目的为了提高微量样本中miRNA的检测通量和检测效率,本文建立了一种能够同时准确定量两种miRNA的双重实时荧光定量PCR(real time fluorogenic quantitative PCR)检测体系,并通过实际样本检测验证其应用于体液鉴别的效果。方法设计适用于...目的为了提高微量样本中miRNA的检测通量和检测效率,本文建立了一种能够同时准确定量两种miRNA的双重实时荧光定量PCR(real time fluorogenic quantitative PCR)检测体系,并通过实际样本检测验证其应用于体液鉴别的效果。方法设计适用于miRNA双重检验的相关引物及探针并优化实验体系组分,建立基于TaqMan技术的miRNA双重实时荧光定量PCR检测体系并验证其特异性、灵敏度和可重复性;使用此检测体系对58份不同体液样本中的miR-451a与miR-21-5p进行检测,并借助miR-451a与miR-21-5p的比值鉴定法评估该体系的体液鉴别能力;使用该检测体系样本数据确定的最佳截断值对模拟案件样本进行鉴别。结果优化的检测体系能够实现对血液与非血液、月经血与外周血的100%区分,同时可以实现对模拟案件样本的准确鉴别。结论该双重实时荧光定量PCR检测体系将时间和材料成本均缩短至原来的一半,为后续建立更多重的实时荧光定量PCR检测体系并应用于体液鉴别打下了基础。展开更多
目的 构建一种基于线粒体DNA和核DNA遗传标记的中华鲟及其潜在杂交种的鉴定方法。方法 根据美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)已公布的中华鲟cytb基因序列设计引物,并选用鲟鱼单拷贝核基...目的 构建一种基于线粒体DNA和核DNA遗传标记的中华鲟及其潜在杂交种的鉴定方法。方法 根据美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)已公布的中华鲟cytb基因序列设计引物,并选用鲟鱼单拷贝核基因fam43a扩增引物对中华鲟DNA进行扩增与测序,其中对fam43a基因扩增产物进行TA克隆测序。通过BLAST序列相似性检索确定样本来源,并基于邻接法构建鲟形目系统进化树。结果 中华鲟样本测序所得cytb和fam43a基因序列长度分别为728 bp和730 bp,且10个克隆群所测fam43a基因序列完全一致。基本局部比对搜索工具(basic local alignment search tool, BLAST)序列相似分析显示,所测cytb与fam43a基因序列均与GenBank数据库中的中华鲟相似性最高,相似性分别为99.86%和100%。系统进化分析显示,中华鲟样本所测得序列均与GenBank数据库中的中华鲟DNA序列聚类在一起,且与鲟形目其他物种位于不同分支。结论 联合使用线粒体DNA和核DNA遗传标记能够快速准确地鉴定中华鲟及其潜在杂交种,该方法能够满足法医日常检案的鉴定需求,为中华鲟的拯救和保护提供科学技术支持。展开更多
1案例1.1简要案情因诉讼需要,某法院委托本鉴定所对吴某(男,33岁)和双胞胎男孩(吴某郎与吴某易,均为3岁)进行有无亲生血缘关系的鉴定。据法院提供的两子户籍证明及出生证明信息,可明确两者为同母双胞胎。按《亲权鉴定技术规范》(GB/T37...1案例1.1简要案情因诉讼需要,某法院委托本鉴定所对吴某(男,33岁)和双胞胎男孩(吴某郎与吴某易,均为3岁)进行有无亲生血缘关系的鉴定。据法院提供的两子户籍证明及出生证明信息,可明确两者为同母双胞胎。按《亲权鉴定技术规范》(GB/T37223—2018)要求对吴某、吴某郎与吴某易分别采集血样。1.2检验方法1.2.1 DNA提取使用Chelex法提取检材DNA。1.2.2检测过程常染色体STR基因座检测:分别应用Microreader^(TM) 21 ID System和Microreader^(TM) 23sp ID System(北京阅微基因技术股份有限公司)对检材DNA的39个STR基因座和性别基因座复合扩增。展开更多
目的用血缘一致性(identity by descent,IBD)型式计算乱伦案件的似然比。方法先用相同的数字表示家系成员中IBD的等位基因以组成IBD型式,然后用先验概率乘以非IBD等位基因频率得出各个IBD型式概率。将家系的所有IBD型式概率相加即可得...目的用血缘一致性(identity by descent,IBD)型式计算乱伦案件的似然比。方法先用相同的数字表示家系成员中IBD的等位基因以组成IBD型式,然后用先验概率乘以非IBD等位基因频率得出各个IBD型式概率。将家系的所有IBD型式概率相加即可得到乱伦案不同假设下的家系概率,比较不同家系概率计算似然比。结果获得了父女乱伦和全同胞乱伦案的IBD型式及这两种案例的似然比计算公式。结论阐明了基于IBD型式计算乱伦案似然比的方法。展开更多
文摘目的为了提高微量样本中miRNA的检测通量和检测效率,本文建立了一种能够同时准确定量两种miRNA的双重实时荧光定量PCR(real time fluorogenic quantitative PCR)检测体系,并通过实际样本检测验证其应用于体液鉴别的效果。方法设计适用于miRNA双重检验的相关引物及探针并优化实验体系组分,建立基于TaqMan技术的miRNA双重实时荧光定量PCR检测体系并验证其特异性、灵敏度和可重复性;使用此检测体系对58份不同体液样本中的miR-451a与miR-21-5p进行检测,并借助miR-451a与miR-21-5p的比值鉴定法评估该体系的体液鉴别能力;使用该检测体系样本数据确定的最佳截断值对模拟案件样本进行鉴别。结果优化的检测体系能够实现对血液与非血液、月经血与外周血的100%区分,同时可以实现对模拟案件样本的准确鉴别。结论该双重实时荧光定量PCR检测体系将时间和材料成本均缩短至原来的一半,为后续建立更多重的实时荧光定量PCR检测体系并应用于体液鉴别打下了基础。
文摘1案例1.1简要案情因诉讼需要,某法院委托本鉴定所对吴某(男,33岁)和双胞胎男孩(吴某郎与吴某易,均为3岁)进行有无亲生血缘关系的鉴定。据法院提供的两子户籍证明及出生证明信息,可明确两者为同母双胞胎。按《亲权鉴定技术规范》(GB/T37223—2018)要求对吴某、吴某郎与吴某易分别采集血样。1.2检验方法1.2.1 DNA提取使用Chelex法提取检材DNA。1.2.2检测过程常染色体STR基因座检测:分别应用Microreader^(TM) 21 ID System和Microreader^(TM) 23sp ID System(北京阅微基因技术股份有限公司)对检材DNA的39个STR基因座和性别基因座复合扩增。
文摘目的用血缘一致性(identity by descent,IBD)型式计算乱伦案件的似然比。方法先用相同的数字表示家系成员中IBD的等位基因以组成IBD型式,然后用先验概率乘以非IBD等位基因频率得出各个IBD型式概率。将家系的所有IBD型式概率相加即可得到乱伦案不同假设下的家系概率,比较不同家系概率计算似然比。结果获得了父女乱伦和全同胞乱伦案的IBD型式及这两种案例的似然比计算公式。结论阐明了基于IBD型式计算乱伦案似然比的方法。
