目的测定我国深圳地区献血者中的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染者自然清除和病毒血症,即自然康复与慢性感染者比率及其人群特征,为丙型肝炎防治研究提供数据。方法对深圳献血者中抗-HCV初筛阳性的血清标本采用2种EIA方法进...目的测定我国深圳地区献血者中的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染者自然清除和病毒血症,即自然康复与慢性感染者比率及其人群特征,为丙型肝炎防治研究提供数据。方法对深圳献血者中抗-HCV初筛阳性的血清标本采用2种EIA方法进行抗体再测定,以定量PCR方法测定病毒载量,并采用巢式PCR对核酸进行确认,进而将标本分为3种HCV感染状态,即病毒自然清除(RNA-/Ab+)、病毒血症(RNA+/Ab+)和假阳性(RNA-/Ab-),通过统计学方法分析3种感染状态献血者在临床信息(性别、年龄)、ALT、抗-HCV的差异。HCV RNA阳性标本通过分析5'-NCR序列进行基因分型。结果 152份初筛抗-HCV阳性的标本中,病毒自然清除标本45份、病毒血症51份、假阳性56份。50份HCV定量PCR阳性标本病毒载量范围从[(12.6～2.43)×106]IU/ml(中位值2.54×104IU/ml)。36份进行基因分型的标本包括47.2%基因1型、5.6%基因2型、19.4%基因3型和27.8%基因6型。慢性感染组标本的年龄及抗-HCV水平(S/CO值)显著高于病毒自然清除和假阳性组(χ2=7.812,P<0.05;χ2=90.865,P<0.01)。结论深圳地区献血者HCV感染病毒自然清除率约为46.9%。HCV基因型中1型为主要,6型也占有较高比例。年龄小、女性献血者更易于自然清除病毒。病毒血症即慢性感染者HCV抗体水平显著升高,其在HCV自然康复过程中的作用还有待进一步研究。展开更多
文摘目的测定我国深圳地区献血者中的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染者自然清除和病毒血症,即自然康复与慢性感染者比率及其人群特征,为丙型肝炎防治研究提供数据。方法对深圳献血者中抗-HCV初筛阳性的血清标本采用2种EIA方法进行抗体再测定,以定量PCR方法测定病毒载量,并采用巢式PCR对核酸进行确认,进而将标本分为3种HCV感染状态,即病毒自然清除(RNA-/Ab+)、病毒血症(RNA+/Ab+)和假阳性(RNA-/Ab-),通过统计学方法分析3种感染状态献血者在临床信息(性别、年龄)、ALT、抗-HCV的差异。HCV RNA阳性标本通过分析5'-NCR序列进行基因分型。结果 152份初筛抗-HCV阳性的标本中,病毒自然清除标本45份、病毒血症51份、假阳性56份。50份HCV定量PCR阳性标本病毒载量范围从[(12.6～2.43)×106]IU/ml(中位值2.54×104IU/ml)。36份进行基因分型的标本包括47.2%基因1型、5.6%基因2型、19.4%基因3型和27.8%基因6型。慢性感染组标本的年龄及抗-HCV水平(S/CO值)显著高于病毒自然清除和假阳性组(χ2=7.812,P<0.05;χ2=90.865,P<0.01)。结论深圳地区献血者HCV感染病毒自然清除率约为46.9%。HCV基因型中1型为主要,6型也占有较高比例。年龄小、女性献血者更易于自然清除病毒。病毒血症即慢性感染者HCV抗体水平显著升高,其在HCV自然康复过程中的作用还有待进一步研究。
文摘根据GenBank中发表的西尼罗病毒(WNV)E domainⅢ基因序列设计1对引物,用PCR方法扩增domainⅢ基因片段,回收目的基因片段定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5,构建重组表达载体pMT-DⅢ。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-DⅢ。提取S2-DⅢ细胞的基因组DNA,用PCR方法检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,研究成功构建了重组表达载体pMT-DⅢ,转染细胞经12mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达WNV E do-mainⅢ蛋白的果蝇S2细胞株。
