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新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响
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作者 王宏宇 田志飘 +8 位作者 刘红线 郑亮 于雯 吴志军 matthew kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 张华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期84-90,共7页
非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成... 非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体,并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后,利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定,SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中,经嘌呤霉素标记后,利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明,重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达,并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译,为更深入研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 Nsp1基因 真核载体构建 蛋白翻译
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肠道病毒71型VP1包涵体蛋白的复性与纯化 被引量：1
2
作者 刘红线 王宏宇 +7 位作者 田志飘 郑亮 matthew kay 高振秋 许晓娟 耿荣庆 吴志军 张华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第2期153-157,161,共6页
目的 利用原核表达系统,经优化诱导条件及变、复性将包涵体形式肠道病毒71型结构蛋白VP1进行纯化。方法 通过RT-PCR扩增VP1基因,并应用基因克隆技术将VP1基因与pET-28a原核表达载体连接,之后将重组载体转化至大肠埃希菌Rosseta(DE3)感... 目的 利用原核表达系统,经优化诱导条件及变、复性将包涵体形式肠道病毒71型结构蛋白VP1进行纯化。方法 通过RT-PCR扩增VP1基因,并应用基因克隆技术将VP1基因与pET-28a原核表达载体连接,之后将重组载体转化至大肠埃希菌Rosseta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后对包涵体进行变、复性,采用His镍柱亲和层析对VP1蛋白进行纯化,利用SDS-PAGE和Western blot对VP1蛋白进行分析鉴定。结果 PCR扩增出891 bp的EV71-VP1基因,双酶切鉴定原核重组质粒pET-28a-EV71-VP1构建正确。重组载体转化DE3后经IPTG诱导表达VP1蛋白,且以包涵体形式存在。将包涵体变、复性,经SDS-PAGE分离后进行镍柱纯化,得到较纯的目的蛋白,Western blot分析该蛋白能被相应抗体识别。结论 构建的原核重组质粒pET-28a-EV71-VP1转化DE3后经IPTG诱导表达以包涵体形式存在的VP1蛋白,复性后纯化的VP1蛋白具有免疫原性,为EV71 VP1蛋白的研究与开发奠定了基础。 展开更多
关键词 EV71型 VP1 原核载体构建 蛋白表达与纯化
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病毒诱导的非折叠蛋白反应调控天然免疫的研究进展
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作者 郑亮 王宏宇 +6 位作者 matthew kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 陈志宝 吴志军 张华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期868-876,共9页
病毒在感染细胞后,病毒借助细胞内质网(Endoplasmic reticulum, ER)进行病毒基因组的部分蛋白表达,造成内质网压力过载。内质网会通过非折叠蛋白反应(Unfolded protein response, UPR)维持其自身的稳态,UPR包括PERK、IRE1、ATF6信号三... 病毒在感染细胞后,病毒借助细胞内质网(Endoplasmic reticulum, ER)进行病毒基因组的部分蛋白表达,造成内质网压力过载。内质网会通过非折叠蛋白反应(Unfolded protein response, UPR)维持其自身的稳态,UPR包括PERK、IRE1、ATF6信号三种信号途径,并且会通过不同机制调控病毒的复制。在本综述中,简要综述了由病毒所介导的UPR对于抗病毒天然免疫反应的调控作用,并且本综述也对几种冠状病毒通过诱导UPR调控天然免疫反应进行了简要概述,以期为了解病毒复制提供参考。 展开更多
关键词 非折叠蛋白反应 天然免疫 冠状病毒
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