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终点平衡尿酸酶法与动力学尿酸酶法联用测定尿酸
1
作者 龙高波 杨宪峰 +3 位作者 刘红博 蒲军 杨晓兰 廖飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1431-1435,共5页
目的：考察终点平衡尿酸酶法和动力学尿酸酶法联用测定尿酸的可行性和线性范围。方法：在25℃下1.2 ml硼酸钠缓冲液（0.20 mol/L,pH 9.2）中用293 nm吸收跟踪尿酸酶反应;测定加入5μl尿酸酶液前反应体系吸收,加入5μl苛求芽孢杆菌尿酸... 目的：考察终点平衡尿酸酶法和动力学尿酸酶法联用测定尿酸的可行性和线性范围。方法：在25℃下1.2 ml硼酸钠缓冲液（0.20 mol/L,pH 9.2）中用293 nm吸收跟踪尿酸酶反应;测定加入5μl尿酸酶液前反应体系吸收,加入5μl苛求芽孢杆菌尿酸酶液后记录5.0 min内吸收变化。终点平衡法以尿酸酶反应前吸收为起点而尿酸完全氧化后吸收为本底,二者之差为尿酸净吸收且同尿酸浓度成正比;动力学法分析尿酸酶反应过程预测本底。分析模拟尿酸酶反应曲线,探索从终点平衡法转换为动力学法的尿酸浓度界限值;实验测定联用法的可行性和线性范围。结果：分析40 U/L苛求芽孢杆菌尿酸酶模拟反应曲线,发现两种方法转换的尿酸浓度界限值可为5.0μmol/L;分析实验反应曲线证实此界限值可行。在40 U/L尿酸酶时终点平衡法测量范围1.0~6.0μmol/L;联用法测量范围1.5~60μmol/L且对30μmol/L黄嘌呤有抗性;在5.0μmol/L以下变异系数小于10%而5.0μmol/L以上可小于5%。结论：这种联用法测定尿酸成本更低、线性范围更宽且效率高。 展开更多
关键词 尿酸 动力学尿酸酶法 终点平衡尿酸酶法 线性范围 联用法
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联用酶反应过程分析法和初速度法测定谷胱甘肽-S-转硫酶活性
2
作者 廖娟 赵利娜 +3 位作者 龙高波 杨晓兰 蒲军 廖飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1436-1439,共4页
目的:考察联用谷胱甘肽-S-转硫酶(Glutathione-S-transferase,GST)产物抑制反应过程分析法和初速度法测定GST活性的有效性。方法:阳离子交换层析纯化猪肝碱性GST同工酶。在25℃,用1.0 mmol/L 2,4-二硝基氯苯(1-Chloro-2,4-dinitrobenzen... 目的:考察联用谷胱甘肽-S-转硫酶(Glutathione-S-transferase,GST)产物抑制反应过程分析法和初速度法测定GST活性的有效性。方法:阳离子交换层析纯化猪肝碱性GST同工酶。在25℃,用1.0 mmol/L 2,4-二硝基氯苯(1-Chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和50.0 mol/L谷胱甘肽(Glutathione,GSH)跟踪产物在340 nm吸收的变化。5.0 min内底物消耗比例低于设定界限时测定初速度;否则,用以反应时间为自变量且包含产物抑制的积分速度方程分析反应过程确定最大反应速度,再换算成优化GSH浓度下的初速度。结果:优化GST产物抑制常数后,只要被分析数据中GSH消耗55%以上,所得最大反应速度对被分析数据范围不敏感。用48 mol/L GSH将最大反应速度换算成初速度,联用策略所得GST活性的线性下限略高于初速度法,而线性上限提高4倍。结论:用积分速度方程分析酶反应过程并优化最大速度换算成初速度所需底物浓度,联用策略测定酶活性线性范围更宽,有望成为测定酶活性的新方法。 展开更多
关键词 谷胱甘肽-S-转硫酶 积分速度方程 反应曲线 联用策略 线性范围
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融合标签谷胱甘肽S-转硫酶高亲和配体的设计与筛选 被引量：3
3
作者 杨宪峰 张灵 +3 位作者 杨晓兰 龙高波 张奕 廖飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期791-795,共5页
目的:设计与筛选融合标签血吸虫谷胱甘肽S-转硫酶(Glutathione S-transferase,GST)的高亲和配体。方法:将原核融合表达载体pGST-MOLUC转入大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导GST标签表达,用Glutathione Sepharose 4B亲和纯化此... 目的:设计与筛选融合标签血吸虫谷胱甘肽S-转硫酶(Glutathione S-transferase,GST)的高亲和配体。方法:将原核融合表达载体pGST-MOLUC转入大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导GST标签表达,用Glutathione Sepharose 4B亲和纯化此标签GST。初速度法测定GST对底物1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的Km;测定GST产物S-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(GS-DNB)、3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸及3者对应的对称双酰丁二胺对标签GST的抑制作用。结果:纯化标签GST对GSH和CDNB顺序结合且Km都高于0.10mmol/L;GS-DNB相对CDNB的竞争性抑制常数约5μmol/L,相对GSH的非竞争性抑制常数约33μmol/L。3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸对此GST抑制常数都大于0.20 mmol/L;N,N’-双依他尼酰-1,4-丁二胺和N,N’-双对丁基苯甲酰-1,4-丁二胺都为GST相对GSH的强竞争性抑制,抑制常数分别为31 nmol/L和(0.61±0.43)μmol/L(n=3)。结论:将标签GST低亲和力芳香羧酸用柔性短链连成对称结构,可获得结合于单个活性中心的高亲和力标签GST抑制剂。 展开更多
关键词 谷胱甘肽S-转硫酶 亲和力 抑制剂 配体
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2种聚乙二醇不饱和酸单酯共聚合包被Fe_3O_4制备磁性微球及其表征 被引量：1
4
作者 刘冬 龙高波 +4 位作者 杨晓兰 蒲军 赵华 廖娟 廖飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期135-138,共4页
目的:用两种聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)不饱和酸单酯经自由基共聚包被纳米Fe3O4磁芯制备磁性微球,考察其功能化后特异性和非特异性结合作用。方法:水解沉淀法制备纳米Fe3O4磁芯;用PEG-350单甲醚丙烯酸酯和PEG-1540单顺丁烯酸单... 目的:用两种聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)不饱和酸单酯经自由基共聚包被纳米Fe3O4磁芯制备磁性微球,考察其功能化后特异性和非特异性结合作用。方法:水解沉淀法制备纳米Fe3O4磁芯;用PEG-350单甲醚丙烯酸酯和PEG-1540单顺丁烯酸单酯为单体,在正庚烷-水组成的油包水体系自由基共聚制备磁性微球;将微球表面来自PEG-1540的羟基经甲磺酸酯活化、连接乙二胺后再用活化生物素修饰。透射电镜观察其外貌;测定与碱性磷酸酶标记链亲和素(Streptavidin labeled byalkaline phosphate,AP-SAV)的特异性结合、与4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯等的非特异性结合。结果:所得Fe3O4粒径60 nm左右,生物素修饰后粒径接近200 nm。此磁性微球可从混合蛋白中选择性分离碱性磷酸酶酶标记的链亲和素,结合容量约51 ng蛋白/g磁性微球;4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯在浓度很低时同此磁性微球的结合低于检测限,在浓度高达64μmol/L时仍无显著结合。结论:用两种PEG不饱和酸酯共聚包被Fe3O4可制备表面亲水磁性微球,功能化后有特异相互作用且非特异性作用很弱,但还需提高此磁性微球功能化后的特异性结合容量。 展开更多
关键词 磁性微球 聚乙二醇不饱和酸酯 自由基共聚合 功能化 疏水性
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用4-硝基-1-萘磷酸酯为底物测定碱性磷酸酶活性
5
作者 党济政 刘红博 +5 位作者 杨宪锋 杨晓兰 龙高波 李元丽 蒲军 廖飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期413-416,共4页
目的：合成4-硝基-1-萘磷酸酯（4-nitro-1-naphthyl phosphate,NNPP）为显色底物测定牛小肠黏膜碱性磷酸酶（alka-line phosphatase,ALP）。方法：4-硝基-1-萘酚（4-nitronaphthol,4-NNP）与三氯氧磷反应,经硅胶柱纯化制得NNPP;检测产... 目的：合成4-硝基-1-萘磷酸酯（4-nitro-1-naphthyl phosphate,NNPP）为显色底物测定牛小肠黏膜碱性磷酸酶（alka-line phosphatase,ALP）。方法：4-硝基-1-萘酚（4-nitronaphthol,4-NNP）与三氯氧磷反应,经硅胶柱纯化制得NNPP;检测产物吸收跟踪水解过程测定初速度,双倒数法测定米氏常数（Michaelis-Menten constant,Km）。结果：ALP水解NNPP产物最大差吸收峰接近460 nm,等吸收波长接近405 nm。与p-硝基苯酚相比,在pH 6.0~7.0间4-NNP消光系数为其3倍以上,在pH 7.0以上为其2倍以上。ALP对NNPP的Km约12μmol/L而p-硝基苯基磷酸酯的Km约35μmol/L,产物磷酸相对NNPP的竞争性抑制常数接近20μmol/L。ALP催化NNPP水解效率接近水解p-硝基苯基磷酸酯的40%。结论：NNPP可用于测定ALP活性,且有望与作用于p-硝基苯酚类显色底物的其它酶联用实现单通道两种酶同步测定。 展开更多
关键词 碱性磷酸酶 4-硝基-1-萘磷酸酯 4-硝基苯基磷酸酯
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如何在小学数学中培养学生核心素养 被引量：2
6
作者 龙高波 《东西南北（教育）》 2018年第9期377-377,共1页
小学数学教学是培育学生数学核心素养的一个关键时期,这个时期的学习和指导,对学生今后学习的发展有着非常重要的作用,尤其是在新课程改革的推动之下,核心素养成为了教育的新热点,也因此受到了越来越多的老师和家长的关注。
关键词 小学数学 核心素养
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高速公路羊蹄甲高位嫁接技术探讨 被引量：1
7
作者 王平恒 龙高波 《中国新技术新产品》 2009年第14期94-94,共1页
阐述了在高速公路两侧对羊蹄甲进行高位嫁接的一种技术方式,即以原来羊蹄甲为砧木,采集红花洋紫荆为接穗进行高位嫁接的技术,取得了较好的生态景观效果,并从嫁接季节、砧木的选择、接穗的准备以及嫁接方法等方面加以介绍,为其它类似植... 阐述了在高速公路两侧对羊蹄甲进行高位嫁接的一种技术方式,即以原来羊蹄甲为砧木,采集红花洋紫荆为接穗进行高位嫁接的技术,取得了较好的生态景观效果,并从嫁接季节、砧木的选择、接穗的准备以及嫁接方法等方面加以介绍,为其它类似植物的嫁接提供了借鉴。 展开更多
关键词 高速公路 羊蹄甲 嫁接 技术研究
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生物分离用超顺磁微米颗粒的特征及制备
8
作者 刘冬 龙高波 《川北医学院学报》 CAS 2019年第4期486-492,共7页
综述分离非细胞成分对超顺磁亚微米颗粒性能特征的要求、常见制备策略及性能表征方法。
关键词 磁分离 超顺磁微米颗粒 非特异吸附 磁响应速度 悬浮稳定性
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