸残基,其推导的氨基酸中有7个半胱氨酸残基和2个潜在的糖基化结合位点(NDT和NHT)。与GenBank上已公布的其他IFN-α基因进行同源性比较分析,发现广西鹅IFN-α基因与东北白鹅的同源性最高(核苷酸同源性为98.3%、氨基酸同源性为96.4%),与鸡、牛、猪、鼠、犬、人等的同源性较低。说明IFN具有种属特异性,且亲缘关系越近同源性越高,这与物种之间的进化亲缘关系一致。 展开更多
关键词 鹅 Α干扰素 基因克隆 序列分析 广西
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猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：4
12
作者 马琳 付薇 +6 位作者 何奇松 徐贤坤 易春华 孙翔翔 蒋家霞 黄胜斌 熊毅 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第11期1223-1225,共3页
根据GenBank中5′端非编码区的靶序列设计了用于TaqMan荧光定量PCR的1对引物及TaqMan探针,以猪瘟活疫苗病毒为模板,在常规PCR的基础上优化了TaqMan荧光定量PCR反应条件,建立了猪瘟病毒(CSFV)TaqMan荧光定量PCR检测方法。其敏感性和特异... 根据GenBank中5′端非编码区的靶序列设计了用于TaqMan荧光定量PCR的1对引物及TaqMan探针,以猪瘟活疫苗病毒为模板,在常规PCR的基础上优化了TaqMan荧光定量PCR反应条件,建立了猪瘟病毒(CSFV)TaqMan荧光定量PCR检测方法。其敏感性和特异性试验结果表明,所建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法对CSFV具有很高的特异性,其检测灵敏度可达5.03×10-2μg/μL。说明TaqMan荧光定量PCR适用于CSFV的快速检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 TaqMan荧光定量PCR TAQMAN探针
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A型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA检测方法的初步建立 被引量：3
13
作者 颜健华 何奇松 +7 位作者 蒋家霞 冯淑萍 黄胜斌 胡巧云 易春华 许瑞胜 梁晟 熊毅 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期2268-2272,共5页
用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀... 用纯化的融合蛋白p GEX-6p-1-VP1作为包被抗原,4E12单抗为检测抗体与待检血清竞争固相抗原,建立了单抗竞争ELISA方法来检测口蹄疫A型抗体,并进行了反应条件的优化,确定阴阳临界值。结果表明,抗原最适包被浓度为0.625μg/m L,待检血清稀释度为1∶2,单抗最大稀释度为1∶400,酶标抗体工作浓度为1∶5000,封闭液、待检血清和单抗作用时间分别为60、60、45 min;阴阳性判断抑制率(PI)≥30%为阳性。与液相阻断ELISA检测试剂盒比对,符合率为84.8%。试验表明,建立的单抗竞争ELISA检测方法具有特异性强、稳定性好等优点,可用于口蹄疫A型血清抗体的检测,这为口蹄疫A型免疫抗体水平检测、疫情监控及流行病学调查提供了技术平台。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 VP1蛋白 竞争ELISA
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基因芯片技术在细菌学研究中的应用进展 被引量：5
14
作者 付建 黄胜斌 +4 位作者 陈磊 何丹 胡晓静 熊毅 刘棋 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第7期1765-1768,共4页
基因芯片技术的诞生是基于人类基因组计划的成果,是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的新技术。能够广泛应用于基因表达分析、突变检测、核酸多态性分析、基因测序和药物筛选等几乎所有的生物学研究领域。综述了基... 基因芯片技术的诞生是基于人类基因组计划的成果,是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的新技术。能够广泛应用于基因表达分析、突变检测、核酸多态性分析、基因测序和药物筛选等几乎所有的生物学研究领域。综述了基因芯片技术的发展历史、原理、检测细菌的程序、在细菌学研究中的应用、存在的问题及其应用前景。 展开更多
关键词 基因芯片 细菌学 应用
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O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定 被引量：1
15
作者 何奇松 陈磊 +7 位作者 颜健华 许瑞胜 易春华 韦达有 冯淑萍 黄胜斌 梁晟 熊毅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期472-477,共6页
【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因... 【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因重组质粒p MD18-T-O-VP1为模板,通过特异性引物扩增并回收目的基因,构建重组质粒p ET-32a-VP1和p GEX-6p-1-VP1,然后转入大肠杆菌BL211(DE3)中诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定。【结果】O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达,表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯度较高,且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。【结论】表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发。 展开更多
关键词 O型FMDV VP1基因 多表位基因 原核表达 纯化 鉴定
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鹅源H9N2亚型禽流感病毒PB2和PB1基因序列分析 被引量：1
16
作者 付薇 覃芳芸 +7 位作者 马琳 徐贤坤 黄胜斌 易春华 孙翔翔 何奇松 蒋家霞 熊毅 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期49-53,共5页
采用RT-PCR方法对1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒(GS/GX/01/07)RNA聚合酶基因PB2和PB1分别进行了扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1开放阅读框(ORF)分别由2 280和2 277个碱基组成,分别编码759和... 采用RT-PCR方法对1株鹅源H9N2亚型禽流感病毒(GS/GX/01/07)RNA聚合酶基因PB2和PB1分别进行了扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与分析。结果表明,该株病毒的PB2、PB1开放阅读框(ORF)分别由2 280和2 277个碱基组成,分别编码759和758个氨基酸。经同源性和系统进化树分析,该毒株RNA聚合酶基因PB2和PB1与H9N2亚型欧亚谱系中的第2亚群代表株QA/HK/G1/97的核苷酸和氨基酸同源性在95%以上,亲缘关系较近。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 聚合酶基因 序列分析
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2011—2013年广西地区猪瘟抗体监测及免疫效果分析 被引量：4
17
作者 马琳 郭建刚 +6 位作者 覃芳芸 胡巧云 黄胜斌 胡丽萍 杨荣 熊毅 冯淑萍 《现代农业科技》 2014年第5期281-281,285,共2页
为了解广西地区猪瘟的免疫抗体水平，采用正向间接血凝试验对采集自2011-2013年广西14个地市不同规模猪场的20271份血清样品进行了猪瘟抗体检测。结果表明，广西各地的猪瘟抗体水平存在一定差异，抗体合格率为64.4%~97.5%，平均合格率为... 为了解广西地区猪瘟的免疫抗体水平，采用正向间接血凝试验对采集自2011-2013年广西14个地市不同规模猪场的20271份血清样品进行了猪瘟抗体检测。结果表明，广西各地的猪瘟抗体水平存在一定差异，抗体合格率为64.4%~97.5%，平均合格率为84.9%，大型规模场和中小规模场的猪瘟抗体合格率较稳定，且保持在较高水平，分别为96.0%和87.5%；农村散养户和屠宰场/市场的抗体合格率相对较低，分别为82.7%和70.5%。 展开更多
关键词 猪瘟 抗体监测 免疫效果 广西地区 2011-2013年
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基因缺失鉴别ELISA试验在种猪场控制与净化猪伪狂犬病的应用 被引量：1
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作者 覃芳芸 黄夏 +4 位作者 陆文俊 胡杰 磨龙春 黄胜斌 赵国明 《现代畜牧兽医》 2007年第11期10-11,共2页
猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒（PRV）引起的一种急性、高度接触性传染病，以发热、奇痒及脑脊髓炎为主要症状。该病毒可引起各种家畜及野生动物发病，猪是该病原的传播者和自然宿主，临床表现为母猪流产、死产、产弱仔猪等繁殖障碍症状，... 猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒（PRV）引起的一种急性、高度接触性传染病，以发热、奇痒及脑脊髓炎为主要症状。该病毒可引起各种家畜及野生动物发病，猪是该病原的传播者和自然宿主，临床表现为母猪流产、死产、产弱仔猪等繁殖障碍症状，新生仔猪发热、出现神经症状、死亡率较高。近年来，随着猪伪狂犬病疫苗特别是基因缺失疫苗的使用，猪伪狂犬病的发病率与死亡率大大减少，但目前该病仍然是威胁广西壮族自治区养猪业发展的重要疫病。2005～2006年我们应用gpI基因缺失鉴别ELISA试验对广西4个种猪场进行了猪伪狂犬病的检测，并清除带毒猪，做了控制与净化猪伪狂犬病的试验，达到了预期的净化效果。现报告如下。 展开更多
关键词 ELISA试验 基因缺失疫苗 猪伪狂犬病 净化效果 种猪场 应用 控制 鉴别
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猪脑心肌炎病毒感染对iNOS mRNA转录水平的影响
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作者 施开创 覃芳芸 +3 位作者 陆文俊 屈素洁 黄胜斌 李军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期686-691,共6页
为研究iNOS在猪脑心肌炎病毒(EMCV)致病机制中的作用,本研究将猪源EMCV GXLC株人工感染小鼠、仔猪,观察临床症状和病理变化,检测心、脑组织中iNOS mRNA转录水平。试验结果表明,小鼠和仔猪感染EMCV后均出现明显的临床症状、剖检及组织病... 为研究iNOS在猪脑心肌炎病毒(EMCV)致病机制中的作用,本研究将猪源EMCV GXLC株人工感染小鼠、仔猪,观察临床症状和病理变化,检测心、脑组织中iNOS mRNA转录水平。试验结果表明,小鼠和仔猪感染EMCV后均出现明显的临床症状、剖检及组织病理学变化显示心、脑组织的病理炎症分值显著增加;心、脑组织中的iNOS mRNA转录水平显著上调,并且转录水平上调的峰值与感染小鼠、仔猪出现明显临床症状、严重病理损害及小鼠死亡高峰存在明显的时间相关性,与心、脑组织的病理炎症分值成线性正相关。表明组织中iNOS的过量表达与感染动物的发病和死亡密切相关,iNOS在EMCV致病机制中发挥重要作用。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 INOS mRNA转录水平 致病机制
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O型口蹄疫病毒VP1蛋白竞争ELISA诊断方法的初步建立
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作者 何奇松 陈磊 +9 位作者 颜健华 冯淑萍 黄胜斌 胡巧云 梁晟 易春华 许瑞胜 韦达有 兰宗宝 熊毅 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第1期1-6,共6页
利用表达的重组融合蛋白pGEX-6P-1-VP1作为抗原,用PET-32a-VP1蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为FMDV阳性血清的竞争抗体,建立了检测FMDV抗体的竞争ELISA,并进行了条件优化,利用统计学方法计算竞争ELISA的阳性临界值。结果显示,重组蛋白... 利用表达的重组融合蛋白pGEX-6P-1-VP1作为抗原,用PET-32a-VP1蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为FMDV阳性血清的竞争抗体,建立了检测FMDV抗体的竞争ELISA,并进行了条件优化,利用统计学方法计算竞争ELISA的阳性临界值。结果显示,重组蛋白抗原的最适包被质量浓度为1μg·mL^(-1),待检血清、酶标抗体和高免血清的最佳稀释度分别为1∶40、1∶2000和1∶500;与液相阻断ELISA试剂盒相比较,该方法的敏感性为91.3%,特异性为95.1%,符合率为96.7%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、重复性好,可用于O型FMDV血清抗体水平的检测。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 口蹄疫病毒抗体 竞争ELISA
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