期刊文献+
共找到13篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
藏獒犬IFNγ基因的克隆表达及其生物学活性测定 被引量:3
1
作者 宋世斌 陈国华 +4 位作者 胡永浩 贾怀杰 何小兵 景志忠 仝保全 《畜牧兽医杂志》 2018年第5期1-4,7,共5页
通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小为501bp,编码167个氨基酸,前23个AA为信号肽,与GenBank上发表的犬IFNγ((NM001003174.1)比较,序列的同源性为99.4%。构建了原核表达载体pET-30a-IFNγ,转化BL2L... 通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小为501bp,编码167个氨基酸,前23个AA为信号肽,与GenBank上发表的犬IFNγ((NM001003174.1)比较,序列的同源性为99.4%。构建了原核表达载体pET-30a-IFNγ,转化BL2L,IPTG诱导后表达约23Kd的重组蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后,纯度达90%以上;利用抑制病毒噬斑法测定重组藏獒犬γ干扰素的生物学活性,结果显示纯化的蛋白具有一定的抗病毒活性,本研究结果为进一步研究犬γ干扰素的抗病毒活性奠定基础。 展开更多
关键词 藏獒犬 IFNΓ 原核表达 活性测定
下载PDF
Molecular Clone, Expression, and Prediction of Construction and Function to Key Genes of Interleukin Family of Porcine 被引量:4
2
作者 jing zhi-zhong DOU Yong-xi +5 位作者 LUO Qi-hui CHEN Guo-hua MENG Xue-lian ZHENG Ya-dong LUO Xue-nong CAI Xue-peng 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第7期869-876,共8页
This research was to clone, express, and analyze the structure and function of major molecules of porcine interleukin family. Genes of porcine interleukin family were cloned by RT-PCR from stimulated porcine PBMC by L... This research was to clone, express, and analyze the structure and function of major molecules of porcine interleukin family. Genes of porcine interleukin family were cloned by RT-PCR from stimulated porcine PBMC by LPS and PHA, and then expressed in E. coli, and the structure and function of these molecules were predicted by ExPASY. The results showed that genes of IL-4, IL-6, and IL-18 were successfully cloned and expressed. Furthermore, the expression products of recombinant IL-4 and IL-6 both have multiple biological activities. By analyzing these genes with the NCBI/GenBank data, the homologies of the nucleotide acid sequence are 99.25, 99.21, and 100%, respectively, and have great species differences when compared with other animal species. The results of the prediction showed that all these molecules contain several phosphorylation, glycosylation, protein kinase, and signal transduction bonding sites in secondary structure, and all are compact globularity protein in space configuration. These characteristics of structure are the basis for their multiple biological functions. The genes, structure and function of key molecular of porcine interleukin family were successfully cloned, expressed, and analyzed in this paper. 展开更多
关键词 porcine interleukin gene family analysis of homologies prediction of construction
下载PDF
载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A的表达及其DNA去甲基化功能鉴定
3
作者 魏小乐 王晓霞 +3 位作者 贾怀杰 景志忠 王永祥 谭继英 《兰州大学学报(医学版)》 CAS 2018年第3期8-15,共8页
目的真核细胞内,DNA甲基化调控在转座子沉默、基因表达调控、甚至病毒感染过程中起关键作用,其中HIV-1启动子的甲基化修饰在病毒潜伏感染中扮演重要角色。为明确载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A,A3A)对HIV-1启动子5'LTR上... 目的真核细胞内,DNA甲基化调控在转座子沉默、基因表达调控、甚至病毒感染过程中起关键作用,其中HIV-1启动子的甲基化修饰在病毒潜伏感染中扮演重要角色。为明确载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A,A3A)对HIV-1启动子5'LTR上CpG岛甲基化程度的调节作用,本研究构建并筛选出A3A异构体A3A Isotype a(A3Aa)和A3A Isotype b(A3A-b)高表达真核载体,分析其去甲基化功能。方法从THP-1细胞mRNA中扩增得到A3A-a和A3A-b的c DNA,分别克隆至真核表达载体pASIB-HA和pCAGGS-HA。转染HEK-293T细胞,蛋白印迹法检测A3A-a和A3A-b的蛋白表达,并筛选出A3A-a和A3A-b的高表达载体。接着将A3A-a和A3A-b高表达载体与实验室构建并修饰的HIV-1启动子甲基化载体p-me LTR-EGFP共转染HEK-293T,检测指示蛋白EGFP在细胞水平中的表达,评价A3A-a和A3A-b的去甲基化调节作用。结果 PCR结果、酶切鉴定和测序结果均表明A3A真核表达载体pASIB-HA-A3A1-a、pCAGGS-HA-A3A2-a、pASIB-HA-A3A1-b、pCAGGS-HA-A3A2-b构建成功。经过筛选,pCAGGS-HA-A3A2-a和pCAGGS-HA-A3A2-b中A3A蛋白表达量最高,并用于后续实验。甲基化载体共转染实验显示,相较于对照A3G转染组,A3A-a和A3A-b组中EGFP的表达量明显上调。结论本研究在细胞水平上证实A3A分子Isotype a和Isotype b均可识别DNA中5-甲基化胞嘧啶,催化HIV-1启动子CpG岛去甲基化,为后续研究A3A对HIV潜伏感染调控奠定了基础。 展开更多
关键词 APOBEC3A HIV-1启动子 DNA去甲基化 真核表达载体
下载PDF
Development of an Indirect ELISA for Detection of T.solium Based on Recombinant 18 kDa Protein
4
作者 WU Guo-hua ZHENG Ya-dong +5 位作者 JIA Wan-zhong ZHANG Shao-hua jing zhi-zhong LUO Xue-nong LIU Shi-quan CAI Xue-peng 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期87-92,共6页
The gene encoding the 18 kDa protein of Taenia solium metacestodes was amplified by RT-PCR and cloned into the pGEM-T vector for sequencing.The recombinant plasmid named pGEX-CE18 was constructed and transformed into ... The gene encoding the 18 kDa protein of Taenia solium metacestodes was amplified by RT-PCR and cloned into the pGEM-T vector for sequencing.The recombinant plasmid named pGEX-CE18 was constructed and transformed into E.coli BL21 for in vitro expression.SDS-PAGE and Western blot were employed for analyzing the recombinant protein,which was then used for development of an indirect ELISA for detection of anti-cysticercosis antibodies.The results showed that the recombinant protein of interest was 35 kDa in size,accounting for 28%of total bacteria proteins,and reacted with positive sera against cysticercosis.Using the newly-constructed indirect ELISA and a commercially available ELISA kit,paired analyses of 178 serum samples indicated that the concordant rate was 98.83%and the ELISA exhibited good specificity and sensitivity,supporting its utility and application for diagnosis of cysticercosis. 展开更多
关键词 CYSTICERCUS cellulosae 18 kDa PROTEIN E.COLI EXPRESSION RECOMBINANT PROTEIN ELISA
下载PDF
牛结节性皮肤病病毒LAMP快检方法的建立与应用 被引量:1
5
作者 袁向芬 许晓琳 +7 位作者 孔玉方 吕继洲 王慧煜 王彩霞 张舟 邓俊花 景志忠 吴绍强 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1355-1362,共8页
本研究旨在建立一种特异性检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的LAMP快检方法,以用于该病临床早期诊断与监测。笔者根据LSDV的特异性基因序列,设计了数十套LAMP引物,经过筛选最终确定1套反应效率最高的引物,其位于LSDV095基因序列内。以实验... 本研究旨在建立一种特异性检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的LAMP快检方法,以用于该病临床早期诊断与监测。笔者根据LSDV的特异性基因序列,设计了数十套LAMP引物,经过筛选最终确定1套反应效率最高的引物,其位于LSDV095基因序列内。以实验室保存的PUC57-LSDV质粒作为阳性质控进行方法的优化与验证,基于不同的检测需求,分别建立了实时浊度LAMP检测方法、实时荧光LAMP检测方法及荧光可视化LAMP检测方法。优化后的3种LSDV LAMP方法灵敏度均可达20 copies/反应的靶基因,与WOAH推荐的实时荧光PCR方法(5 copies/反应)相近;特异性良好,与山羊痘病毒(GTPV)、绵羊痘病毒(SPPV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、赤羽病病毒(AKV)、蓝舌病病毒(BTV)及口蹄疫病毒(FMDV)均无交叉反应。其中,实时浊度法操作程序简单,实时荧光法反应快速(25 min内完成检测),荧光可视化法不依赖专用仪器及中心实验室。将所建方法应用于临床样本的检测,显示这3种方法均可特异性检测到LSDV,与实时荧光PCR方法检测结果一致性为100%,优于WOAH推荐的普通PCR方法。所建方法具有快速、特异、灵敏、操作简便且不依赖专用仪器等优点,可为LSDV的临床快速筛查提供技术支持。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒 环介导等温扩增技术(LAMP) 快检技术
下载PDF
羊口疮病毒E3L蛋白亚细胞定位及生物信息学分析 被引量:2
6
作者 蒙泽菁 房永祥 +5 位作者 贾怀杰 高真贞 陈国华 何小兵 景志忠 王晓霞 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第2期141-146,共6页
目的 克隆羊口疮病毒020基因,构建其重组真核表达质粒并转染HeLa细胞,分析020基因编码E3L蛋白的亚细胞定位,分析该蛋白生物信息学特征。方法 提取羊口疮病毒基因组,PCR扩增020基因并构建重组真核表达质粒,转染HeLa细胞,采用Western blo... 目的 克隆羊口疮病毒020基因,构建其重组真核表达质粒并转染HeLa细胞,分析020基因编码E3L蛋白的亚细胞定位,分析该蛋白生物信息学特征。方法 提取羊口疮病毒基因组,PCR扩增020基因并构建重组真核表达质粒,转染HeLa细胞,采用Western blot检测其在该细胞中的表达,免疫荧光法检测该蛋白的亚细胞定位。利用DNAstar软件分析不同毒株ORFV E3L氨基酸序列特点及其遗传演化关系;利用SOMPA软件分析其二级结构;利用SignalP4.0软件预测信号肽;利用TMHMM2.0软件预测跨膜结构;利用NetPhos 3.1预测磷酸化位点;利用NetNGlyc-1.0预测糖基化位点;应用IDEB和SYFPEITHI预测ORFV E3L蛋白的抗原表位。结果 成功克隆得到ORFV 020基因,全长549 bp,编码183个氨基酸;亚细胞定位显示该蛋白定位于细胞核和细胞质。生物信息学分析ORFV E3L蛋白α螺旋约占40.44%、β折叠约占5.46%、延伸链约占16.94%、无规则卷曲约占37.16%;该蛋白无信号肽和跨膜结构,可能存在15个磷酸化位点,7个N-糖基化位点,5个B细胞线性表位,2个CTL表位,3个Th细胞表位,3个B细胞和CTL联合表位,3个B细胞和Th细胞联合表位。结论 ORFV E3L蛋白定位于细胞核和细胞质,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性。该蛋白高度保守,具有成为优势保护性抗原的潜力。为进一步揭示ORFV E3L蛋白的功能奠定基础,为ORFV诊断方法的建立及疫苗的研制提供了理论依据。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 基因克隆 亚细胞定位 生物信息学
原文传递
痘病毒E3L蛋白在调控细胞程序性死亡中的功能
7
作者 蒙泽菁 房永祥 +6 位作者 韦雨松 谭金龙 高真贞 陈国华 何小兵 景志忠 王晓霞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期223-230,共8页
细胞程序性死亡是一种受基因调控的细胞死亡方式,包括细胞凋亡、焦亡、坏死性凋亡、铁死亡、自噬等,这些多元化的细胞程序性死亡方式在病毒的复制和传播中发挥重要作用。其中,痘病毒通过编码大量的病毒蛋白(例如E3L、F1L等)参与介导痘... 细胞程序性死亡是一种受基因调控的细胞死亡方式,包括细胞凋亡、焦亡、坏死性凋亡、铁死亡、自噬等,这些多元化的细胞程序性死亡方式在病毒的复制和传播中发挥重要作用。其中,痘病毒通过编码大量的病毒蛋白(例如E3L、F1L等)参与介导痘病毒免疫逃逸,抵抗宿主细胞死亡,以此维持自身复制。本文综述了痘病毒E3L蛋白在调控细胞凋亡、焦亡、坏死性凋亡中的作用,深入剖析了PKR、F1L和Zα结构域介导的E3L相关细胞程序性死亡分子机制,以期为痘病毒免疫逃逸机制探索、抗病毒药物开发等提供新思路。 展开更多
关键词 痘病毒 E3L 细胞凋亡 坏死性凋亡 细胞焦亡
下载PDF
牛结节性皮肤病的流行现状与传播特征及其我国的防控策略 被引量:50
8
作者 景志忠 贾怀杰 +8 位作者 陈国华 何小兵 房永祥 王国蒨 陈思睿 杨帆 吕彦蓉 Takele Tesgera HURISA 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1297-1304,共8页
2019年8月12日我国首次确诊在新疆伊犁地区爆发牛结节性皮肤病,为充分认识和做好该病的防控工作,防止外来疫情扩散蔓延到我国内地,现将该病的世界流行现状、传播特征以及我国的防控对策进行概括介绍,为有效控制、净化和根除该病提供指导。
关键词 牛结节性皮肤病 外来病 流行现状 生物媒介传播 防控策略
原文传递
牛结节性皮肤病防控技术研究现状及其策略 被引量:41
9
作者 景志忠 何小兵 +8 位作者 陈国华 贾怀杰 房永祥 陈思睿 杨帆 吕彦蓉 Takele Tesgera HURISA 王国蒨 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期205-214,共10页
2019年8月我国新疆伊犁地区首次爆发牛结节性皮肤病,为做好该病的防控工作,防止外来疫情扩散蔓延到我国内地,现将该病防控的诊断检测技术、疫苗研发状况以及我国的策略进行概括介绍,为有效控制、净化和根除该病提供指导。
关键词 牛结节性皮肤病 山羊痘病毒属 诊断技术 减毒活疫苗 防控技术
原文传递
牛结节性皮肤病病毒荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:8
10
作者 孔玉方 王慧煜 +2 位作者 袁向芬 景志忠 韩雪清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期439-443,共5页
根据牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的保守基因序列设计了特异性的引物和探针,建立了荧光定量PCR检测方法。对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了试验,并用田间临床样品对该方法和OIE推荐的普通PCR进行了验证。结果显示,本研究建立的荧光... 根据牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的保守基因序列设计了特异性的引物和探针,建立了荧光定量PCR检测方法。对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了试验,并用田间临床样品对该方法和OIE推荐的普通PCR进行了验证。结果显示,本研究建立的荧光定量PCR与绵羊痘病毒(SPPV)、山羊痘病毒(GTPV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和羊口疮病毒(ORFV)均无交叉反应;重组质粒标准品的检测限为1.16×100copies/μL;组间和组内的变异系数均≤2.00%。25份田间临床样品检测结果显示,本研究建立的荧光定量PCR阳性检出率为100%,而OIE推荐的普通PCR方法的阳性检出率为55.6%。上述结果表明,本研究建立的LSDV荧光PCR特异性强、敏感性高、重复性好,为牛结节性皮肤病的监测和防控提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒 荧光定量PCR 检测方法
下载PDF
A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析 被引量:2
11
作者 汪肖肖 孙普 +8 位作者 贾怀杰 李冬 付元芳 陈应理 曹轶梅 景志忠 白兴文 卢曾军 刘在新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1207-1215,共9页
为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~... 为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~140位,VP1 G-H环131~157位、C末端188~212位,A/WH/CHA/09 VP1 43~48位、VP3 55~72位,以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,构建免疫原蛋白分子命名为ANX2和ANX3,其中ANX2采用了表位序列反向串联的方式进行设计,用大肠杆菌表达免疫原基因,纯化表位蛋白免疫小鼠和猪,分析特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫猪进行了攻毒保护试验,评价表位疫苗的保护效果。结果显示,ANX2、ANX3重组蛋白以包涵体表达为主,蛋白大小约为41 ku和39 ku,均能与A型FMDV阳性血清发生特异性反应;免疫小鼠和猪后都能产生抗A型FMDV特异性抗体;用表位蛋白刺激免疫小鼠脾淋巴细胞,细胞因子IFN-γ和IL-4均有明显的升高;攻毒后对猪有一定的保护作用,ANX2的免疫效果略优于ANX3,证明表位序列反向串联更有利于抗原表位的展示,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了经验。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 表位疫苗 体液免疫 细胞免疫
原文传递
施马伦贝格病毒反向遗传系统的研究进展及应用 被引量:1
12
作者 韩武玮怡 杨帆 +6 位作者 谭金龙 张永芝 崔志伟 宋源富 刘永生 景志忠 李维克 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1444-1449,共6页
施马伦贝格病毒(Schmallenberg vir,uSsBV)是一种通过库蠓传播的正布尼亚病毒,由三个负义单链RNA片段(L、M、S片段)组成,以入侵反刍动物中枢神经系统导致其发热、腹泻、产奶减少及胎儿畸形或流产等症状为特征,严重危害地区畜牧业安全,... 施马伦贝格病毒(Schmallenberg vir,uSsBV)是一种通过库蠓传播的正布尼亚病毒,由三个负义单链RNA片段(L、M、S片段)组成,以入侵反刍动物中枢神经系统导致其发热、腹泻、产奶减少及胎儿畸形或流产等症状为特征,严重危害地区畜牧业安全,并造成了巨大经济损失。反向遗传操作系统是研究布尼亚病毒的一种有效方法,利用三质粒法拯救出的重组SBV(rSBV)与野生型SBV的生理特性极为相似。为了更深入地了解施马伦贝格病毒及反向遗传操作系统对其重要的作用,本文简要阐述了SBV基本特征、反向遗传操作系统研究进展及反向遗传系统的应用,以期为我国SBV的预防、控制及应用提供参考。 展开更多
关键词 施马伦贝格病毒 反向遗传操作系统 疫苗
下载PDF
羊口疮病毒青海QH02株ORF011基因的克隆、原核表达及鉴定
13
作者 耿嘉谦 贾怀杰 +4 位作者 陈国华 何小兵 房永祥 景志忠 王晓霞 《中国病毒病杂志》 CAS 2019年第3期188-194,共7页
目的克隆羊口疮病毒QH02株ORF011基因并进行序列分析及原核表达、鉴定。方法提取羊口疮病毒QH02株的DNA,根据GenBank中(GU320351.1)的序列设计并合成引物,PCR扩增ORF011基因。将测序正确的序列用生物信息学软件对其基因及蛋白的结构进... 目的克隆羊口疮病毒QH02株ORF011基因并进行序列分析及原核表达、鉴定。方法提取羊口疮病毒QH02株的DNA,根据GenBank中(GU320351.1)的序列设计并合成引物,PCR扩增ORF011基因。将测序正确的序列用生物信息学软件对其基因及蛋白的结构进行预测,并将基因构建至pET-32a(+)原核表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),挑取阳性克隆测序正确后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)诱导表达,经十二烷基硫酸钠-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、Western-blot验证重组蛋白反应原性。结果 PCR扩增得到1 137 bp的ORF011基因片段,重组蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式存在,重组蛋白相对分子质量为60×10~3,且纯度较高,Western-blot检测结果表明目的蛋白具有较好的反应原性。结论构建的原核表达系统可以成功表达B2L蛋白,经Western-blot验证具有良好的反应原性,可作为羊口疮防控产品研发的候选分子。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORF011基因 克隆 生物信息学分析 原核表达
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部