目的观察威草胶囊对尿酸性肾病大鼠肾组织miR-29a和miR-30c表达的影响,探讨威草胶囊降血尿酸和肾保护作用的具体机制。方法将50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌呤醇组、威草胶囊小剂量组、威草胶囊大剂量组,每组10只。...目的观察威草胶囊对尿酸性肾病大鼠肾组织miR-29a和miR-30c表达的影响,探讨威草胶囊降血尿酸和肾保护作用的具体机制。方法将50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌呤醇组、威草胶囊小剂量组、威草胶囊大剂量组,每组10只。正常组给予普通饲料喂养,其余4组均给予高嘌呤饲料喂养,在给予高嘌呤饲料后的第20天停用高嘌呤饲料,均改用普通饲料喂养。正常组和模型组每日给予蒸馏水2 m L灌胃,别嘌呤醇组给予别嘌呤醇0.05 g/(kg·d)灌胃,威草胶囊小剂量组、大剂量组分别给予威草胶囊0.9g/(kg·d)、1.8 g/(kg·d)灌胃,共4周。4周后处死大鼠,检测血清UA、BUN、SCr水平;摘取双侧肾脏,做HE染色、Masson染色,免疫组织化学方法检测CTGF、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表达情况,实时荧光定量PCR法测定大鼠肾组织中miR-29a和miR-30c表达情况。结果模型组大鼠血清UA、BUN、SCr水平均明显高于正常组(P均<0.05);别嘌呤醇组血清UA水平明显低于模型组(P<0.05),威草胶囊小剂量组、大剂量组血清UA、BUN、SCr水平均明显低于模型组(P均<0.05);威草胶囊大剂量组血清UA、BUN水平均明显低于别嘌呤醇组(P均<0.05),威草胶囊小剂量组血清UA、BUN、SCr水平与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。HE染色、Masson染色:正常组少量肾组织纤维化,纤维化程度轻;模型组纤维化区域增多,纤维化程度重;别嘌呤醇组肾组织纤维化改变不明显;威草胶囊小剂量组和大剂量组肾组织间质纤维化程度明显减轻,威草胶囊大剂量组接近正常。模型组大鼠肾组织中CTGF、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表达量均明显高于正常组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组和大剂量组CTGF、ColⅠ、ColⅢ表达量和威草胶囊大剂量组TGF-β1表达量均明显低于模型组和别嘌呤醇组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组CTGF、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表达量与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组大鼠肾组织中miR-29a、miR-30c表达水平均明显低于正常组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组和大剂量组miR-29a、miR-30c表达水平均明显高于模型组(P均<0.05),别嘌呤醇组与模型组比较差异无统计学意义(P均>0.05);威草胶囊大剂量组miR-29a、miR-30c表达水平均明显高于别嘌呤醇组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组miR-29a、miR-30c表达水平与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论威草胶囊可改善尿酸性肾病大鼠的肾功能,减轻肾组织纤维化程度,与其升高肾组织miR-29a、miR-30c的表达水平,降低TGF-β1、CTGF的表达,减少ColⅠ、ColⅢ的生成有关,别嘌呤醇不具有此作用。展开更多
目的探讨淫羊藿总黄酮(total flavones of epimedium,TFE)调控miR-34a-5p保护脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的成骨细胞损伤的作用机制。方法建立LPS诱导的大鼠成骨细胞模型,给予TFE含药血清,MTT法检测成骨细胞活性。构建荧光素酶...目的探讨淫羊藿总黄酮(total flavones of epimedium,TFE)调控miR-34a-5p保护脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的成骨细胞损伤的作用机制。方法建立LPS诱导的大鼠成骨细胞模型,给予TFE含药血清,MTT法检测成骨细胞活性。构建荧光素酶报告基因,检测荧光活性,脂质体瞬时转染miR-34a-5p模拟物和抑制剂。RT-PCR分析转染前后miR-34a-5p、SMAD2、ALP、RUNX2mRNA的表达,Western blot检测SMAD2、RUNX2、ALP蛋白表达。结果TFE能提高LPS诱导的成骨细胞活性,促进RUNX2、ALP蛋白表达(P<0.01)。TFE在LPS诱导的成骨细胞中可促进miR-34a-5p的表达,抑制SMAD2的mRNA及蛋白表达水平。miR-34a-5p转染细胞后,显著降低荧光素酶报告基因的活性,促进成骨细胞RUNX2、ALP的蛋白表达。抑制miR-34a-5p可促进成骨细胞SMAD2mRNA及蛋白表达,并抑制成骨因子的表达(P<0.05),逆转了TFE对LPS诱导的成骨细胞损伤的保护作用。结论TFE通过调控miR-34a-5p与SMAD2相互作用,减轻LPS诱导的成骨细胞损伤。展开更多
文摘目的观察威草胶囊对尿酸性肾病大鼠肾组织miR-29a和miR-30c表达的影响,探讨威草胶囊降血尿酸和肾保护作用的具体机制。方法将50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌呤醇组、威草胶囊小剂量组、威草胶囊大剂量组,每组10只。正常组给予普通饲料喂养,其余4组均给予高嘌呤饲料喂养,在给予高嘌呤饲料后的第20天停用高嘌呤饲料,均改用普通饲料喂养。正常组和模型组每日给予蒸馏水2 m L灌胃,别嘌呤醇组给予别嘌呤醇0.05 g/(kg·d)灌胃,威草胶囊小剂量组、大剂量组分别给予威草胶囊0.9g/(kg·d)、1.8 g/(kg·d)灌胃,共4周。4周后处死大鼠,检测血清UA、BUN、SCr水平;摘取双侧肾脏,做HE染色、Masson染色,免疫组织化学方法检测CTGF、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表达情况,实时荧光定量PCR法测定大鼠肾组织中miR-29a和miR-30c表达情况。结果模型组大鼠血清UA、BUN、SCr水平均明显高于正常组(P均<0.05);别嘌呤醇组血清UA水平明显低于模型组(P<0.05),威草胶囊小剂量组、大剂量组血清UA、BUN、SCr水平均明显低于模型组(P均<0.05);威草胶囊大剂量组血清UA、BUN水平均明显低于别嘌呤醇组(P均<0.05),威草胶囊小剂量组血清UA、BUN、SCr水平与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。HE染色、Masson染色:正常组少量肾组织纤维化,纤维化程度轻;模型组纤维化区域增多,纤维化程度重;别嘌呤醇组肾组织纤维化改变不明显;威草胶囊小剂量组和大剂量组肾组织间质纤维化程度明显减轻,威草胶囊大剂量组接近正常。模型组大鼠肾组织中CTGF、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表达量均明显高于正常组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组和大剂量组CTGF、ColⅠ、ColⅢ表达量和威草胶囊大剂量组TGF-β1表达量均明显低于模型组和别嘌呤醇组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组CTGF、TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ表达量与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组大鼠肾组织中miR-29a、miR-30c表达水平均明显低于正常组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组和大剂量组miR-29a、miR-30c表达水平均明显高于模型组(P均<0.05),别嘌呤醇组与模型组比较差异无统计学意义(P均>0.05);威草胶囊大剂量组miR-29a、miR-30c表达水平均明显高于别嘌呤醇组(P均<0.05);威草胶囊小剂量组miR-29a、miR-30c表达水平与威草胶囊大剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论威草胶囊可改善尿酸性肾病大鼠的肾功能,减轻肾组织纤维化程度,与其升高肾组织miR-29a、miR-30c的表达水平,降低TGF-β1、CTGF的表达,减少ColⅠ、ColⅢ的生成有关,别嘌呤醇不具有此作用。
文摘目的探讨miR-377-5p通过下调VEGF-C对结肠癌的血管和淋巴管生成的影响研究。方法该实验分为3组,miR-377-5p干扰组、miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组。采用实时荧光RT-PCR、Western blot、CCK-8、流式细胞、细胞划痕、Transwell、血管生成实验检测miR-377-5p m RNA和蛋白表达、细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、血管和淋巴管生成。结果与正常结肠组织对比,结肠癌组织中miR-377-5p m RNA和miR-377-5p蛋白的表达明显低于正常结肠组织(均P<0.05);与miR-377-5p干扰组相比,miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组中的m RNA及蛋白显著升高(均P<0.05),与miR-377-5p阴性对照组相比,miR-377-5p过表达组的m RNA及蛋白明显增加(P<0.05);与miR-377-5p干扰组相比,miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞增殖能力明显降低(P<0.05),与miR-377-5p阴性对照组相比,miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞增殖能力显著降低(P<0.05);与miR-377-5p干扰组相比,miR-377-5p阴性对照组和miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞增殖凋亡明显升高(P<0.05),与miR-377-5p阴性对照组相比,miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞凋亡能力显著升高(P<0.05);伤口愈合实验显示,miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞的迁移能力显著低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P<0.05);miR-377-5p过表达组的结肠癌细胞的侵袭能力也明显低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P <0.05);miR-377-5p过表达组的VEGF-A、VEGF-C和P-Akt、VEGFR-3蛋白水平显著低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P<0.05);miR-377-5p过表达组的MVD(微血管密度)和LMVD(淋巴微血管密度)显著低于miR-377-5p干扰组和miR-377-5p阴性对照组(P<0.05)。结论 miR-377-5p在结肠癌中低表达,抑制了结肠癌细胞的增殖、细胞迁移和侵袭,促进了结肠癌细胞的凋亡能力,并直接靶向VEGF-C抑制肿瘤的血管和淋巴管生成。
文摘目的探讨淫羊藿总黄酮(total flavones of epimedium,TFE)调控miR-34a-5p保护脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的成骨细胞损伤的作用机制。方法建立LPS诱导的大鼠成骨细胞模型,给予TFE含药血清,MTT法检测成骨细胞活性。构建荧光素酶报告基因,检测荧光活性,脂质体瞬时转染miR-34a-5p模拟物和抑制剂。RT-PCR分析转染前后miR-34a-5p、SMAD2、ALP、RUNX2mRNA的表达,Western blot检测SMAD2、RUNX2、ALP蛋白表达。结果TFE能提高LPS诱导的成骨细胞活性,促进RUNX2、ALP蛋白表达(P<0.01)。TFE在LPS诱导的成骨细胞中可促进miR-34a-5p的表达,抑制SMAD2的mRNA及蛋白表达水平。miR-34a-5p转染细胞后,显著降低荧光素酶报告基因的活性,促进成骨细胞RUNX2、ALP的蛋白表达。抑制miR-34a-5p可促进成骨细胞SMAD2mRNA及蛋白表达,并抑制成骨因子的表达(P<0.05),逆转了TFE对LPS诱导的成骨细胞损伤的保护作用。结论TFE通过调控miR-34a-5p与SMAD2相互作用,减轻LPS诱导的成骨细胞损伤。
