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负载柚皮苷AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型修复中的作用及对BMPs-VEGF信号通路的影响
1
作者 辛健 陈云刚 +2 位作者 于宁 陈文明 王卫国 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期186-195,共10页
目的:观察负载柚皮苷的AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型中的修复作用,并基于骨形成蛋白(BMPS)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨该生物材料的作用机制。方法:用牙钻在30只新西兰雄兔L5与L6椎间制作一个7mm×5mm×4mm的缺损,建... 目的:观察负载柚皮苷的AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型中的修复作用,并基于骨形成蛋白(BMPS)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨该生物材料的作用机制。方法:用牙钻在30只新西兰雄兔L5与L6椎间制作一个7mm×5mm×4mm的缺损,建立脊柱骨缺损模型,制备AKE/GB30网箱。测试负载柚皮苷的AKE/GB30网箱生物力学性能,检测其体外释药行为。将造模成功的新西兰兔随机数字表法分为3组,即空白组、自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组,除空白组外分别予以自体骨移植、负载柚皮苷的AKE/GB30网箱进行修复。术后6周、12周每组各取5只兔,微计算机断层扫描(Micro CT)检测骨修复情况[包括骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁数目(Tb.N)];实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨形成蛋白2(BMP2)、VEGF、Runt相关转录因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测骨组织BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN蛋白表达。结果:AKE/GB30网箱制作成功,且其特性检测结果符合脊柱骨缺损修复要求;负载柚皮苷的AKE/GB30网箱最大抗压强度为28MPa,最大抗压力为15N,6周时其累积释药率达(98.15±1.47)%;各组术后12周时BV/TV、Tb.Th和Tb.N,骨组织BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN的mRNA与蛋白表达均高于术后6周时(P<0.05),且自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组上述指标均高于空白组(P<0.05),自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:负载柚皮苷的AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型修复的效果等同于自体骨移植,可能是通过促进BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN表达实现的。 展开更多
关键词 骨形成蛋白2 血管内皮生长因子 柚皮苷 脊柱 骨缺损
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293T细胞生产慢病毒工艺优化
2
作者 李欣 高驰 +4 位作者 顾力行 曾毅 姚頔 何红鹏 张同存 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期554-564,共11页
随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化... 随着细胞治疗的快速发展,大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈,因此,优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞,节省时间,节约成本,提高慢病毒包装的能力。同时对优化慢病毒载体中出现悬浮细胞结团生长的现象进行探索,检测其影响结团的因素。分别采用快速、慢速驯化方式将293T贴壁细胞驯化为悬浮培养,并比较其细胞形态、细胞密度、细胞活率、慢病毒包装能力和冻存复苏后稳定一致性,筛选出最优的悬浮驯化条件。通过调节Ca^(2+)浓度和EDTA添加量来研究比较细胞结团生长状况。结果证明,使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂(medium)可以将293T贴壁细胞快速驯化为293T悬浮细胞,并能制备出慢病毒滴度且优于贴壁细胞的包装滴度(^(*)P<0.05)。Ca^(2+)浓度会影响细胞结团大小,添加EDTA能有效分离分散非必要的细胞抱团生长。研究结果显示,传统293T贴壁细胞可以使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂快速驯化成悬浮细胞;在一定范围内,Ca^(2+)浓度越高细胞所结团块及粒径越大,EDTA添加量越高细胞所结团块及粒径变小。这为优化慢病毒载体包装工艺和悬浮培养条件,同时为体外规模化细胞培养放大和生产奠定了理论基础,具有一定的实用价值。 展开更多
关键词 慢病毒载体 293T细胞 悬浮驯化 悬浮细胞培养 结团
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药用植物组织培养学创新教学模式改革研究
3
作者 赵容 邢艳萍 +3 位作者 张建逵 王丹 陈月华 尹海波 《安徽农学通报》 2024年第1期119-122,共4页
药用植物组织培养学是中草药栽培与鉴定专业的专业基础课,对学生的专业基础理论学习与实践应用能力的培养具有重要意义,是现代植物学与生理学的基础学科。基于我国教育体系的改革进步,以及对应用型人才的培养要求,线下授课已经不能完全... 药用植物组织培养学是中草药栽培与鉴定专业的专业基础课,对学生的专业基础理论学习与实践应用能力的培养具有重要意义,是现代植物学与生理学的基础学科。基于我国教育体系的改革进步,以及对应用型人才的培养要求,线下授课已经不能完全满足对学生的授课需求,本文分析了目前教学中存在的几点问题,融合思政教学内容,对教学方法进行创新和改革,以取得良好的教学效果。 展开更多
关键词 药用植物组织培养 农业教育 农业教育创新
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肠道类器官在肠疾病机制研究中的运用
4
作者 强龙征 毛海光 +2 位作者 王梦婷 齐莉莉 王进波 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第2期394-403,共10页
肠道类器官由来自肠道的隐窝或干细胞在培养基质的三维(3D)支撑下构建形成,含有肠道的所有成熟细胞,已经成为研究肠道疾病机制全新且高效的平台。相较于二维(2D)细胞培养,肠道类器官不仅可以更加有效地模拟肠道的生理结构与功能,还可以... 肠道类器官由来自肠道的隐窝或干细胞在培养基质的三维(3D)支撑下构建形成,含有肠道的所有成熟细胞,已经成为研究肠道疾病机制全新且高效的平台。相较于二维(2D)细胞培养,肠道类器官不仅可以更加有效地模拟肠道的生理结构与功能,还可以在不同体外环境下更好地还原肠道的真实生态,因此在不同肠道疾病的发病机制研究中应用更为广泛。本文介绍了肠道类器官培养方式的新进展,综述了近年来肠道类器官在炎症性肠道疾病、结肠直肠癌和乳糜泻发病机制研究中的运用及进展,同时讨论了肠道类器官在药物研发与筛选方面的应用。 展开更多
关键词 肠道类器官 肠道疾病 病理机制 药物研发
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旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响
5
作者 张萍萍 梁婷婷 +2 位作者 范明松 陈黎 张世昌 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第19期3012-3017,共6页
背景:生物反应器内球形体培养是既能维持间充质干细胞干性又能大规模扩增的体外培养方法,明确其对干细胞免疫调节作用的影响有利于指导临床应用。目的:探讨旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响。方法:从... 背景:生物反应器内球形体培养是既能维持间充质干细胞干性又能大规模扩增的体外培养方法,明确其对干细胞免疫调节作用的影响有利于指导临床应用。目的:探讨旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响。方法:从人胎盘组织中分离培养人胎盘间充质干细胞,分别进行二维培养和旋转生物反应器培养,利用倒置相差显微镜、免疫组化染色和CCK-8实验观察细胞形态与增殖能力,RT-qPCR和流式荧光法检测多种炎症因子基因表达与蛋白分泌量。结果与结论:①旋转生物反应器内培养的人胎盘间充质干细胞聚集成多细胞球形体,数量与体积逐渐增加;②苏木精-伊红染色可见旋转生物反应器内培养4 d的人胎盘间充质干细胞在球形体内分布均匀,形态正常;③免疫组化染色显示球形体内有大量人胎盘间充质干细胞的细胞核Ki-67阳性;④CCK-8实验结果显示,生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞活力显著高于二维培养的细胞;⑤RT-qPCR和流式免疫荧光法检测结果显示,旋转生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞中白细胞介素1β、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素8、白细胞介素10、白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和干扰素α的基因表达量和蛋白分泌量显著高于二维培养的细胞;⑥结果表明,旋转生物反应器内球形体培养能显著提高人胎盘间充质干细胞分泌多种炎症因子的能力,加强人胎盘间充质干细胞的免疫调节作用。 展开更多
关键词 胎盘间充质干细胞 生物反应器 球形体 炎症因子 免疫调节
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猪腹膜间皮细胞的分离培养及初步应用
6
作者 黄媛媛 王佳 +6 位作者 陈嘉瑜 甘源 袁厅 冯志新 邵国青 王先炜 熊祺琰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1249-1256,共8页
本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学... 本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学、免疫学方法鉴定细胞。使用Mhr感染PMC细胞,观察细胞形态变化,并利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)法检测细胞活性损伤情况。结果显示,倒置相差显微镜观察显示,分离培养的细胞早期呈拉网状,5~8 d后生长可达融合状态,细胞大小均一,呈多边形铺路石状;间接免疫荧光试验结果显示,细胞波形蛋白、角蛋白-18抗原呈阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞CD45抗原呈阴性;扫描电镜下可见细胞表面微绒毛。结果证实分离培养的细胞为猪PMC细胞,纯度达95%以上。Mhr感染后,光镜下可观察到细胞发生明显皱缩,感染组细胞的LDH释放量较对照组细胞显著升高。本研究成功建立了猪原代PMC细胞的分离培养方法,并初步用于Mhr体外感染,为研究Mhr等引起浆膜炎的病原与宿主的互作机制提供了体外细胞模型。 展开更多
关键词 腹膜间皮细胞 原代培养 猪 猪鼻支原体
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匍茎百合再生体系的建立及多倍体诱导
7
作者 马小鸥 张前 +5 位作者 吴利雪 张智萱 郝俊夷 张鹏 张启翔 孙明 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期52-58,共7页
为了保护匍茎百合(Lilium lankongense)的野生种质资源并提供简单有效的快繁方法,以匍茎百合为植物材料,建立以鳞茎为外植体的高效再生体系,并利用秋水仙素处理种子,诱导出多倍体植株。通过调节培养基中的植物生长激素和蔗糖的质量浓度... 为了保护匍茎百合(Lilium lankongense)的野生种质资源并提供简单有效的快繁方法,以匍茎百合为植物材料,建立以鳞茎为外植体的高效再生体系,并利用秋水仙素处理种子,诱导出多倍体植株。通过调节培养基中的植物生长激素和蔗糖的质量浓度,确定了匍茎百合不定芽诱导、小鳞茎膨大和生根的最佳培养基。结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS培养基+6-苄氨基嘌呤(6-BA)1.0 mg·L^(-1)+萘乙酸(NAA)0.7 mg·L^(-1)+蔗糖30 g·L^(-1),不定芽诱导系数为2.33,显著高于其他处理组合;最佳小鳞茎膨大培养基为MS培养基+蔗糖60 g·L^(-1),可显著提高小鳞茎的直径和鲜质量;最佳生根培养基为0.5倍浓度的MS培养基+萘乙酸(NAA)0.4 mg·L^(-1)+吲哚丁酸(IBA)0.1 mg·L^(-1),可显著增加根长和根数。用质量分数为0.03%的秋水仙素浸泡18 h,种子的成活率最高,为93.15%,再通过形态学、生理学和流式细胞仪鉴定,最终鉴定出4个四倍体植株和16个嵌合体植株。 展开更多
关键词 匍茎百合 再生体系 不定芽诱导 鳞茎膨大 多倍体育种
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MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感疫苗研究与生产中的应用进展
8
作者 靳莉武 张震宇 +4 位作者 靳冬武 马花 马玉梅 乔自林 王家敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期38-47,共10页
流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒... 流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒研究的不断深入,为了进一步拓展MDCK细胞用于流感病毒研究和工业应用的能力,研究人员开始发展MDCK细胞无血清全悬浮培养技术。通过长期的培养和优化,驯化的MDCK悬浮细胞株可以更好地适应流感病毒的生长环境,提高流感病毒的产量和感染性。总之,MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感病毒研究和工业应用中发挥着重要作用,为流感疫苗生产和抗流感药物研发提供更好的工具。同时也必须重视MDCK细胞的安全性,采取合适的措施来确保其应用的安全性和可靠性。 展开更多
关键词 MDCK细胞 细胞悬浮驯化 无血清培养基 流感疫苗 安全性
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桃金娘花药愈伤组织诱导研究
9
作者 郭佳慧 丰锋 +2 位作者 向星星 干雨露 韩维栋 《中国野生植物资源》 CSCD 2024年第2期59-63,72,共6页
目的:观察桃金娘小孢子不同发育时期的花器外部形态及细胞学特征,找出小孢子发育时期与花器相关性,为花药培养提供细胞学依据,同时探究低温预处理时间和植物生长调节剂组合对花药愈伤组织形成的影响。方法:用游标卡尺测量花蕾形态特征,... 目的:观察桃金娘小孢子不同发育时期的花器外部形态及细胞学特征,找出小孢子发育时期与花器相关性,为花药培养提供细胞学依据,同时探究低温预处理时间和植物生长调节剂组合对花药愈伤组织形成的影响。方法:用游标卡尺测量花蕾形态特征,用显微镜观察小孢子发育时期。接种前低温预处理花蕾0、12、24、48、72 h,采用L9(33)2,4-D(1.0、2.0、3.0 mg/L),6-BA(0.5、1.0、1.5 mg/L),NAA(0.1、0.2、0.3 mg/L)正交实验诱导花药愈伤组织。结果:小孢子处于单核靠边期时,花蕾横径为7.877±0.374 mm,纵径为7.167±0.340 mm,花瓣露出花萼,花药黄色,有浓烈芳香气味。4℃低温预处理花药24 h,诱导率为23.78%,显著高于其他处理。2,4-D是影响桃金娘花药愈伤组织形成的主要因子,配方MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA诱导率为30.82%,显著高于其他处理。结论:桃金娘小孢子各发育时期与花萼位置、花药颜色、花蕾大小密切相关,低温预处理可以提高花药愈伤组织诱导率,适宜的生长调节剂浓度和组合有利于提高花药愈伤组织诱导率。 展开更多
关键词 桃金娘 花药培养 小孢子 发育时期
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基于细胞体外培养筛选最适胎牛血清
10
作者 游小燕 何琦琳 +1 位作者 范骁玲 葛良鹏 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期64-69,共6页
为了探索小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)与猪胎儿成纤维细胞(PFF)对胎牛血清(FBS)的需求差异,以期筛选出最适血清,首先采用两种不同来源的FBS培养Sp2/0和PFF,观察细胞形态、克隆形成,分析细胞活率与数量.结果显示:无论采用国产FBS1还是进口的FBS... 为了探索小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)与猪胎儿成纤维细胞(PFF)对胎牛血清(FBS)的需求差异,以期筛选出最适血清,首先采用两种不同来源的FBS培养Sp2/0和PFF,观察细胞形态、克隆形成,分析细胞活率与数量.结果显示:无论采用国产FBS1还是进口的FBS2培养Sp2/0,其细胞克隆数、细胞数量和活率差异均无统计学意义(p>0.05),但进口FBS2培养的PFF,其细胞克隆数、细胞数量和活率均显著高于国产FBS1(p<0.05).随后用进口FBS2的3个不同批号培养PFF,结果显示:3个批号的FBS2均能促进细胞生长,细胞结构清晰,呈梭形;培养7 d,3个批次的FBS2均有细胞克隆形成,但FBS2-1形成的克隆小,且细胞克隆数极显著低于FBS2-2和FBS2-3(p<0.01);培养10 d,FBS2-1的细胞数量和细胞活率极显著低于FBS2-2和FBS2-3(p<0.01).虽然FBS2-2的细胞克隆数极显著低于FBS2-3(p<0.01),但是FBS2-2的细胞克隆大,且细胞数量极显著高于FBS2-3(p<0.01).结果表明:Sp2/0与PFF对FBS的需求有差异,无论是国产FBS1还是进口FBS2,均能满足Sp2/0体外培养的需要,但PFF在进口FBS2中的生长性能极显著优于国产FBS1,FBS2-2是PFF体外培养的最适血清. 展开更多
关键词 胎牛血清 Sp2/0 猪胎儿成纤维细胞 细胞克隆 细胞活率
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两种奶牛真皮成纤维细胞分离培养方法的比较
11
作者 鲁文赓 袁思琦 +4 位作者 司琳清 田春雨 谢何昕 周继伟 金吉东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2023年第1期41-45,共5页
为了比较两种体外分离和培养奶牛真皮成纤维细胞方法,采集奶牛蹄部真皮组织,通过组织块贴壁法和双酶消化法(胰蛋白酶-Ⅰ型胶原酶)分离原代奶牛真皮成纤维细胞,通过传代培养进一步纯化并扩增。利用显微镜观察细胞形态及生长特性,MTT法用... 为了比较两种体外分离和培养奶牛真皮成纤维细胞方法,采集奶牛蹄部真皮组织,通过组织块贴壁法和双酶消化法(胰蛋白酶-Ⅰ型胶原酶)分离原代奶牛真皮成纤维细胞,通过传代培养进一步纯化并扩增。利用显微镜观察细胞形态及生长特性,MTT法用于绘制细胞生长曲线,利用细胞免疫荧光技术检测其表面标志物,鉴定细胞纯度。倒置显微镜下观察,贴壁后第6天有细胞爬出,形态多呈长梭形,排列紧密呈漩涡状或束状;双酶消化组第2天有长梭形细胞生长,混杂少量上皮细胞生长。生长曲线图表示,组织块贴壁组细胞生长速度较快。免疫化学荧光检测第四代奶牛真皮成纤维细胞,波形蛋白呈阳性表达,角蛋白-18呈阴性表达,表示细胞纯度较高。两种方法均能分离出奶牛真皮成纤维细胞,与双酶消化法相比,组织块贴壁法分离的细胞纯度更高,活性更佳,增殖周期更短,提示组织块贴壁法是分离培养奶牛真皮成纤维细胞的首选方法。 展开更多
关键词 奶牛 蹄叶炎 真皮成纤维细胞 组织块贴壁法 双酶消化法
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长期传代人脐带间充质干细胞的特性及功能 被引量：1
12
作者 黄丽洁 谢云青 +3 位作者 林晓为 陈玮 郑秋红 应敏刚 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期482-488,共7页
目的:探讨传至10代(P10)的人脐带来源间充质干细胞(P10-hUC-MSC)的生物学特性及功能。方法:人脐带来源于厦门弘爱医院(伦理批号:HAXM-MEC-20201012-037-01),分离、收集、培养hUC-MSC并传代培养,收集P1-、P10-hUC-MSC,FCM检测hUC-MSC表型... 目的:探讨传至10代(P10)的人脐带来源间充质干细胞(P10-hUC-MSC)的生物学特性及功能。方法:人脐带来源于厦门弘爱医院(伦理批号:HAXM-MEC-20201012-037-01),分离、收集、培养hUC-MSC并传代培养,收集P1-、P10-hUC-MSC,FCM检测hUC-MSC表型,细胞衰老β-半乳糖苷酶染色法及FCM法检测终末期细胞衰老与凋亡情况,秋水仙碱处理检测细胞染色体稳定性,体外成脂、成骨诱导实验检测其多向分化能力,以不同比例与外周血单个核细胞(PBMC)混合培养后FCM检测T细胞亚群及表型变化。结果:成功分离和培养的P10-hUC-MSC与P1-hUC-MSC的表型相似,表现为CD45、CD34、HLA-DR表达阴性而CD105、CD90阳性率≥95%。终末期的P1-hUC-MSC和P10-hUC-MSC均表现出β-半乳糖苷酶表达阳性和早期凋亡特征,细胞染色体核型一致且保持稳定,未发生转化现象。P1-、P10-hUC-MSC在体外都可被诱导分化成脂肪、成骨细胞。P10-hUC-MSC与PBMC以1∶1混合培养7 d后,可显著上调CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值、CD4^(+)Treg细胞比例和PD-1表达(均P<0.01)。结论:长期传代的P10-hUC-MSC仍然保持其生物学特性和安全性,并具备多向分化能力及免疫调节能力,这为最大限度发挥hUC-MSC的临床放疗损伤修复与预防作用提供了前期实验依据和指导。 展开更多
关键词 人脐带来源间充质干细胞 长期传代 细胞特性 多向分化 免疫调节
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欧洲丁香品种‘Downfield’花序和花序轴愈伤组织诱导和悬浮培养 被引量：1
13
作者 于秋莹 郭苗苗 +5 位作者 许岢昕 刘建斌 王聪 郑健 张克中 张炎 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期47-53,共7页
以欧洲丁香(Syringa vulgaris)花序和花序轴作为外植体,研究基本培养基类型、植物激素类型和质量浓度对欧洲丁香愈伤组织诱导的影响,并通过正交试验研究锥形瓶容积、初始液体培养基体积、旧培养基保留比例、接种质量及抗氧化剂质量浓度... 以欧洲丁香(Syringa vulgaris)花序和花序轴作为外植体,研究基本培养基类型、植物激素类型和质量浓度对欧洲丁香愈伤组织诱导的影响,并通过正交试验研究锥形瓶容积、初始液体培养基体积、旧培养基保留比例、接种质量及抗氧化剂质量浓度对悬浮培养愈伤组织增殖效果的影响。结果表明:最优花序轴愈伤组织诱导培养基为改良型Blaydes+苯基噻二唑基脲(TDZ)0.10 mg/L+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)1 mg/L,最优诱导花序愈伤组织的培养基为MS培养基+TDZ 0.10 mg/L+2,4-D 1 mg/L,诱导率均为100%。2,4-D质量浓度显著影响花序和花序轴愈伤组织诱导率(p<0.05),TDZ与2,4-D联合作用显著影响花序轴愈伤组织诱导率(p<0.05)。悬浮培养的最优组合为锥形瓶容积250 mL、初始液体培养基体积150 mL、旧培养基保留1/4、接种质量7.0 g,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)质量浓度100 mg/L,维生素C(Vc)质量浓度75 mg/L。首次以欧洲丁香花序和花序轴为材料建立了愈伤组织诱导和细胞悬浮培养体系,为后续开展工厂化育苗和遗传转化提供参考。 展开更多
关键词 欧洲丁香 愈伤组织 花序 花序轴 悬浮培养
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基于PGGB途径优化桫椤组织培养繁殖体系研究 被引量：1
14
作者 杨姣 杨卫诚 +3 位作者 吴高殷 车冰洁 梁红飞 周壁波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1488-1498,共11页
为优化桫椤(Alsophila spinulosa)快繁体系,提高其繁殖效率,以桫椤孢子为外植体,通过研究不同生长调节剂对孢子诱导配子体、原叶体绿色球状体(prothallus green globular body,PGGB)诱导、PGGB分化、孢子体生根4个过程的影响,进一步探... 为优化桫椤(Alsophila spinulosa)快繁体系,提高其繁殖效率,以桫椤孢子为外植体,通过研究不同生长调节剂对孢子诱导配子体、原叶体绿色球状体(prothallus green globular body,PGGB)诱导、PGGB分化、孢子体生根4个过程的影响,进一步探讨不同基质对桫椤组培苗移栽的成活效果。结果表明,(1)孢子诱导配子体,1/8 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+蔗糖20 g/L+琼脂10 g/L诱导效果最佳,诱导率64.62%,诱导天数23 d。(2)PGGB诱导,1/2 MS+0.3 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L诱导率达100%,PGGB鲜重1.13 g,增殖倍数11.04,直径2.01 cm。(3)PGGB分化,在1/2 MS+0.3 mg/L KT+0.4 mg/L IBA+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L的分化效果最佳,分化率92.12%,PGGB平均分化芽数41.67个。(4)孢子体生根,孢子体在1/2 MS+1.0 mg/L IBA+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L中的生根率100%。(5)炼苗,组培苗移栽在基质(红壤∶腐殖土∶泥炭土=2∶1∶1)中的成活率为96.3%。桫椤PGGB诱导及其再生体系的建立受植物生长调节剂影响,且基质对桫椤组培苗的成活率差异显著。研究成功构建了1个高效的桫椤繁殖再生体系,为进一步探究桫椤体外培养发育机制、新品种、规模生产及应用提供技术支持。 展开更多
关键词 桫椤 原叶体绿色球状体 孢子 配子体 孢子体
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新生SD大鼠原代海马组织中神经干细胞的培养和鉴定
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作者 张玲娣 赵亮 +2 位作者 由涌 许倩 杨振军 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期795-801,共7页
目的:观察原代海马组织中神经干细胞(NSCs)的形态表现和生长规律,为NSCs提取和培养提供依据。方法:提取新生SD大鼠海马组织中NSCs,观察海马组织中NSCs形态表现,流式细胞术检测海马组织中NSCs纯度,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和EdU蛋白表... 目的:观察原代海马组织中神经干细胞(NSCs)的形态表现和生长规律,为NSCs提取和培养提供依据。方法:提取新生SD大鼠海马组织中NSCs,观察海马组织中NSCs形态表现,流式细胞术检测海马组织中NSCs纯度,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和EdU蛋白表达,细胞计数法和CCK-8法检测NSCs增殖活性。结果:培养第0天海马组织中NSCs以单细胞形式悬浮于培养基中;培养第2天海马组织中NSCs开始聚集成大小不等和形态不规则的细胞团块,悬浮生长;培养第8天神经球大小不一,呈圆形或椭圆形,边界清晰,无明显突起。培养第8天NSCs纯度为76.50%~85.40%。NSCs细胞质中Nestin阳性表达呈绿色,细胞核中EdU阳性表达呈红色,神经球为Nestin与EdU共染细胞构成。培养5~11 d,NSCs处于对数生长期,细胞增殖活性较高。结论:NSCs增殖能力强,培养至第8天时纯度较高,体外培养5~11 d时细胞增殖活性较高。 展开更多
关键词 神经干细胞 海马组织 增殖活性 生长曲线 免疫荧光
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2种圆形微孔板内部流场的CFD数值模拟
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作者 朱建勇 刘秀敏 +1 位作者 陈吴西 李德茂 《化学工程》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期84-89,共6页
为改善96孔板传质率和剪切力低的情况,提出一种带挡板的96孔板模型。基于VOF模型和RNG k-ε模型结合建立了孔板内部的流体动力学模型,利用仿真软件FLUENT对其数值进行模拟。在不同转速下,对其气液交界面面积、气液比表面积、平均液膜传... 为改善96孔板传质率和剪切力低的情况,提出一种带挡板的96孔板模型。基于VOF模型和RNG k-ε模型结合建立了孔板内部的流体动力学模型,利用仿真软件FLUENT对其数值进行模拟。在不同转速下,对其气液交界面面积、气液比表面积、平均液膜传质系数和体积平均气液传质系数等传质相关系数和平均剪切应变率进行对比。模拟结果表明:在不同转速下,带挡板96孔板的体积平均传质系数和剪切应变率都要高于普通96孔板;并且考察了带挡板96孔板在特定转速下不同装液量对其传质性能的影响。模拟结果表明:随着装液量的增加带挡板96孔板的气液传质系数逐渐降低,得出66.56μL为最佳装液量。综上所述,带挡板96孔板有效提高了普通96孔板的传质性能,并为其提供了更好的剪切环境,为孔板的设计和优化提供了参考。 展开更多
关键词 96孔板 计算流体力学 气液传质 剪切
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基于大学生科研创新能力培养的细胞培养实验平台管理探索
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作者 王英 李珍一 赵秋宇 《中国中医药现代远程教育》 2023年第23期178-180,共3页
细胞培养实验平台是进行细胞培养以及细胞相关研究工作的重要场所,是大学生开展科技创新活动的有力依托和平台。文章从高校细胞培养实验平台在大学生科研创新能力培养中存在的问题为切入点,以辽宁中医药大学细胞培养实验平台为例,探讨... 细胞培养实验平台是进行细胞培养以及细胞相关研究工作的重要场所,是大学生开展科技创新活动的有力依托和平台。文章从高校细胞培养实验平台在大学生科研创新能力培养中存在的问题为切入点,以辽宁中医药大学细胞培养实验平台为例,探讨细胞培养实验平台的管理模式,重点从鼓励学生参与细胞培养实验平台的管理、创新实验室培训及准入流程、充分发挥高端大型仪器设备在大学生创新能力培养中的作用三个方面,提出了面向大学生创新能力培养的细胞培养实验平台管理策略。 展开更多
关键词 科研创新能力 细胞培养实验平台 管理 大学教育
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羊致病性大肠杆菌的分离鉴定、毒力基因及耐药基因分析
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作者 白彪慧 黄江 +6 位作者 郭颂 金鑫 邵百卉 刘宇 张泽财 周玉龙 朱战波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2023年第3期29-35,共7页
为了确定某羊场呼吸道症状死亡羊的病因,试验通过对病死羊肺脏等病料进行了细菌分离培养和纯化、动物感染试验、16S rDNA PCR检测和序列分析鉴定;并应用PCR方法对I型菌毛(fimH)、P型菌毛(papC)、α溶血素(hlyA)、毒力岛(eaeA)、外膜蛋白... 为了确定某羊场呼吸道症状死亡羊的病因,试验通过对病死羊肺脏等病料进行了细菌分离培养和纯化、动物感染试验、16S rDNA PCR检测和序列分析鉴定;并应用PCR方法对I型菌毛(fimH)、P型菌毛(papC)、α溶血素(hlyA)、毒力岛(eaeA)、外膜蛋白A(ompA)、致病岛(fyuA)、黏附素相关基因(mat、K99)、耶尔森强毒力岛(irp2)、温度敏感性血细胞凝集素(TSH)等毒力基因进行检测,对氨基糖苷类(aadA1)、喹诺酮类(parC)、四环素类(sul1)、磺胺类(sul2)、氯霉素类(floR、gyrA)、β-内酰胺类(tetA、tetB)等耐药基因进行检测。结果表明该分离株为致病性羊大肠杆菌,分离株携带fimH、ompA、papC、mat四种毒力基因和aadA1、gyrA、parC、sul1、floR 5种耐药基因。研究为有效预防和控制羊大肠杆菌病奠定了基础。 展开更多
关键词 羊 大肠杆菌 毒力基因 耐药基因 致病性 PCR
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电感耦合等离子体发射光谱法测定镍合金中的钼含量
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作者 陈桂鸾 何禹钦 +2 位作者 吴滋舜 潘扬昌 黄义忠 《企业科技与发展》 2023年第9期35-39,共5页
文章利用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定镍合金中的钼含量,通过试料分解试验、镍合金共存元素的干扰试验、内标校正试验、质量稀释法试验、精密度试验,确定ICP-AES法测定镍合金中钼含量的测定条件,使ISO 11435:2011国际标准... 文章利用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定镍合金中的钼含量,通过试料分解试验、镍合金共存元素的干扰试验、内标校正试验、质量稀释法试验、精密度试验,确定ICP-AES法测定镍合金中钼含量的测定条件,使ISO 11435:2011国际标准方法得到改进;采用加标回收、经典化学分析方法比对、标样测试等方法,验证ICP-AES法的准确度。试验结果表明,ICPAES法的相对标准偏差值(RSD)为0~2.00%,加标回收率为91.0%~106.4%,标准样品测试结果满足要求。 展开更多
关键词 电感耦合等离子体发射光谱法 镍合金 钼含量
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人血管周围干细胞成骨分化及Wnt/β-catenin信号通路的调控
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作者 袁维 刘静东 +5 位作者 徐广辉 康健 李富平 王英杰 支中正 李冠武 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第6期866-871,共6页
背景:血管周围干细胞来源于成体脂肪组织,获取容易且干细胞比较均质,具有较强的增殖和多向分化潜能。目的:通过体外、体内实验探讨人血管周围干细胞的成骨分化能力,以及Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:抽脂来源的人脂肪组织,... 背景:血管周围干细胞来源于成体脂肪组织,获取容易且干细胞比较均质,具有较强的增殖和多向分化潜能。目的:通过体外、体内实验探讨人血管周围干细胞的成骨分化能力,以及Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:抽脂来源的人脂肪组织,经荧光激活细胞分选法提取血管周围干细胞,第1代血管周围干细胞进行成骨诱导分化,分为空白对照组、成骨诱导组及Wnt信号通路抑制组,成骨诱导第5天行碱性磷酸酶染色,第10天行茜素红染色,第7天通过Western blot检测Runt相关转录因子2蛋白表达。制备血管周围干细胞复合纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸共聚物支架材料,通过无胸腺小鼠胫骨单皮质缺损模型,研究血管周围干细胞在体内的骨修复效果。结果与结论:①每100 mL脂肪中含有基质血管成分细胞为(1.82±0.32)×10^(7),活细胞占(82.72±5.37)%,经荧光激活细胞分选法分选,血管外膜细胞(CD34^(+)、CD45^(-)、CD146^(-))比例为(17.66±1.05)%、血管外周细胞(CD146^(+)、CD45^(-)、CD34^(-))比例为(7.18±0.52)%,血管周围干细胞体外扩增迅速,10代之内保持较强的增殖能力;②细胞实验显示血管周围干细胞具有成骨分化能力,抑制Wnt信号通路后Runt相关转录因子2表达明显减少,血管周围干细胞成骨分化受到抑制,动物实验进一步证实血管周围干细胞复合支架材料的成骨效果;③结果表明:Wnt/β-catenin信号通路在血管周围干细胞成骨分化中发挥重要作用,血管周围干细胞为骨修复提供一种新的治疗选择。 展开更多
关键词 人脂肪组织 血管周围干细胞 细胞分选法 成骨分化 信号通路
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