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牛支原体兔体攻毒模型的建立
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作者 武文英 夏青 +8 位作者 胡萌婕 赵逸轩 王琛 张宇豪 郝成武 贺笋 郭爱珍 陈建国 陈颖钰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1268-1277,共10页
牛支原体是引起牛呼吸疾病综合征(bovine respiratory disease, BRD)的重要病原之一,对养牛业造成了不可估量的经济损失。牛支原体对大多数抗生素都具有耐药性,目前没有较好的药物可以进行治疗,因此疫苗免疫是最有效的防控方法。缺乏小... 牛支原体是引起牛呼吸疾病综合征(bovine respiratory disease, BRD)的重要病原之一,对养牛业造成了不可估量的经济损失。牛支原体对大多数抗生素都具有耐药性,目前没有较好的药物可以进行治疗,因此疫苗免疫是最有效的防控方法。缺乏小动物评价模型是牛支原体疫苗研发的重要制约因素之一。建立小动物攻毒模型,为后续疫苗的研究与制备提供一定的研究基础,并降低后续试验的科研成本。为建立牛支原体小动物感染模型,本研究以2月龄日本大耳白兔作为研究对象,分为4组:1)单独攻击HB0801株牛支原体,2)注射地塞米松后攻击HB0801株牛支原体,3)攻击HB0801株牛支原体后注射KLH和巯基乙酸盐培养基;4)空白对照组。通过PCR检测牛支原体排菌情况,检测血清中抗体水平,第31天后取肺制作病理切片。研究结果显示,注射地塞米松后攻击HB0801株牛支原体组的牛支原体检出率和抗体均最高,牛支原体检出率为42.11%,91.67%的动物被检测为抗体阳性。显著高于其它各组。除空白对照组外,其它攻毒组均出现了肺泡壁增厚,巨噬细胞浸润以及肺部不同程度的纤维素性渗出,符合牛支原体导致的间质性肺炎的病变特征。本研究建立了牛支原体HB0801株攻毒日本大耳白兔的感染及评价模型,地塞米松造成免疫抑制后攻毒HB0801株具有最好的造模效果。 展开更多
关键词 牛支原体 动物模型 地塞米松
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阪崎肠杆菌培养上清蛋白引起HepG2肝细胞的基因表达变化
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作者 由淑萍 任立松 +4 位作者 马龙 贺笋 陈泽良 王嵘 刘涛 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2018年第4期258-262,共5页
目的:通过高通量测序法分析阪崎肠杆菌培养上清蛋白引起Hep G2肝细胞的基因表达变化,并探讨阪崎肠杆菌致病作用6的分子机制。方法:采用CAYE培养基培养阪崎肠杆菌,硫酸铵沉淀法及膜透析法分离纯化上清蛋白;分别在1×10~6/mL的HepG2... 目的:通过高通量测序法分析阪崎肠杆菌培养上清蛋白引起Hep G2肝细胞的基因表达变化,并探讨阪崎肠杆菌致病作用6的分子机制。方法:采用CAYE培养基培养阪崎肠杆菌,硫酸铵沉淀法及膜透析法分离纯化上清蛋白;分别在1×10~6/mL的HepG2肝细胞培养液中加入终浓度为1.6μg/mL的上清蛋白稀释液及蒸馏水作为实验组和对照组,提取细菌总RNA;构建文库并运用illumina测序平台测序,分析两组间的基因表达差异,采用Gene Ontology(GO)富集分析和Pathway分析了解差异表达基因的功能;荧光定量PCR(qPCR)验证RPS18、RFC4基因差异表达结果。结果:高通量测序结果显示,与对照组相比,实验组HepG2细胞存在5 120个差异表达基因,其中上调2 155个,下调2 965个;GO富集分析显示差异基因主要参与细胞核分裂、有丝分裂、复制等多个生物学过程,Pathway分析显示差异基因主要与DNA复制、蛋白转运、精氨酸和脯氨酸代谢等有关;qPCR验证结果与高通量测序结果一致。结论:阪崎肠杆菌培养上清蛋白能够引起Hep G2肝细胞RPS18、RFC4等基因的表达变化,并可能与核糖体变化和/或DNA复制与修复有关。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 培养上清 HepG2肝细胞 高通量测序
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布鲁氏菌A19株菌影疫苗的构建及其免疫效果评价
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作者 贺笋 刘梦志 +3 位作者 赵海龙 吴冬玲 刘宝山 何传雨 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期71-77,共7页
为开发一种安全有效的布鲁氏菌疫苗,解决现有A19、S2和M5等弱毒疫苗存在较强毒力可感染人,且无法通过血清学方法将其免疫抗体与野毒感染抗体进行鉴别区分的问题,本试验将含有噬菌体PhiX174裂解酶基因E的质粒转化至A19疫苗株,构建菌影疫... 为开发一种安全有效的布鲁氏菌疫苗,解决现有A19、S2和M5等弱毒疫苗存在较强毒力可感染人,且无法通过血清学方法将其免疫抗体与野毒感染抗体进行鉴别区分的问题,本试验将含有噬菌体PhiX174裂解酶基因E的质粒转化至A19疫苗株,构建菌影疫苗(A19-BG)菌株,并检验其遗传稳定性及对小鼠的安全性、免疫效果和保护效果。结果显示,构建成功的A19-BG菌株传代20代仍稳定,热诱导48 h后可完全灭活,菌体穿孔明显。A19-BG疫苗免疫小鼠7 d后免疫部位无不良反应,14 d后脾脏无可见病理变化,与空白对照组相比脾脏重量无显著差异(P>0.05)。一免和二免后14 d,免疫小鼠的布鲁氏菌抗体、白细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平持续升高,产生了良好的体液和细胞免疫反应。布鲁氏菌2308强毒株攻毒免疫小鼠,免疫保护率可达87.5%,保护效果良好。结果表明,构建的A19-BG疫苗具有良好的稳定性、安全性、免疫效果和保护效果,有望成为一种极具潜力的布鲁氏菌新型疫苗。 展开更多
关键词 菌影疫苗 A19-BG 安全性 免疫效果 保护效果
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Geochronology and geochemistry of the W-Mo-ore-related granitic rocks from eastern Ningzhen,lower Yangtze river belt,eastern China
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作者 Fangyue Wang Yongjie Guo +3 位作者 Haiyang Yan Haiou Gu he sun Can Ge 《Acta Geochimica》 EI CAS CSCD 2022年第2期288-306,共19页
Here we present zircon U–Pb–Hf and wholerock major and trace element studies of eastern Ningzhen W-Mo-ore-related magmatic rocks,Yushan and Longwangshan granitic rocks,to constrain their form timing,magma sources,an... Here we present zircon U–Pb–Hf and wholerock major and trace element studies of eastern Ningzhen W-Mo-ore-related magmatic rocks,Yushan and Longwangshan granitic rocks,to constrain their form timing,magma sources,and tectonic settings.The results showed that the two plutons were formed in the Early Cretaceous with;Pb/;U ages of 107.8±1.2 and 105.2±1.5 Ma(;Pb/;U),respectively.The trapped/residual zircons are mainly distributed in 2.0–2.5 Ga.The two intrusions are characterized by high silicon(68.60–73.99%),high aluminum(13.56–15.02%),high Mg#(47–55),high Sr,Sr/Y,LaN/YN,and low Yb,falling into high Mg#adakitic rock region.The zirconεHf(t)values of the two intrusions range from-24.8 to-13.2,indicating an ancient continental crust in their magma sources.The average Ti-inzircon temperature is 689°C,slightly higher than those of other high-Mg adakitic rocks in the lower Yangtze River belt,but lower than those of high-Mg adakitic rocks in the Southern Tanlu Fault(STLF).Zircon Ce;/Ce;show low oxygen fugacity(LWS-1:3–400,average 92;sample ZYS-4:9–382,average 93).These geochemical features indicate a thickened lower continental crust in the Eastern Ningzhen region in a subduction setting.Comparing the geochemical characteristics of the eastern Ningzhen to the western Ningzhen and other areas in the Lower Yangtze River Metallogenic Belt(LYRMB)and the high-Mg ore-barren adakitic rocks of the STLF,we propose that the magmatic rocks from eastern Ningzhen may be mainly from a thickened lower continental crust that hybridized with a very small part of mantle sources,while the west Ningzhen magmatic rocks may have experienced a higher degree of mantle contaminations in their source.The metallogenic differences between the eastern(W–Mo)and western(Cu–Fe–Pb–Zn)parts of Ningzhen also indicate different proportions of crustal materials in their magma source. 展开更多
关键词 Ancient lower continental crust Paleo-pacific plate High Mg#adaktic rocks Early cretaceous Ningzhen Crustal thickening
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The Safety and Tolerance of Herbal Anti-Angina Drug Compound Danshen Droplet Pill in Healthy Volunteers
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作者 Ying Zhou Yimin Cui +5 位作者 Xia Zhao Yong Huo Zhaohong Nie Min Zhao Zhixin Guo he sun 《Pharmacology & Pharmacy》 2013年第6期490-495,共6页
Background: Compound Salvia Pellet (T89), consisting of Danshen (salvia miltiorrhiza), Sanqi (panax notoginseng), and Borneol (Cinnamomum camphora), has been used worldwide for 14 years for chronic angina treatment. P... Background: Compound Salvia Pellet (T89), consisting of Danshen (salvia miltiorrhiza), Sanqi (panax notoginseng), and Borneol (Cinnamomum camphora), has been used worldwide for 14 years for chronic angina treatment. Purpose: A dose escalation study to determine the maximum tolerance dose (MTD) in Chinese population to support a proposed dose regimen change. Methods: Forty-six participants (age 18 to 45 yrs, male to female ratio = 1:1) were divided into a series of 6 patients cohorts, and sequentially assigned into one of the escalating dose groups, starting from 540 mg, the clinical doses, until 4 out of 6 subjects experience clinical Adverse Events (AEs) or when the pre-defined 3510 mg dose level is reached and completed. All doses were given orally as a single dose 2 hours after breakfast. Adverse events, vital signs, 12-lead ECG, clinical and laboratory parameters and medical evaluation were conducted as outcome measures. Results: Study completed at the highest pre-defined dose level of 3510 mg dose as never had 4/6 of subject experience AEs in any dose levels studied. All participants completed the study and data were included in the safety analysis. The only moderate AE observation (muscle damage) was observed at 2970 mg dose and was recovered without any medical treatment, and all other AEs (ECG, dizziness, muscle damage) were mild and may (5 cases) or may not (9 cases) be related to testing drug and were all self-resolved within 30 min after dose. Conclusion: Given as single oral dose, Compound Salvia Pellet is safe and well-tolerated up to the 3510 mg studied. The MTD value of Compound Salvia Pellet is unknown from this trial and must be higher than 3510 mg, 13 times higher than its current clinical dose. 展开更多
关键词 Compound SALVIA PELLET SAFETY Tolerance Chronic ANGINA Treatment
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Application value of 3D printing assisted pedicle screw placement in the treatment of thoracolumbar spinal fractures
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作者 Zheng-Peng Liu Ya-Hui Wang +5 位作者 Ying Ming Yi-Long Zhang Zhe Li Zhi-Jie sun Jian-Hua Wang he sun 《Journal of Hainan Medical University》 2019年第4期65-69,共5页
Objective:To evaluate the value of 3D printing assisted pedicle screw placement in the treatment of thoracolumbar spinal fractures.Methods: 56 cases of thoracolumbar spinal fractures patients underwent 3D printing ass... Objective:To evaluate the value of 3D printing assisted pedicle screw placement in the treatment of thoracolumbar spinal fractures.Methods: 56 cases of thoracolumbar spinal fractures patients underwent 3D printing assisted pedicle screw placement (study group) and another 56 cases of thoracolumbar spinal fractures patients underwent conventional screw placement (control group) in our department from February 2016 to September 2017 were selected. Then the surgical related indicators, JOA score, the reduction of injured vertebrae and complications were recorded and compared between groups at different time points, including, before operation (T0), postoperative 1mon (T1), postoperative 6mon (T2) and postoperative 12mon (T3).Results: The operation time, intraoperative X-ray fluoroscopy frequency and intraoperative blood loss in the study group were significantly lower than those in the control group (P<0.05), meanwhile the accuracy rate of screw placement was significantly higher than that of the control group (P<0.05). JOA scores at T1, T2 and T3 in both groups were significantly higher than those at T0 (P<0.05), and JOA scores at all postoperative time points in the study group were significantly higher than those in the control group (P<0.05). Compared with T0, the ratio of the anterior and posterior border height of injured vertebrae in the two groups at T2 was significantly increased (P<0.05), while the Cobb Angle of sagittal kyphoid significantly was decreased (P<0.05). Meanwhile, the reduction of injured vertebrae in the study group was significantly better than that the control group at T2 (P<0.05). The incidence of complications in the study group was significantly lower than that in the control group (P<0.05).Conclusion: The application of 3D printing assisted pedicle screw placement in the treatment has the advantages of less injury to patients, good prognosis and high safety, which is worthy of clinical application. 展开更多
关键词 3D printing PEDICLE screw PLACEMENT THORACOLUMBAR SPINE fracture APPLICATION VALUE
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Flexible Polydimethylsiloxane Composite with Multi-Scale Conductive Network for Ultra-Strong Electromagnetic Interference Protection 被引量:4
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作者 Jie Li he sun +5 位作者 Shuang-Qin Yi Kang-Kang Zou Dan Zhang Gan-Ji Zhong Ding-Xiang Yan Zhong-Ming Li 《Nano-Micro Letters》 SCIE EI CAS CSCD 2023年第1期293-306,共14页
Highly conductive polymer composites(CPCs) with excellent mechanical flexibility are ideal materials for designing excellent electromagnetic interference(EMI) shielding materials,which can be used for the electromagne... Highly conductive polymer composites(CPCs) with excellent mechanical flexibility are ideal materials for designing excellent electromagnetic interference(EMI) shielding materials,which can be used for the electromagnetic interference protection of flexible electronic devices.It is extremely urgent to fabricate ultra-strong EMI shielding CPCs with efficient conductive networks.In this paper,a novel silver-plated polylactide short fiber(Ag@PL ASF,AAF) was fabricated and was integrated with carbon nanotubes(CNT) to construct a multi-scale conductive network in polydimethylsiloxane(PDMS) matrix.The multi-scale conductive network endowed the flexible PDMS/AAF/CNT composite with excellent electrical conductivity of 440 S m-1and ultra-strong EMI shielding effectiveness(EMI SE) of up to 113 dB,containing only 5.0 vol% of AAF and 3.0 vol% of CNT(11.1wt% conductive filler content).Due to its excellent flexibility,the composite still showed 94% and 90% retention rates of EMI SE even after subjected to a simulated aging strategy(60℃ for 7 days) and 10,000 bending-releasing cycles.This strategy provides an important guidance for designing excellent EMI shielding materials to protect the workspace,environment and sensitive circuits against radiation for flexible electronic devices. 展开更多
关键词 Flexible conductive polymer composites Silver-plated polylactide short fiber Carbon nanotube Electromagnetic interference shielding Multi-scale conductive network
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2020-2021年新疆地区猪流行性腹泻病毒S基因遗传变异分析 被引量:2
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作者 李媛 张盼 +3 位作者 杜久斌 候凤 贺笋 唐慧芬 《动物医学进展》 北大核心 2023年第5期16-21,共6页
为了解新疆地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,于2020-2021年从新疆地区规模化猪场采集到326份临床仔猪腹泻病料和肠组织,利用RT-PCR方法对PEDV进行检测,选取部分PEDV阳性样品进行S基因全序列的克隆和测序,并对其序列、遗传进... 为了解新疆地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,于2020-2021年从新疆地区规模化猪场采集到326份临床仔猪腹泻病料和肠组织,利用RT-PCR方法对PEDV进行检测,选取部分PEDV阳性样品进行S基因全序列的克隆和测序,并对其序列、遗传进化和抗原表位进行分析。结果显示,326份样品中共有152份样品为PEDV阳性,阳性率为46.6%。选取的11份阳性样品中的PEDV S基因核苷酸(氨基酸)同源性为99.0%~100%(98.2%~99.9%),与GenBank中登录的PEDV参考毒株核苷酸(氨基酸)同源性为92.6%~98.0%(91.2%~97.7%),与经典株CV777核苷酸(氨基酸)同源性为93.1%~93.4%(92.3%~92.7%)。遗传进化分析显示,11份阳性样品均位于GIIa亚群,与中国疫苗株CV777处于不同的分群,说明新疆部分地区PEDV流行株与疫苗毒株CV777亲缘关系较远。序列比对结果显示,11份阳性样品中的PEDV S蛋白均存在氨基酸的插入和缺失,中和表位的COE区域变异较大,这可能会降低常规疫苗的免疫保护作用。结果表明,从分子水平明确了2020-2021年新疆地区PEDV的流行与变异情况,为新疆地区PED的防控提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 遗传变异
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一株区分猪瘟病毒疫苗株和流行株的单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
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作者 刘钟迪 吴梦 +6 位作者 米士江 李俊辉 王遵宝 徐龙飞 贺笋 涂长春 龚文杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期621-627,共7页
为制备可鉴别猪瘟病毒(CSFV)疫苗株(LPC)和流行株的单克隆抗体(MAb),并解析流行株逃逸宿主免疫血清中和抗体的机制,本研究利用猪瘟兔化弱毒疫苗株的E2蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞电融合,利用间接免疫荧光试验(IFA... 为制备可鉴别猪瘟病毒(CSFV)疫苗株(LPC)和流行株的单克隆抗体(MAb),并解析流行株逃逸宿主免疫血清中和抗体的机制,本研究利用猪瘟兔化弱毒疫苗株的E2蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞电融合,利用间接免疫荧光试验(IFA)筛选分泌抗CSFV E2蛋白MAb的杂交瘤细胞,利用IFA和western blot鉴定MAb与猪瘟兔化弱毒疫苗株及其不同基因型流行株或E2蛋白的反应原性以明确MAb的病毒反应谱。结果显示,本研究获得了一株仅与基因1.1和3.1亚型CSFV反应,但不与其他8个亚型流行株或E2蛋白反应的MAb TCH045,表明该MAb能够鉴别CSFV疫苗株和当前优势流行株。本实验进一步点突变E2蛋白后利用western blot对TCH045识别的抗原表位进行鉴定,结果显示,疫苗株E2蛋白的G^(19)、L^(21)、A^(23)、G^(24)和L^(26)突变后,TCH045与突变的E2蛋白不反应,表明这些氨基酸参与组成该MAb识别的抗原表位,其中G^(24)为关键氨基酸残基,而不与TCH045反应的流行株在该位点为E^(24)。此外,TCH045能够中和疫苗株(HCLV株和LPC株),但不能中和当前优势流行株,这可能是流行株逃逸免疫血清被中和的原因之一。综上所述,本研究获得了一株新的能区别CSFV疫苗株和流行株的中和MAb,可以用于疫苗免疫和流行株感染的血清学鉴别诊断技术的研发,初步揭示了CSFV流行株逃逸免疫血清中和的机制,为研发新型猪瘟疫苗提供了重要的科学数据。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 单克隆抗体 反应类型 抗原表位
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布鲁氏菌病温敏凝胶活疫苗(S2株)对羊不同黏膜途径免疫效果的研究 被引量:4
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作者 刘燕 颜成旭 +5 位作者 米吉提·莫合他尔汗 贺笋 何传雨 赵海龙 沈国顺 毛开荣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期646-650,共5页
为了研究布鲁氏菌病温敏凝胶疫苗对羊不同黏膜途径免疫的效果,本研究采用冷溶法制备了用于黏膜免疫的布鲁氏菌病温敏凝胶活疫苗(S2株),将该疫苗以不同黏膜免疫途径(阴道灌注、点眼)、注射免疫途径免疫绵羊,同时以常规S2疫苗作为对照,无... 为了研究布鲁氏菌病温敏凝胶疫苗对羊不同黏膜途径免疫的效果,本研究采用冷溶法制备了用于黏膜免疫的布鲁氏菌病温敏凝胶活疫苗(S2株),将该疫苗以不同黏膜免疫途径(阴道灌注、点眼)、注射免疫途径免疫绵羊,同时以常规S2疫苗作为对照,无菌采集绵羊的免疫部位拭子后培养,通过菌落计数方法计算黏膜免疫部位排菌数,结果显示:凝胶疫苗免疫部位从免疫后第30 min开始停止排菌,常规疫苗的排菌持续到免疫后第2 d。免疫后采集各时间点绵羊血血清,采用微量试管凝集试验(MSAT)和攻菌保护试验分别测定不同免疫途径(阴道灌注、点眼、注射)免疫后产生的抗体水平和保护效果的差异,抗体检测结果显示,黏膜免疫后45 d左右抗体即降至1.50或以下,黏膜免疫后产生的抗体水平明显低于注射免疫产生的抗体,且两种黏膜免疫下降速度均比注射免疫的快;攻菌后的免疫保护结果显示,在对照组出菌指数为4.76情况下,免疫组的单位保护(对照出菌指数-免疫出菌指数)分别达到2.19、2.42、2.78,表明3种免疫方式均具有良好的免疫保护效果,其中阴道灌注的单位保护高于点眼,与注射免疫组更接近。以上结果表明:与常规疫苗相比,温敏凝胶疫苗可有效提升疫苗的安全性。相比点眼免疫,阴道灌注的免疫保护效果更好、安全性更好,虽然点眼抗体反应更弱、持续时间更短,但与阴道灌注相比,对诊断的干扰差异不大。综合以上结果表明,两种黏膜免疫方式中,阴道灌注是较理想的黏膜免疫方式,但黏膜免疫抗体持续时间短于注射免疫。因此,采用布鲁氏菌病温敏凝胶疫苗进行黏膜免疫更有利于鉴别诊断,同时也为新型布鲁氏菌病疫苗的研究提供新的思路。 展开更多
关键词 布鲁氏菌温敏凝胶疫苗 黏膜免疫 排菌 免疫抗体 单位保护
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寰椎椎弓根螺钉置入的解剖学及临床效果分析 被引量:1
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作者 王建华 付金利 +3 位作者 裴铎 孙贺 李哲 刘正蓬 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第1期71-75,共5页
目的研究寰椎椎弓根螺钉置入的解剖学及临床效果。方法选取46例由承德医学院解剖教研室提供的健康完整的寰椎标本予以解剖学测量,明确寰椎椎弓根螺钉进钉点与置钉的角度。选取2013年3月—2015年3月于承德医学院附属医院接受后路寰枢椎... 目的研究寰椎椎弓根螺钉置入的解剖学及临床效果。方法选取46例由承德医学院解剖教研室提供的健康完整的寰椎标本予以解剖学测量,明确寰椎椎弓根螺钉进钉点与置钉的角度。选取2013年3月—2015年3月于承德医学院附属医院接受后路寰枢椎切开复位内固定术治疗的寰枢椎不稳患者30例为对照组,置钉方式为传统置钉。另取2015年8月—2017年8月同院接受后路寰枢椎切开复位内固定术治疗的寰枢椎不稳患者33例为实验组,以局部解剖标志为参考的寰椎徒手椎弓根置钉方式置钉。比较两组各项手术指标,手术前后Oswestry功能障碍指数问卷表(ODI)及日本骨科协会评估治疗分数(JOA评分),术后并发症发生情况。结果实验组手术时间、术中失血量、置钉时间均低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。手术前后两组患者ODI及JOA评分比较差异无统计学意义(P>0.05);而术后两组患者ODI评分均低于术前,JOA评分均高于术前,差异有统计学意义(P <0.05)。结论以局部解剖标志为参考的寰椎徒手椎弓根置钉方式置钉效果更佳,有利于改善患者的脊柱功能以及颈椎功能。 展开更多
关键词 寰椎/颈椎 椎弓根螺钉/骨螺丝 解剖学 脊柱功能 颈椎功能
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含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建 被引量:3
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作者 范斌 鲍子磊 +3 位作者 贾钦瑞 刘建华 贺笋 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第8期2652-2659,共8页
为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CM... 为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CMV+EGFP+polyA)为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1H2-EGFP。将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价。结果显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(107.1TCID50/0.1 mL)较原毒株(108.8TCID50/0.1 mL)下降约101.7TCID50/0.1 mL。采用同源重组技术成功构建了1株马疱疹病毒1型流行株gE基因缺失突变株,为未来筛选马鼻肺炎基因缺失弱毒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 马鼻肺炎 马疱疹病毒1型(EHV-1) gE基因缺失
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Identification of metabolites of Radix Paeoniae Alba extract in rat bile, plasma and urine by ultra-performance liquid chromatography–quadrupole time-of-flight mass spectrometry 被引量:8
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作者 Zheng-Wei Chen Ling Tong +5 位作者 Shu-Ming Li Dong-Xiang Li Ying Zhang Shui-Ping Zhou Yong-Hong Zhu he sun 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS 2014年第1期14-25,共12页
Ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry(UPLC–Q-TOF/MS) was developed to identify the absorbed parent components and metabolites in rat bile, plasma and ... Ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry(UPLC–Q-TOF/MS) was developed to identify the absorbed parent components and metabolites in rat bile, plasma and urine after oral administration of Radix Paeoniae Alba extract(RPAE).A total of 65 compounds were detected in rat bile, plasma and urine samples, including 11 parent compounds and 54 metabolites. The results indicated that glucuronidation, hydroxylation and methylation were the major metabolic pathways of the components of RPAE. Furthermore, the results of this work demonstrated that UPLC–Q-TOF/MS combined with MetaboLynx?software and mass defect filtering(MDF) could provide unique high throughput capabilities for drug metabolism study, with excellent MS mass accuracy and enhanced MSEdata acquisition. With the MSEtechnique, both precursor and fragment mass spectra can be simultaneously acquired by alternating between high and low collision energy during a single chromatographic run. 展开更多
关键词 超高效液相色谱 飞行时间质谱法 串联质谱 四极杆 提取物 胆汁 大鼠 代谢产物
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2018年~2019年新疆部分地区猪病毒性腹泻病原检测与分析 被引量:13
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作者 李媛 程兰玲 +6 位作者 张慧敏 张志鹏 杜久斌 侯凤 任立松 贺笋 唐慧芬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期477-481,500,共6页
为了解新疆部分地区的猪病毒性腹泻发病现状和流行情况,本研究于2018年11月~2019年12月对新疆6个不同地区25个疑似病毒性腹泻猪场进行发病时间、发病日龄、发病率与病死率等基本状况调查,并利用RT-PCR方法对采集的疑似病毒性腹泻仔猪的... 为了解新疆部分地区的猪病毒性腹泻发病现状和流行情况,本研究于2018年11月~2019年12月对新疆6个不同地区25个疑似病毒性腹泻猪场进行发病时间、发病日龄、发病率与病死率等基本状况调查,并利用RT-PCR方法对采集的疑似病毒性腹泻仔猪的粪便及肠道内容物共1388份病料样品进行了病毒性腹泻的病原检测。调查结果显示,本研究中的25个猪场的仔猪腹泻主要在冬春季节发生,发病日龄主要为1日龄~6日龄,发病率为80.00%,病死率为87.46%。病原检测结果显示:猪流行性腹泻病毒(PEDV)的阳性率为46.69%,猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的阳性率为6.77%,猪轮状病毒(PoRV)的阳性率为14.55%,猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的阳性率为0.79%。PEDV/TGEV混合感染率为0.43%,PEDV/PoRV混合感染率为2.95%,PEDV/PDCoV混合感染率为0.29%,PEDV/TGEV/PoRV 3种混合感染率为0.43%。结果表明,引起新疆部分地区仔猪病毒性腹泻的主要病原为PEDV,并出现以PEDV/PoRV为主的多种病原混合感染。本研究为新疆地区生猪养殖场科学防控猪流行性腹泻疾病提供了参考。 展开更多
关键词 猪病毒性腹泻 RT-PCR 流行病学调查
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昆虫细胞-杆状病毒系统分泌表达的猪瘟病毒E2蛋白及其免疫原性研究 被引量:9
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作者 王遵宝 贺笋 +5 位作者 李俊辉 刘宏 豆智华 郑侃 李森江 寇春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期383-388,共6页
为研制新型、可用于区分野毒感染、助力猪瘟净化的亚单位疫苗,本研究参考了近年来国内猪瘟病毒(CSFV)流行株的E2基因序列,并根据昆虫细胞密码子偏嗜性对其进行优化、合成后,克隆至转移载体中,构建了重组质粒,随后转化至含有穿梭质粒的... 为研制新型、可用于区分野毒感染、助力猪瘟净化的亚单位疫苗,本研究参考了近年来国内猪瘟病毒(CSFV)流行株的E2基因序列,并根据昆虫细胞密码子偏嗜性对其进行优化、合成后,克隆至转移载体中,构建了重组质粒,随后转化至含有穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac,制备了重组杆粒并转染至SF9细胞,获得了表达E2基因的重组杆状病毒。间接免疫荧光试验和western blot检测结果显示该杆状病毒感染昆虫细胞后可正确表达E2蛋白(Bac-E2)。将Bac-E2(50μg/头份)与猪瘟兔化弱毒疫苗[HCLV,7500半数兔体感染剂量(RID50)/头份]分别免疫猪瘟抗体阴性仔猪,3周后用相同的剂量加强免疫。首免后5周Bac-E2组猪CSFV中和抗体均不低于11024,显著高于HCLV组(p<0.01);首免后35 d,利用105.0MLD(最小致死剂量)的CSFV石门强毒经耳后颈部肌肉注射攻毒后,Bac-E2和HCLV组猪的保护率均为100%,阴性对照组猪全部发病、死亡;采用荧光定量PCR检测各组猪口腔和肛门拭子中CSFV的排毒情况,结果显示Bac-E2和HCLV组猪攻毒后0~16 d的咽拭子及肛拭子中均未检测到CSFV核酸。阴性对照组猪攻毒后第4 d至濒死前均可在其拭子中检出高拷贝CSFV核酸。本研究为Bac-E2蛋白作为猪瘟亚单位疫苗的候选抗原蛋白奠定了研究基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 昆虫细胞 杆状病毒 免疫原性
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猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价 被引量:5
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作者 朱巧艳 张国良 +8 位作者 翟路峰 金云云 贺笋 宋国亮 李俊辉 焦金波 王尊宝 廖永洪 田克恭 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期938-943,共6页
为评价猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗(以下简称圆支二联苗)与猪瘟活疫苗混合免疫效果,本研究利用圆支二联苗作为稀释剂稀释猪瘟(CSFV)活疫苗,稀释后的混合疫苗在室温放置0、1 h、2 h取样测定CSFV含量,结果显示放置2 h CSFV... 为评价猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗(以下简称圆支二联苗)与猪瘟活疫苗混合免疫效果,本研究利用圆支二联苗作为稀释剂稀释猪瘟(CSFV)活疫苗,稀释后的混合疫苗在室温放置0、1 h、2 h取样测定CSFV含量,结果显示放置2 h CSFV含量未下降,表明圆支二联苗作为稀释剂不影响CSFV含量。用圆支二联苗对仔猪首次免疫,首免后14 d用稀释后的混合疫苗二免,分别在二免后21 d和28 d利用猪圆环病毒2型(PCV2)和猪肺炎支原体(Mhp)攻毒,结果显示圆支二联苗和CSFV活疫苗混合使用的免疫效果与单独使用圆支二联苗的免疫效果相当,针对PCV2的攻毒保护率均为80%,针对Mhp攻毒,混合疫苗免疫的仔猪肺炎病变减少率分别为73.1%和75.0%。此外,分别在混合疫苗和CSFV活疫苗免疫仔猪后不同时间采血,检测血清中CSFV抗体水平,结果显示混合疫苗免疫一次与CSFV活疫苗免疫一次后CSFV抗体水平相当。以上结果表明圆支二联苗可以作为稀释剂稀释CSFV活疫苗,一次性注射免疫,各疫苗免疫效力均不受影响。本研究为临床免疫程序优化及相关疫病的防制提供了实验依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗 猪瘟活疫苗 混合免疫 免疫效果评价
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不同猪瘟疫苗母源抗体持续期及半衰期研究 被引量:2
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作者 王遵宝 李俊辉 +4 位作者 贺笋 杨金鹿 豆智华 王涛 刘迦慧 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第6期108-112,共5页
为研究猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟活疫苗母源抗体衰减规律及其差异,合理制定仔猪的免疫程序,用60头母猪及其所产仔猪分别免疫两种疫苗,跟踪监测免疫试验母猪抗体及其所产仔猪的母源抗体持续期。结果表明,免疫不同疫苗的母猪猪瘟抗体差异显... 为研究猪瘟E2亚单位疫苗与猪瘟活疫苗母源抗体衰减规律及其差异,合理制定仔猪的免疫程序,用60头母猪及其所产仔猪分别免疫两种疫苗,跟踪监测免疫试验母猪抗体及其所产仔猪的母源抗体持续期。结果表明,免疫不同疫苗的母猪猪瘟抗体差异显著(P<0.05),E2亚单位疫苗组受自身抗体干扰小,免疫后猪瘟抗体水平最高,阻断率均值为91.62%,中和抗体均值为11.4log2;E2亚单位疫苗组仔猪的母源抗体持续期可达70 d,兔化弱毒疫苗组为28 d;E2组断奶仔猪母源抗体半衰期为10.5 d,兔化弱毒疫苗组为7.5 d。母猪猪瘟抗体与仔猪母源抗体呈显著正相关(R^2=0.96)。本研究表明,猪瘟E2亚单位疫苗免疫母猪后,受自身抗体干扰小,能产生高水平猪瘟抗体,并且其所产仔猪的母源抗体持续期可达70 d,即仔猪首免日龄暂定为70日龄,可有效减轻仔猪早期疫苗免疫负担,为育肥猪免疫一针猪瘟疫苗出栏奠定了试验基础。 展开更多
关键词 猪瘟 E2亚单位疫苗 母源抗体 半衰期
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Nuclear entry of active caspase-3 is facilitated by its p3-recognition-based specific cleavage activity 被引量:1
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作者 Min Luo Zhiyong Lu +10 位作者 he sun Kehu Yuan Quancang Zhang Sha Meng Fangxun Wang Hongchun Guo Xiaofang Ju Yuqing Liu Tao Ye Zhigang Lu Zhonghe Zhai 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第2期211-222,共12页
作为一个批评 apoptosis 刽子手, caspase-3 变得激活然后进入原子核施加它的功能。然而,活跃 caspase-3 的这个原子条目的分子的机制仍然是未知的。在这研究,我们表明 caspase-3 怀有 crm-1-independent 在它的小子单元的原子出口信... 作为一个批评 apoptosis 刽子手, caspase-3 变得激活然后进入原子核施加它的功能。然而,活跃 caspase-3 的这个原子条目的分子的机制仍然是未知的。在这研究,我们表明 caspase-3 怀有 crm-1-independent 在它的小子单元的原子出口信号(NES ) 。把 reverse-caspase-3 用作学习模型,我们发现在 caspase-3 的 NES 的功能没被 conformational 变化在导致的 caspase-3 激活期间扰乱。破坏劈开活动或 p3 识别地点的变化在活跃 caspase-3 的原子入口导致了一个缺点。我们提供活跃 caspase-3 的调停 p3 的特定的劈开活动废除了 NES 的功能的证据。在结论,我们的结果证明在 caspase-3 激活期间, NES 是组成地在场的。调停 p3 的特定的劈开活动在 caspase-3 废除 NES 功能,因此便于活跃 caspase-3 的原子入口。 展开更多
关键词 CASPASE 切割活性 基础 细胞凋亡 分子机制 活性构象 断裂活动 CRM
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3种不同类型佐剂的猪瘟E2基因工程亚单位疫苗免疫效果的比较研究 被引量:2
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作者 李天增 王遵宝 +4 位作者 王华龙 贺笋 李俊辉 徐龙飞 廖勇 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第3期79-82,共4页
为了筛选用于制备猪瘟E2基因工程亚单位疫苗的佐剂,用水佐剂、双相佐剂以及油包水佐剂分别制备了3种猪瘟E2基因工程亚单位疫苗,在猪上进行了免疫效果的评价。本试验选取4~5周龄猪瘟病毒病原、抗体阴性猪40头,随机分为8组,每组5头,其中3... 为了筛选用于制备猪瘟E2基因工程亚单位疫苗的佐剂,用水佐剂、双相佐剂以及油包水佐剂分别制备了3种猪瘟E2基因工程亚单位疫苗,在猪上进行了免疫效果的评价。本试验选取4~5周龄猪瘟病毒病原、抗体阴性猪40头,随机分为8组,每组5头,其中3组用于3种不同佐剂制备的亚单位疫苗的单次免疫效果评价,3组用于疫苗的二次加强免疫效果评价,1组为商品化猪瘟活疫苗对照,1组为空白对照。免疫后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况。结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪瘟E2基因工程亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应,均能诱导机体产生良好的中和抗体,油包水佐剂制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,免疫空窗期短,免疫持续期长,中和抗体水平高,在临床使用上更具优势。本研究为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。 展开更多
关键词 佐剂 猪瘟 E2蛋白 亚单位疫苗 免疫效果
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布鲁氏菌病活疫苗(A19-ΔVirB12株)的安全性及免疫效果研究 被引量:5
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作者 吴冬玲 贺笋 +5 位作者 任立松 何传雨 赵海龙 刘梦志 李明奇 李延涛 《草食家畜》 2020年第6期24-31,共8页
天康生物股份有限公司生产的布鲁氏菌病活疫苗(A19-ΔVirB12株)对犊牛的安全性和免疫效果的相关试验结果显示:不同免疫剂量(单剂量、单剂量重复和10倍超剂量)接种犊牛后,未见任何副反应,试验动物100%健活。免疫14 d后,抗体平均效价达到1... 天康生物股份有限公司生产的布鲁氏菌病活疫苗(A19-ΔVirB12株)对犊牛的安全性和免疫效果的相关试验结果显示:不同免疫剂量(单剂量、单剂量重复和10倍超剂量)接种犊牛后,未见任何副反应,试验动物100%健活。免疫14 d后,抗体平均效价达到1000 IU/mL以上,至免疫后35 d,效价开始下降,平均值维持200 IU/mL。免疫45 d后,对犊牛攻毒,免疫组犊牛存活率100%,保护率在80%~100%;对照组存活率100%,保护率20%。病理切片的结果进一步表明,该疫苗具有良好的免疫保护力。综上所述,布鲁氏菌病活疫苗(A19-ΔVirB12株)对犊牛安全、有效,可以用于犊牛布鲁氏菌病的预防免疫。 展开更多
关键词 疫苗 布鲁氏菌A19-ΔVirB12 安全性 免疫效力
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