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蛋白质双向电泳图像分析 被引量：37
1
作者 贾宇峰 林秋霞 +2 位作者 郭尧君 郭鹞 刘少君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第2期246-250,共5页
随着人类基因组计划的接近完成 ,蛋白质组 (proteome)研究成为新的热点 .其中高分辨率的双向电泳(two dimensionalgelelectrophoresis ,2 DE)技术使对组织或细胞的整个蛋白质组的综合分析成为可能 .近年来这一技术有了很大的改进和提... 随着人类基因组计划的接近完成 ,蛋白质组 (proteome)研究成为新的热点 .其中高分辨率的双向电泳(two dimensionalgelelectrophoresis ,2 DE)技术使对组织或细胞的整个蛋白质组的综合分析成为可能 .近年来这一技术有了很大的改进和提高 ,特别是图像分析系统 ,算法更为先进 ,功能日益强大 ,操作也更简便 ,为大规模研究提供了良好的工具 .使用新一代的 2D图像分析系统 ,对离体培养的雪旺氏细胞的蛋白质样品双向电泳结果进行了初步分析 ,探讨了在图像扫描、点检测、背景消除、匹配、结果报告和数据分析各步中的技术问题 ,并报告了进行 2D图像分析的体会 . 展开更多
关键词 双向电泳 蛋白质组 图像分析 软件 雪旺氏细胞
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茜素红S与蛋白质的反应机理研究 被引量：37
2
作者 庄稼 迟燕华 +2 位作者 李克安 李娜 童沈阳 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第8期827-832,共6页
应用ＵＶ光谱法研究在ＰＨ４．３５的缓冲溶液中，茜素红Ｓ（ＡＲＳ）与牛血清蛋白（ＢＳＡ）间的相互结合反应，测定了平均结合数ｎ＝８，分配结合常数ＫＣ＝１．５×１０＾５，研究了小分子探针与蛋白质的反应机理，相互间的结合... 应用ＵＶ光谱法研究在ＰＨ４．３５的缓冲溶液中，茜素红Ｓ（ＡＲＳ）与牛血清蛋白（ＢＳＡ）间的相互结合反应，测定了平均结合数ｎ＝８，分配结合常数ＫＣ＝１．５×１０＾５，研究了小分子探针与蛋白质的反应机理，相互间的结合部位及结合力，该复合物结合前后手等吸收波长红移２８ｎｍ这是目前此类结合反应研究中，其分子间结合力较大的一例，进一步研究了ＡＲＳ与多种蛋白质的结合反应，以及离子强度对该体系的影响。 展开更多
关键词 茜素红S 牛血清蛋白 UV光谱 蛋白质 结合反应
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氯磺酚S与蛋白质作用的分光光度研究 被引量：37
3
作者 胡秋娈 李娜 +2 位作者 赵凤林 李克安 童沈阳 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第2期166-169,共4页
在pH2.4的Clark-Lubs缓冲介质中,氯磺酚S与蛋白质能形成复合物,最大吸收峰的波长为632nm,比试剂本身红移约80nm.实验制定的几种蛋白质的工作曲线线性范围较宽,灵敏度较高.用于人血清样品测定的准确度高,干扰少.本方法中试剂及反应体系稳... 在pH2.4的Clark-Lubs缓冲介质中,氯磺酚S与蛋白质能形成复合物,最大吸收峰的波长为632nm,比试剂本身红移约80nm.实验制定的几种蛋白质的工作曲线线性范围较宽,灵敏度较高.用于人血清样品测定的准确度高,干扰少.本方法中试剂及反应体系稳定,分析手续简便经济. 展开更多
关键词 氯磺酚S 分光光度法 蛋白质 测定
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以锌试剂显色法测定蛋白质的研究 被引量：29
4
作者 迟燕华 李娜 +2 位作者 庄稼 李克安 童沈阳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1998年第6期879-881,共3页
有关蛋白质染色测定的分光光度研究已有不少报道，其中有些已用于蛋白质的分析测定［１～４］．锌试剂常用于金属离子的分光光度法测定，但作为生物大分子分析试剂的研究，目前还未见报道．实验表明，在ｐＨ４左右的缓冲溶液中，锌试剂... 有关蛋白质染色测定的分光光度研究已有不少报道，其中有些已用于蛋白质的分析测定［１～４］．锌试剂常用于金属离子的分光光度法测定，但作为生物大分子分析试剂的研究，目前还未见报道．实验表明，在ｐＨ４左右的缓冲溶液中，锌试剂与ＢＳＡ反应生成有色复合物，吸收光... 展开更多
关键词 锌试剂 蛋白质 分光光度法 测定 分析
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蚕蛹油α-亚麻酸提取工艺研究和成分分析 被引量：35
5
作者 张岫美 邓树海 +4 位作者 魏欣冰 丁华 娄海燕 黄桂华 吴葆杰 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2003年第5期222-223,共2页
目的研究筛选从蚕蛹油中提取α 亚麻酸的工艺路线 ,并对提取的不饱和脂肪酸进行成分分析。方法采用酸水解法、碱水解法和皂化法等三种工艺方法 ,以新鲜蚕蛹为原料制备蚕蛹油 ,并用气相色谱仪对所得蚕蛹油进行成分分析。结果三种工艺方... 目的研究筛选从蚕蛹油中提取α 亚麻酸的工艺路线 ,并对提取的不饱和脂肪酸进行成分分析。方法采用酸水解法、碱水解法和皂化法等三种工艺方法 ,以新鲜蚕蛹为原料制备蚕蛹油 ,并用气相色谱仪对所得蚕蛹油进行成分分析。结果三种工艺方法制备蚕蛹油中不饱和脂肪酸含量分别为 5.2 6%、3 .0 4%及 5.51% ,表明蚕蛹油中含有丰富的不饱和脂肪酸 ;蚕蛹油不饱和脂肪酸中亚油酸、油酸、α 亚麻酸的含量分别为 3 7.53 % ,4.94%及3 0 .2 4%。结论皂化法工艺提取蚕蛹油不饱和脂肪酸收率较高 ,且进一步分离蚕蛹油不饱和脂肪酸中α 展开更多
关键词 蚕蛹油 Α-亚麻酸 多不饱和脂肪酸 气相色谱
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蛋白质-铬天青S体系的弹性光散射及其初步分析应用 被引量：37
6
作者 魏永巨 李克安 童沈阳 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第3期290-297,共8页
在pH3.5左右的柠檬酸-NaOH介质中,蛋白质与铬天青S可以通过以静电引力为主的分子间作用力结合生成大分子离子缔合物,产生最大散射波长约为370nm的弹性光散射信号.基于这一现象可以测定低至0.02μg·mL^(-1)的血清白蛋白,工作曲线在0... 在pH3.5左右的柠檬酸-NaOH介质中,蛋白质与铬天青S可以通过以静电引力为主的分子间作用力结合生成大分子离子缔合物,产生最大散射波长约为370nm的弹性光散射信号.基于这一现象可以测定低至0.02μg·mL^(-1)的血清白蛋白,工作曲线在0～1.0μg·mL^(-1)范围内呈线性关系.这一新方法的灵敏度比Coomassie亮蓝法高50倍.用普通的荧光分光光度计测量了这一体系的散射光谱,研究了pH,离子强度和试剂浓度等实验条件对散射光强的影响,考察了阳离子、阴离子和非离子表面活性剂以及氨基酸和常见金属离子对反应体系的作用.将这一方法用于测定尿中徽量蛋白,结果满意. 展开更多
关键词 光散射 蛋白质 铬天青S 缔合物 尿蛋白 分析
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植物叶片蛋白质双向电泳技术的改进与优化 被引量：45
7
作者 何瑞锋 丁毅 +1 位作者 张剑锋 余金洪 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期319-321,共3页
通过对传统的双向电泳方法进行改进与优化，得到了一种适合于分析植物叶片蛋白质的双向电泳新方法。用改进后的方法对水稻不同时期成熟叶片蛋白质进行双向电泳分离，结果显示其稳定性和重复性好，分辨率较高,经考马斯亮蓝染色后可分辨出... 通过对传统的双向电泳方法进行改进与优化，得到了一种适合于分析植物叶片蛋白质的双向电泳新方法。用改进后的方法对水稻不同时期成熟叶片蛋白质进行双向电泳分离，结果显示其稳定性和重复性好，分辨率较高,经考马斯亮蓝染色后可分辨出300多个蛋白质（肽）点。它们的等电点和分子量主要分布于pI4.1-8.2和10-100kDa之间。本文还就实验过程中出现的一些技术问题进行了讨论。 展开更多
关键词 叶片蛋白质 双向电泳 植物 样品制备 电解质配比
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抗菌肽Diptericin cDNA的克隆及在E.coli中的融合表达 被引量：25
8
作者 陈海旭 胡泰山 +1 位作者 王新 屈贤铭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期182-184,共3页
从果蝇成虫中抽提总 RNA,RT- PCR扩增编码伏蝇素 diptericin的 c DNA,克隆并测定了全序列 .将该 c DNA亚克隆到融合表达载体 p MAL- CR1上 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,进行了高效的可溶性融合表达 .通过离子交换层析纯化融合蛋白 ,经 Xa... 从果蝇成虫中抽提总 RNA,RT- PCR扩增编码伏蝇素 diptericin的 c DNA,克隆并测定了全序列 .将该 c DNA亚克隆到融合表达载体 p MAL- CR1上 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,进行了高效的可溶性融合表达 .通过离子交换层析纯化融合蛋白 ,经 Xa因子酶切后得到的重组 diptericin具有抗菌活性 . 展开更多
关键词 伏蝇素 MBP融合蛋白 融合表达 抗菌肽 CDNA克隆
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硝基磺酚C光度法测定蛋白质的研究 被引量：20
9
作者 胡秋娈 李娜 +1 位作者 赵凤林 李克安 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第2期221-223,共3页
蛋白质的定量分析是生化研究、临床化验和食品检验等领域经常涉及的内容．以有机小分子作光谱探针测定蛋白质，如甲基橙［１，２］、考马斯亮蓝Ｇ－２５０［３］、溴酚蓝［４］、溴甲酚绿［５］和偶氮胂Ⅲ［６］等已得到研究．本文研究... 蛋白质的定量分析是生化研究、临床化验和食品检验等领域经常涉及的内容．以有机小分子作光谱探针测定蛋白质，如甲基橙［１，２］、考马斯亮蓝Ｇ－２５０［３］、溴酚蓝［４］、溴甲酚绿［５］和偶氮胂Ⅲ［６］等已得到研究．本文研究表明，在室温条件下，硝基磺酚Ｃ能与... 展开更多
关键词 蛋白质 硝基磺酚C 分光光度法 测定
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反相高效液相色谱法分离蛋白质的研究 被引量：14
10
作者 张华 王俊德 +1 位作者 钟虹敏 罗丽梅 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期220-222,共3页
采用反相高效液相色谱法考察了几种大孔硅胶烷基键合固定相在等度淋洗条件下进行蛋白质分离的色谱性能。研究了冲洗剂中有机溶剂异丙醇的浓度、离子对酸（ＴＦＡ）浓度对蛋白质保留时间的影响。探讨了蛋白质在ＲＰ－ＨＰＬＣ中的保留机... 采用反相高效液相色谱法考察了几种大孔硅胶烷基键合固定相在等度淋洗条件下进行蛋白质分离的色谱性能。研究了冲洗剂中有机溶剂异丙醇的浓度、离子对酸（ＴＦＡ）浓度对蛋白质保留时间的影响。探讨了蛋白质在ＲＰ－ＨＰＬＣ中的保留机理。结果表明，大孔硅胶（２０～３０ｎｍ）短链（Ｃ４和Ｃ８）烷基键合固定相适合蛋白质的分离。 展开更多
关键词 高效液相色谱 蛋白质 分离 固定相 键合固定相
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高效液相色谱-电喷雾-质谱法测定蛋白质混合物 被引量：12
11
作者 谷胜 沈金灿 +1 位作者 庄峙厦 王小如 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期1067-1072,共6页
介绍高效液相色谱 -电喷雾 -质谱 (HPL C- ESI- MS)联用技术在生物大分子 (蛋白 )的分离和检测上所表现出来的优越性能 ,并利用 L C- ESI- MS技术成功地分离、检测溶菌酶和牛血清蛋白混合物 .
关键词 电喷雾 高效液相色谱 蛋白质混合物 HPLC-ESI-MS技术 溶菌酶 牛血清蛋白
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一种简便的考马斯亮蓝G250蛋白质染色方法 被引量：21
12
作者 江南 吴开力 +1 位作者 黄强 潘苏华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第5期560-561,共2页
介绍一种快速、简便、几乎无背景的考马斯亮蓝G2 5 0 (CBBG2 5 0 )染色方法 .该方法所用试剂仅为稀盐酸和CBBG2 5 0 ,CBBG2 5 0的工作浓度为 0 0 0 15 % ,灵敏度达 0 0 2 μg/带 ,染色 2h达 70 % ,4h以上或染色过夜即可充分染色 .与... 介绍一种快速、简便、几乎无背景的考马斯亮蓝G2 5 0 (CBBG2 5 0 )染色方法 .该方法所用试剂仅为稀盐酸和CBBG2 5 0 ,CBBG2 5 0的工作浓度为 0 0 0 15 % ,灵敏度达 0 0 2 μg/带 ,染色 2h达 70 % ,4h以上或染色过夜即可充分染色 .与以往的考马斯亮蓝染色方法相比 ,该方法有经济方便、灵敏度高、几乎无背景等优点 。 展开更多
关键词 电泳 染色方法 考马斯亮蓝G250 蛋白质
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电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 被引量：9
13
作者 董燕 张枫 +2 位作者 梅柱中 刘斌 孙志贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期449-453,共5页
探讨了电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 .采用抗凋亡抑制蛋白 Survivin的抗体 ,对细胞裂解液进行蛋白质印迹 .与常规操作方法不同之处是 :在电转移的凝胶“三明治”中 ,重叠放置两张硝酸纤维素膜 .电转移后 ,对两... 探讨了电转移中蛋白质的透膜现象及其对蛋白质印迹结果的影响 .采用抗凋亡抑制蛋白 Survivin的抗体 ,对细胞裂解液进行蛋白质印迹 .与常规操作方法不同之处是 :在电转移的凝胶“三明治”中 ,重叠放置两张硝酸纤维素膜 .电转移后 ,对两张膜同时进行免疫印迹 .在特定的转移条件下 ,两张膜的免疫印迹都出现了Survivin蛋白的特异印迹带 ,证实了电转移中存在着蛋白质的透膜现象 .转移时间、电流强度和蛋白质的分子质量 ,都是影响蛋白质透膜的相关因素 .电转移中蛋白质的透膜 ,可以产生“印迹复制失真”的效应 ,从而最终影响蛋白质印迹定性和定量的结果 .所得实验结果和结论 ,揭示了蛋白质印迹技术方法学中一个需要加以充分关注的问题 。 展开更多
关键词 蛋白质 透膜现象 电转移 免疫印迹 假阴性
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发菜蛋白质组双向电泳技术的建立及优化 被引量：15
14
作者 梁文裕 王星 +2 位作者 焦广飞 张喜娟 陈伟 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1550-1556,共7页
为建立适用于发菜（Nostoc flagelliforme）蛋白质组研究的双向电泳技术，对发菜蛋白质的提取、裂解、上样量、IEF及SDS-PAGE电泳等关键步骤进行了优化，结果显示：发菜蛋白质主要分布在pH4～7范围内，采用改良TCA法可提高提取液中蛋白... 为建立适用于发菜（Nostoc flagelliforme）蛋白质组研究的双向电泳技术，对发菜蛋白质的提取、裂解、上样量、IEF及SDS-PAGE电泳等关键步骤进行了优化，结果显示：发菜蛋白质主要分布在pH4～7范围内，采用改良TCA法可提高提取液中蛋白质的含量和双向电泳图谱的分辨率，裂解液含60mmol／LDTT，24cm IPG胶条上样量1．5mg时不仅提高了蛋白质的溶解性，而且改善了双向电泳的分离效果，得到近800个蛋白点，且蛋白点清晰，图谱分辨率较好。采用优化后的双向电泳体系提高了发菜蛋白质双向电泳的分辨率和重复性，建立起一套适用于发菜蛋白质组分析的双向电泳方法。 展开更多
关键词 发菜 双向电泳 蛋白质组学
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蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的条件优化 被引量：8
15
作者 金世辉 刘必成 +2 位作者 张春秀 唐祖明 陆祖宏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期57-60,共4页
目的:建立一种以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列制备的优化方法,比较琼脂糖修饰玻片和醛基修饰玻片及氨基修饰玻片对蛋白质固定效率的优劣。方法:将羊IgG固定在载体表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3标记的兔抗羊IgG,孵育,洗涤后用... 目的:建立一种以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列制备的优化方法,比较琼脂糖修饰玻片和醛基修饰玻片及氨基修饰玻片对蛋白质固定效率的优劣。方法:将羊IgG固定在载体表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3标记的兔抗羊IgG,孵育,洗涤后用共聚焦激光扫描仪获取图像,检测各点的荧光强度,根据荧光强度确定最佳琼脂糖浓度,最佳NaIO4浓度,最佳固定时间以及封闭时间等实验条件。结果:琼脂糖浓度为1.2％、NaIO4浓度为20mmol／L、固定时间为1h、孵育时间为45min时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高。在固定的抗体浓度相同的情况下,琼脂糖修饰玻片荧光强度是醛基修饰玻片的2.6倍,是氨基修饰玻片的9倍。结论:确立了蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的优化条件,用该优化条件制备的琼脂糖玻片更适合用于蛋白质微阵列载体。 展开更多
关键词 琼脂糖 玻片 固定时间 修饰 载体 封闭 共聚焦激光扫描 蛋白质微阵列 条件优化 糖浓度
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蛋白质工程的研究 被引量：10
16
作者 唐建国 茹炳根 +2 位作者 徐长法 胡美浩 朱圣庚 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期342-349,共8页
对近期蛋白质工程的工作进行了综合报道，涉及到胰蛋白酶、金属硫蛋白、胰岛素、尿激酶原、组织型纤溶酶原激活剂、ＲＧＤ肽等蛋白质或多肽的结构与功能研究以及分子改造。
关键词 蛋白质工程 胰蛋白酶 金属硫蛋白 胰岛素
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适用于黄麻根部蛋白质组学分析的双向电泳技术 被引量：10
17
作者 马洪雨 王占奎 +3 位作者 俞阗 杨立明 王显生 麻浩 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期195-202,共8页
以黄麻品种‘9511’幼苗为试验材料,研究其根部蛋白提取方法的得率及不同的蛋白样品溶解方法、电泳上样量和IPG胶条pH范围对双向电泳图谱的影响。结果表明：采用三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法提取黄麻根部蛋白质,蛋白得率为80 mg/g;蛋白... 以黄麻品种‘9511’幼苗为试验材料,研究其根部蛋白提取方法的得率及不同的蛋白样品溶解方法、电泳上样量和IPG胶条pH范围对双向电泳图谱的影响。结果表明：采用三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法提取黄麻根部蛋白质,蛋白得率为80 mg/g;蛋白粉末溶解采用两次水化法,裂解液中含有7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、65 mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质和1 mmol/L PMSF,能够较充分地溶解蛋白质,且制备的样品浓度能够满足双向电泳上样要求;上样量为400μg时得到的图谱分辨率高、蛋白斑点分布均匀、清晰;等电聚焦（Iso-electrofocusing,IEF）采用pH 4-7、17 cm的IPG胶条时所得图谱质量最佳。研究表明,样品的制备及IEF有效除盐对获得理想的2-DE图谱非常关键;取材、染色等细节对2-DE的重复性影响很大。 展开更多
关键词 黄麻 根 蛋白质 双向电泳(2-DE)
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FT-Raman光谱对蛋白质二级结构的定量分析 被引量：27
18
作者 王斌 王靖 +1 位作者 余江 刘会洲 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第5期674-676,共3页
采用ＦＴ－Ｒａｍ ａｎ 光谱仪对蛋白质样品进行了多次扫描，以去卷积谱、二阶及四阶导数谱为参考确定各子峰峰位。采用酰胺Ⅰ带的原始谱图作曲线拟合， 并以子峰面积表征对应二级结构含量。用所建立的方法研究了多种蛋白质二级结构，
关键词 傅里叶变换拉曼光谱 蛋白质 二级结构 曲线拟合
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应用毛细管区带电泳测定人血清蛋白 被引量：7
19
作者 张宁 唐轶 +2 位作者 郝冬梅 郑玲 邱广斌 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期593-595,共3页
研究了一种用于临床检测血清蛋白的毛细管区带电泳方法。弹性石英毛细管５０ μｍ ｉ．ｄ．×４７ ｃｍ （４０ ｃｍ 有效长度），检测波长２００ ｎｍ ，血清用运行缓冲液（含１２．５ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ四硼酸钠、１ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ... 研究了一种用于临床检测血清蛋白的毛细管区带电泳方法。弹性石英毛细管５０ μｍ ｉ．ｄ．×４７ ｃｍ （４０ ｃｍ 有效长度），检测波长２００ ｎｍ ，血清用运行缓冲液（含１２．５ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ四硼酸钠、１ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ乳酸钙、０．７ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ硫酸镁，ｐＨ ９．７０）稀释４０倍，气压进样１７．２３ ｋＰａ·ｓ，分析电压２３ ｋＶ。正常血清蛋白分为６种，孕妇的分７种（多一个未知的α０峰）。将正常人、孕妇、多发性骨髓瘤和强直性脊柱炎患者的血清蛋白的毛细管电泳与传统的醋酸纤维膜电泳相比较，前者具有高分辨率、在线数据处理和自动化的特点。基于血清蛋白的诊断，毛细管电泳是一个可靠的分析新技术。 展开更多
关键词 毛细管区带电泳 血清蛋白 分离 测定 人血清蛋白
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蛋白质组分析中双向电泳技术的改良和应用 被引量：8
20
作者 王新 王伯良 +6 位作者 张宗友 兰梅 王吉村 药立波 陈南春 金建平 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期191-192,共2页
关键词 蛋白质组 蛋白质 双向聚丙烯酰胺 凝胶电泳 双向电泳技术
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