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Aggrecanase-2表达沉默对体外培养的软骨细胞基质代谢的影响 被引量：2
1
作者 王正辉 杨壮群 +3 位作者 吴宝俊 常会敏 kamal mustafa 卢晓云 《组织工程与重建外科杂志》 2012年第5期245-248,共4页
目的探讨RNA干扰蛋白聚糖酶-2(Aggrecanase-2)对大鼠肋软骨细胞基质代谢的影响。方法体外分离培养大鼠肋软骨细胞,采用脂质体转染试剂将针对Aggrecanase-2的载体质粒转染软骨细胞,观察转染后细胞生长曲线、细胞形态的变化;RT-PCR检测Agg... 目的探讨RNA干扰蛋白聚糖酶-2(Aggrecanase-2)对大鼠肋软骨细胞基质代谢的影响。方法体外分离培养大鼠肋软骨细胞,采用脂质体转染试剂将针对Aggrecanase-2的载体质粒转染软骨细胞,观察转染后细胞生长曲线、细胞形态的变化;RT-PCR检测Aggrecanase-2 mRNA水平的变化;Western Blot检测蛋白多糖(Aggrecan)的变化。结果RNA干扰Aggreanase-2对细胞生长速度及形态无明显影响,可明显降低Aggrecanase-2的mRNA表达水平(P<0.05),增加Aggrecan的含量(P<0.05)。结论抑制Aggrecanase-2可减少蛋白多糖的降解,RNAi是一种有效的研究软骨细胞基质代谢的工具。 展开更多
关键词 软骨细胞蛋 白聚糖酶-2 RNA干扰
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松质骨基质复合生物蛋白胶构建组织工程软骨的研究
2
作者 王正辉 常会敏 +3 位作者 吴宝俊 杨壮群 kamal mustafa 卢晓云 《组织工程与重建外科杂志》 2012年第3期126-129,共4页
目的尝试采用松质骨基质与生物蛋白胶复合材料构建组织工程软骨。方法体外培养大鼠软骨细胞,接种于松质骨基质/生物蛋白胶材料上行体外培养。采用HE、甲苯胺蓝染色免疫学检测、扫描电镜观察等方法观察所构建的组织工程软骨的特性。结果... 目的尝试采用松质骨基质与生物蛋白胶复合材料构建组织工程软骨。方法体外培养大鼠软骨细胞,接种于松质骨基质/生物蛋白胶材料上行体外培养。采用HE、甲苯胺蓝染色免疫学检测、扫描电镜观察等方法观察所构建的组织工程软骨的特性。结果松质骨基质/生物蛋白胶组的组织学结构更接近于软骨样组织,其Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因表达量及蛋白多糖含量明显高于松质骨基质组。结论松质骨基质/生物蛋白胶复合材料可用于构建组织工程软骨,是一种较理想的支架材料。 展开更多
关键词 软骨细胞 组织工程 生物蛋白胶 支架材料
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RNA干扰技术构建组织工程软骨的实验研究 被引量：3
3
作者 王正辉 吴宝俊 kamal mustafa 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期106-111,共6页
目的种子细胞来源是软骨组织工程的研究热点。探讨以RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术干扰多聚蛋白聚糖酶(Aggrecanase)后的软骨细胞作为组织工程种子细胞的可行性。方法取成年SD大鼠肋软骨采用消化法分离培养软骨细胞。取第1代细胞... 目的种子细胞来源是软骨组织工程的研究热点。探讨以RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术干扰多聚蛋白聚糖酶(Aggrecanase)后的软骨细胞作为组织工程种子细胞的可行性。方法取成年SD大鼠肋软骨采用消化法分离培养软骨细胞。取第1代细胞分为空白阴性对照组(对照组)及慢病毒转染组(实验组)两组。将两组细胞分别与壳聚糖/明胶材料进行体外复合培养制备组织工程软骨,于培养后不同时间点通过HE、Masson染色,扫描电镜观察以及RT-PCR方法检测两组软骨中蛋白聚糖(Aggrecan)以及Aggrecanase-1、2的变化情况。结果组织学观察示培养2周时,对照组与实验组相比细胞数量及细胞外基质未见明显差别;随着培养时间延长,实验组较对照组细胞外基质分泌增多,细胞数目更多。RT-PCR结果显示培养4、8周,实验组细胞Aggrecan mRNA表达量明显高于对照组,Aggrecanase-1和Aggrecanase-2 mRNA表达量明显低于对照组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜显示实验组细胞数量明显多于对照组,且细胞间连接紧密。结论采用RNAi技术干扰Aggrecanase后的软骨细胞可以作为组织工程软骨种子细胞,其在材料上分泌Aggrecan的含量明显高于正常软骨细胞,其生物学活性需进一步研究。 展开更多
关键词 组织工程软骨 RNA干扰 软骨细胞 蛋白聚糖 多聚蛋白聚糖酶 大鼠
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