丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的细胞入侵过程由多因素介导,包括多种受体及触发病毒内吞入胞的细胞因素。新发现的受体分子occludin已被证明与SR-B1、CD81、claudin同介导HCV细胞入侵,occludin和claudin同为组成细胞间紧密连接...丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的细胞入侵过程由多因素介导,包括多种受体及触发病毒内吞入胞的细胞因素。新发现的受体分子occludin已被证明与SR-B1、CD81、claudin同介导HCV细胞入侵,occludin和claudin同为组成细胞间紧密连接的整合蛋白,引起了研究者们对紧密连接及细胞极性对HCV入侵影响的广泛关注。对细胞极性及紧密连接的研究,有助于发现新的HCV治疗药物的作用靶点,从而干预其细胞入侵及细胞间蔓延。本文从肝细胞极性特点、紧密连接及主要整合蛋白claudin和occludin、极性细胞模型及与HCV入侵的关系等几个方面综述了近来的最新进展。展开更多
目的构建戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)RdRp基因真核表达质粒,并检测其在PLC/PRF/5、A549和HepG2 3种细胞中的表达,为后续RdRp的研究提供实验依据。方法利用RT-nPCR法从阳性HEV粪便中扩增RdRp基因片段,插入pcDNA3.0真核表达载体...目的构建戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)RdRp基因真核表达质粒,并检测其在PLC/PRF/5、A549和HepG2 3种细胞中的表达,为后续RdRp的研究提供实验依据。方法利用RT-nPCR法从阳性HEV粪便中扩增RdRp基因片段,插入pcDNA3.0真核表达载体中,并在其3′端插入EGFP报告基因,构建融合表达质粒pcDNA3.0-RdRp-EGFP,脂质体法转染PLC/PRF/5、A549和HepG2细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-nPCR检测RdRp基因mRNA的转录情况,Westernblot检测RdRp蛋白的表达。结果重组表达质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确;RdRp基因和蛋白在A549和HepG2细胞中可高效、特异性表达。结论成功构建了RdRp基因真核表达质粒,并在A549和HepG2培养细胞中大量表达,为进一步研究RdRp在HEV复制过程中的功能奠定了基础。展开更多
文摘丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的细胞入侵过程由多因素介导,包括多种受体及触发病毒内吞入胞的细胞因素。新发现的受体分子occludin已被证明与SR-B1、CD81、claudin同介导HCV细胞入侵,occludin和claudin同为组成细胞间紧密连接的整合蛋白,引起了研究者们对紧密连接及细胞极性对HCV入侵影响的广泛关注。对细胞极性及紧密连接的研究,有助于发现新的HCV治疗药物的作用靶点,从而干预其细胞入侵及细胞间蔓延。本文从肝细胞极性特点、紧密连接及主要整合蛋白claudin和occludin、极性细胞模型及与HCV入侵的关系等几个方面综述了近来的最新进展。
文摘目的构建戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)RdRp基因真核表达质粒,并检测其在PLC/PRF/5、A549和HepG2 3种细胞中的表达,为后续RdRp的研究提供实验依据。方法利用RT-nPCR法从阳性HEV粪便中扩增RdRp基因片段,插入pcDNA3.0真核表达载体中,并在其3′端插入EGFP报告基因,构建融合表达质粒pcDNA3.0-RdRp-EGFP,脂质体法转染PLC/PRF/5、A549和HepG2细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-nPCR检测RdRp基因mRNA的转录情况,Westernblot检测RdRp蛋白的表达。结果重组表达质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确;RdRp基因和蛋白在A549和HepG2细胞中可高效、特异性表达。结论成功构建了RdRp基因真核表达质粒,并在A549和HepG2培养细胞中大量表达,为进一步研究RdRp在HEV复制过程中的功能奠定了基础。
