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恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体的构建与鉴定
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作者 赵方 陈鹏 +4 位作者 焦剑 胡明道 黄明 刘锋 许晔凯 《西部医学》 2018年第7期943-947,共5页
目的构建恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体,观察MyD88siRNA对树突状细胞中MyD88蛋白表达的影响。方法将合成的MyD88RNAi片段与质粒载体连接,转化进化学感受态的大肠杆菌,然后进行菌落PCR鉴定、阳性克隆测序及质粒的抽提;然后转染HEK... 目的构建恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体,观察MyD88siRNA对树突状细胞中MyD88蛋白表达的影响。方法将合成的MyD88RNAi片段与质粒载体连接,转化进化学感受态的大肠杆菌,然后进行菌落PCR鉴定、阳性克隆测序及质粒的抽提;然后转染HEK293细胞,将获得的重组腺病毒进行两轮扩增后进行纯化;用终点稀释法测定腺病毒滴度;Western blot检测MyD88siRNA对树突状细胞中MyD88蛋白表达的作用。结果阳性克隆PCR鉴定与理论条带一致,测序鉴定通过,腺病毒载体转染树突状细胞,Western blot检测显示干扰组MyD88蛋白表达降低。结论成功构建恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体,MyD88siRNA对恒河猴树突状细胞中的MyD88蛋白表达具有抑制作用。 展开更多
关键词 恒河猴 MYD88 SIRNA 腺病毒载体
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