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布鲁氏菌S2、M5及A19疫苗不同免疫程序对细胞因子的影响 被引量:8
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作者 孙晶晶 吴锦艳 +7 位作者 陈妍 曹小安 尹双辉 周建华 兰喜 李学瑞 刘永生 尚佑军 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期984-993,共10页
目的通过对不同布鲁氏菌疫苗免疫接种途径与免疫效果之间的关系来评价商品化布鲁氏菌疫苗免疫羊后非应答组与应答组之间细胞因子分泌水平的影响,进一步探索其合理的免疫方案。方法采用试管凝集试验(SAT)和虎红平板凝集试验(RBPT)方法检... 目的通过对不同布鲁氏菌疫苗免疫接种途径与免疫效果之间的关系来评价商品化布鲁氏菌疫苗免疫羊后非应答组与应答组之间细胞因子分泌水平的影响,进一步探索其合理的免疫方案。方法采用试管凝集试验(SAT)和虎红平板凝集试验(RBPT)方法检测羔羊进行疫苗免疫后是否产生抗体分为非应答组和应答组,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测羊血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ细胞免疫水平。结果羔羊灌服接种S2疫苗免疫14 d内,非应答组细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均高于对照组,且IL-10表达量极显著升高(P<0.01),在免疫14 d时MCP-1的表达量显著升高(P<0.05);与非应答组相比,应答组IL-2、IL-4、IL-6和IL-10表达量均降低,MCP-1表达量升高,IFN-γ表达量则差异不大,且IL-2表达量极显著降低(P<0.01),在免疫7 d时IL-4和IL-6的表达量显著降低(P<0.05)。灌服接种M5疫苗免疫14 d内,非应答组与对照组相比,细胞因子IL-2、IL-4、IL-6和MCP-1的表达量先降低后升高,IL-10和IFN-γ表达量高于对照组;与非应答组相比,应答组IL-6和IFN-γ表达量升高,IL-4、IL-10和MCP-1先升高后降低,IL-2表达量则极显著降低(P<0.01),IL-4、IL-10、在免疫7 d时MCP-1和IFN-γ的表达量极显著升高(P<0.01)。皮下接种M5疫苗免疫14 d内,非应答组细胞因子IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均高于对照组,IL-2和IL-4,IL-6表达量先降低后升高,IFN-γ和MCP-1表达量显著升高(P<0.05);与非应答组相比,应答组IL-2、IL-6和IL-10的表达量均降低,IL-4的表达量升高,MCP-1和IFN-γ表达量则差异不大,且IL-2表达量极显著降低(P<0.01),在免疫14 d时IL-4的表达量显著升高(P<0.05)。皮下接种A19疫苗免疫14 d内,非应答组IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1表达量均低于对照组,IL-2和IFN-γ表达量先升高后降低;与非应答组相比,应答组IL-4、IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均升高,IL-6表达量先升高后降低,IL-2的表达量则显著降低(P<0.05),在免疫7 d时IL-4和MCP-1的表达量显著升高(P<0.05),在免疫14 d时IL-4的表达量极显著升高(P<0.01),IL-10、MCP-1和IFN-γ的表达量显著升高(P<0.05)。结论 M5疫苗皮下注射接种免疫效果优于灌服接种;在灌服接种方面:S2疫苗免疫效果优于M5疫苗;在皮下注射接种方面:M5疫苗免疫效果优于A19疫苗。本研究为制定羊布鲁氏菌病合理的疫苗免疫方案提供了科学依据。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 绵羊 布鲁氏菌疫苗 细胞因子
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LncRNA MALAT1在视网膜母细胞瘤组织中的表达及靶向miR-145-5p/SOX9轴对Y79细胞生物行为的影响
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作者 严肖啸 尹双慧 +1 位作者 李小静 孙敏 《中国细胞生物学学报》 CSCD 2023年第10期1463-1472,共10页
该文旨在探讨长链非编码RNA(LncRNA)肺腺癌相关转录本1(MALAT1)在视网膜母细胞瘤(RB)组织中的表达情况,及靶向微小RNA(miRNA)-145-5p/性别决定区Y框蛋白9(SOX9)轴对Y79细胞生物行为的影响。qRT-PCR检测RB组织和Y79细胞中MALAT1、miR-145... 该文旨在探讨长链非编码RNA(LncRNA)肺腺癌相关转录本1(MALAT1)在视网膜母细胞瘤(RB)组织中的表达情况,及靶向微小RNA(miRNA)-145-5p/性别决定区Y框蛋白9(SOX9)轴对Y79细胞生物行为的影响。qRT-PCR检测RB组织和Y79细胞中MALAT1、miR-145-5p、SOX9mRNA相对表达量;荧光原位杂交(FISH)实验、双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1、SOX9与miR-145-5p的靶向关系;将Y79细胞分为sh-NC组、sh-MALAT1组、sh-MALAT1+miR-NC组、sh-MALAT1+miR-145-5p inhibitor组、mimics-NC组、miR-145-5p mimics组、miR-145-5p mimics+pcDNA组、miR-145-5p mimics+SOX9组,MTT法和细胞克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测SOX9、Ki67、MMP9、Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。体内肿瘤形成实验验证MALAT1对RB肿瘤的影响。结果显示,MALAT1在RB组织和Y79细胞中高表达(P<0.05);FISH实验、双荧光素酶报告基因实验证实MALAT1、SOX9与miR-145-5p存在靶向关系;沉默MALAT1或过表达miR-145-5p可抑制Y79细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡(P<0.05);抑制mi R-145-5p或过表达SOX9可逆转沉默MALAT1或过表达miR-145-5p对Y79细胞生物学行为的影响(P<0.05);体内实验显示,抑制MALAT1表达可显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.05)。MALAT1在RB组织和Y79细胞中高表达,MALAT1可通过调节miR-145-5p/SOX9信号轴,参与Y79细胞生物学行为。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤 生物学行为 LncRNA MALAT1 miR-145-5p 性别决定区Y框蛋白9
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携带高滴度猪瘟病毒C株猪睾丸细胞株的建立及蛋白质组学分析
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作者 张智慧 魏衍全 +4 位作者 谷玲军 张韵 孙世琪 尹双辉 郭慧琛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期648-657,共10页
猪睾丸细胞(Swine testicular,ST)广泛用于猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的传代,为了进一步提高ST细胞增殖的CSFV滴度,我们利用有限稀释法克隆出一种稳定携带高滴度CSFV C株的单克隆细胞株(STC)。间接免疫荧光实验结果显... 猪睾丸细胞(Swine testicular,ST)广泛用于猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的传代,为了进一步提高ST细胞增殖的CSFV滴度,我们利用有限稀释法克隆出一种稳定携带高滴度CSFV C株的单克隆细胞株(STC)。间接免疫荧光实验结果显示,几乎100%STC细胞携带CSFV抗原;且STC细胞中CSFV滴度为106TCID_(50)/mL,与CSFV单次感染亲本ST细胞的病毒滴度10^(4)TCID_(50)/mL相比,具有更高的病毒产量。为了探究STC细胞持续带毒后细胞内蛋白表达水平的变化,我们通过非标记定量蛋白质组学分析发现541种蛋白表达水平发生明显变化,并选取其中差异显著且与病毒复制或细胞存活相关的两种上调蛋白(GRP94,GRP78)、两种下调蛋白(β-catenin,ISG15)进行免疫印迹验证。本试验成功获得了可以稳定携带高滴度CSFV C株的STC细胞株,并初步筛选了与细胞持续带毒有关的目标蛋白,不仅为简化猪瘟传代细胞苗生产工艺提供条件,也为研究STC细胞持续携带CSFV稳定传代的机制奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒C株 稳定细胞株 高滴度带毒 蛋白表达差异
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Infective viruses produced from full-length complementary DNA of swine vesicular disease viruses HK/70 strain 被引量:6
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作者 ZHENG Haixue LIU Xiangtao +14 位作者 SHANG Youiun WU Jinyan BAI Xingwen JIN Ye SUN Shiqi GUO Huichen TIAN Hong FENG Xia yin shuanghui GUO Jianhong CONG Guozheng LIU Zaixin CHANG Huiyun MA Junwu XIE Qingge 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2006年第17期2072-2078,共7页
The full-length cDNA clone of swine vesicular disease virus HK/70 strain named pSVOK12 was constructed in order to study the antigenicity, replication, maturation and pathogenicity of swine vesicular disease virus. In... The full-length cDNA clone of swine vesicular disease virus HK/70 strain named pSVOK12 was constructed in order to study the antigenicity, replication, maturation and pathogenicity of swine vesicular disease virus. In vitro transcription RNA from pSVOK12 transfected IBRS-2 cells and the re- covered virus RNA were isolated and sequenced, then indirect hemagglutination test, indirect im- munofluorescence assays, eleectron microscope test, 50% tissue culture infecting dose (TCID50) assays and mouse virulence studies were performed to study the antigenicity and virulence of the recovered virus. The result showed that the infectious clones we ob- tained and the virus derived from pSVOK12 had the same biological properties as the parental strain HK/70. The full-length infectious cDNA clone, pSVOK12, will be very useful in studies of the anti- genicity, virulence, pathogenesis, maturation and replication of SVDV. 展开更多
关键词 猪水泡病病毒 CDNA 传染性克隆 pSVOK12 反求遗传学
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